陳鳳超　楊俊革　侯俊杰　顏彤彤　張思婭

[摘要]目的：觀察富血小板血漿（PRP）對脂肪顆粒移植于BALB/C裸鼠背部皮下成活率的影響，并分析其臨床效果。方法：將人體抽吸的脂肪顆粒（2.0m1）單獨/聯(lián)合PRP分別注射于10只BALB/C裸鼠背部對稱部位皮下，4周后將移植脂肪組織取出，測量其體積，分成單純脂肪顆粒組和脂肪顆粒聯(lián)合PRP組，并對兩組脂肪團(tuán)分別進(jìn)行HE染色和免疫組織化學(xué)染色，計算微血管密度。同期將自體脂肪顆粒聯(lián)合PRP移植進(jìn)行面部輪廓重塑及乳房的填充，觀察其臨床效果。結(jié)果：術(shù)后4周，脂肪顆粒聯(lián)合PRP組的脂肪組織體積明顯大于單純脂肪顆粒組的脂肪組織體積，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.721，P<0.01）；脂肪顆粒聯(lián)合PRP組的脂肪組織中CD31表達(dá)及微血管密度均明顯高于單純脂肪顆粒組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.027，P<0.01）；122例臨床病例隨訪6個月，患者滿意度達(dá)（84.27±1.81）%。結(jié)論：PRP對脂肪顆粒移植成活率有明顯的促進(jìn)作用，臨床應(yīng)用效果良好。

[關(guān)鍵詞]富血小板血漿（PRP）；脂肪移植；面部輪廓重塑；隆乳術(shù)

[中圖分類號]R62.2 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號]1008-6455（2017）06-0075-04

由于自 體脂組織柔軟，無排斥反應(yīng)，取材簡單，供區(qū)創(chuàng)傷小，易于塑形等特點已被廣泛應(yīng)用于整形美容外科，如面部輪廓重塑、隆鼻、隆乳及各種原因?qū)е碌慕M織缺損等。但隨著自體脂肪移植的廣泛應(yīng)用，脂肪組織存活率低，遠(yuǎn)期效果的不確定性嚴(yán)重阻礙了自體脂肪移植技術(shù)的廣泛開展，如何提高自體脂肪顆粒移植的存活率成為美容整形外科亟待解決的重要研究課題。富血小板血漿（platelet rich plasma，PRP）是由全血經(jīng)過梯度離心、分離所得的富含高濃度血小板的血漿。PRP激活后即可釋放多種組織生長需要的多種生長因子，具有改善組織成活、促進(jìn)血管再生的作用。但PRP是否能增加脂肪顆粒移植成活率卻說法不一。因此，本研究通過將人單純脂肪顆粒和脂肪顆粒聯(lián)合PRP分別移植于BALB/C裸鼠的背部皮下觀察脂肪成活率，探究PRP對脂肪組織影響的可能機制，并結(jié)合臨床研究觀察自體脂肪顆粒聯(lián)合PRP移植的臨床效果。

1資料和方法

1.1實驗動物：SPF級BALB/c裸鼠10只，均為雄性，鼠齡6～7周，體重20～22g，購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司（合格證號：215000534856）。嚴(yán)格飼養(yǎng)于SPF級動物實驗室中，室溫保持在20℃～26℃，濕度保持在50%～55%，光照周期明暗交替（12/12h），所用墊料與飲用水均經(jīng)高壓滅菌處理，飼料經(jīng)60Co照射。

1.2主要儀器：600A型低速離心機（北京白洋醫(yī)用離心機有限公司），VD 1320潔凈工作臺（德國Hermle），手術(shù)刀柄、刀片，巾鉗，持針器，有齒鑷，藥杯，彎盤，縫合針，蚊式鉗，消毒鉗，剪刀，眼科剪，眼科鑷，縫合線等。

1.3主要試劑及藥品：10%CaCl₂，人抗CD31單克隆抗體ELISA試劑盒（北京達(dá)科為生物技術(shù)有限公司），蘇木精染色液、伊紅染色液（廣州市欣源貿(mào)易有限公司批號分別為474077、C0109）。

1.4臨床資料：入組患者共122例，其中女性113例，男性9例；年齡22～50歲，平均年齡（35.22±7.47）歲。采用脂肪顆粒聯(lián)合PRP注射對面部輪廓進(jìn)行塑形和乳房填充，部分患者進(jìn)行單一或?qū)ΨQ部位注射填充，其中額部33例，雙側(cè)顳部49例，雙側(cè)淚溝53例，雙側(cè)鼻唇溝46例，雙側(cè)乳房16例。

1.5方法

1.5.1脂肪獲?。汗﹨^(qū)主要選擇大腿外側(cè)或腰腹等脂肪明顯堆積部位。根據(jù)估計所需脂肪量的多少以及患者對疼痛的敏感情況選擇腫脹液局部麻醉或強化+腫脹液局部麻醉，應(yīng)用直徑2mm注水針將腫脹液（2%利多卡因20ml+1：1000腎上腺素1ml+0.9%氯化鈉溶液1000m1）均勻注入供區(qū)皮下，至局部發(fā)白呈橘皮樣改變。面部填充一般使用直徑2.5mm鈍頭吸脂針，手動注射器脂肪抽吸；自體脂肪隆乳多采用吸脂機（負(fù)壓80kPa左右）進(jìn)行脂肪抽吸。對所抽吸脂肪顆粒用0.9%生理鹽水清洗，采取靜置自然分層去除表層油脂及下層血水混合物。制備好的脂肪顆粒放置于冰塊上備用。

1.5.2PRP制備：肘靜脈采血，加入與全血比例為1：16的4.0%的枸櫞酸。分兩次離心，第一次以200g的離心力離心10min，取中間層于另一潔凈離心管中，再以同樣200g的離心力離心10min，吸取上清液即為PRP。使用前按10：1的比例加入10%CaCl₂。PRP與脂肪顆粒懸液的比例，用于面部填充為l：4，用于隆乳為1：20。

1.5.3動物模型制備：BALB/c裸鼠稱重，腹腔注射3.5%水合氯醛（0.01ml/g）麻醉。背部術(shù)區(qū)碘伏消毒，用18G注射針頭分別于背部兩側(cè)對稱部位刺破皮膚，之后用20G脂肪移植針將2.0ml脂肪顆粒+0.5ml生理鹽水及2.0ml脂肪顆粒+0.5ml PRP分別注射到BALB/C裸鼠背部兩側(cè)皮下。

1.5.4動物實驗檢測指標(biāo)：脂肪顆粒移植術(shù)后4周，嚴(yán)格無菌條件下取出BALB/C裸鼠背部移植脂肪組織，測量體積后分成單純脂肪顆粒組和脂肪顆粒+PRP組。兩組脂肪組織經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋。每組標(biāo)本再分為兩組，一組進(jìn)行HE染色，并于顯微鏡下觀察；另一組切0.5Pm薄片，用抗CD31單克隆抗體對移植組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，先用低倍光學(xué)顯微鏡觀察，選擇CD31陽性表達(dá)密度較高的6個區(qū)域，在高倍鏡下計數(shù)血管數(shù)，計算微血管密度（MicroVessel Density，MVD）（每平方毫米的微血管數(shù)目）。

1.5.5臨床應(yīng)用：①面部輪廓重塑：受區(qū)常規(guī)消毒鋪無菌巾單，一般選擇發(fā)際緣內(nèi)、自然皺褶等較為隱蔽且避開血管、神經(jīng)走形的部位進(jìn)針，以18G注射器針頭刺破皮膚，20G脂肪移植針將脂肪顆粒以點線狀，多層次均勻注射于受區(qū)，注射完畢適當(dāng)按摩使脂肪顆粒均勻分布，無需任何包扎；②自體脂肪顆粒隆乳：主要均勻注射于乳房皮下、乳腺后、胸大肌下，避免注射到腺體組織內(nèi)，注射完成后乳房可用無鋼圈胸衣適當(dāng)托起，亦無須包扎。建議口服抗生素3d以預(yù)防感染。隨訪半年，以患者滿意度和是否需要二次填充評價手術(shù)效果。endprint