高鴻敏,杜玉國,高進遼

肺癌居惡性腫瘤死因的第一位，病死率上升幅度居各類腫瘤之首[1]。非小細胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的80%以上，且目前缺乏有效的早期診斷手段，患者就診時多為中晚期，預后極差[2]。尋找早期診斷的標記物及治療的新靶點是該領域的研究重點之一。尾加壓素Ⅱ(urotensin-Ⅱ， UⅡ)是一種新型血管活性肽，其除了具有很強的縮血管作用外，還具有促進氣道平滑肌及腫瘤細胞增殖和刺激血管生成的作用[3],在肺癌、腎上腺皮質癌、腎透明細胞癌、嗜鉻細胞瘤等組織中均有表達[4-7]，且具有一定的種屬差異性。UⅡ作為強有力的有絲分裂原刺激劑在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮的病理生理作用值得進一步探究。本研究探究UⅡ在NSCLC血漿與組織中的表達情況?，F報告如下。

1 材料與方法

1.1臨床資料 選擇2009年1月—2011年1月陸軍總醫(yī)院收治的NSCLC 75例的血漿和手術切除組織標本作為肺癌組。入選標準：①均經病理學確診為NSCLC的患者；②入選前均未進行過放療及化療等抗腫瘤治療；③不伴有高血壓、嚴重動脈粥樣硬化、腦梗死等心、腦、腎和代謝、內分泌系統(tǒng)疾??；④取材前均取得患者及家屬同意，符合倫理要求。男51例，女24例，年齡40～81(62.88±5.28)歲；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期27例，Ⅲ期28例，Ⅳ期5例;遠處轉移(包括同側或對側非原發(fā)腫瘤所在葉的肺內轉移及遠處臟器)39例，其中雙側肺轉移8例，骨轉移15例，肝轉移4例，兩個以上部位多發(fā)轉移12例；無遠處轉移36例。組織病理學分類參照WHO標準(2015年)[8]，其中大細胞癌15例，腺癌29例，鱗癌31例;匹配的血漿標本在獲取組織標本前清晨采空腹血2 ml，血標本加入含10% EDTA、抑肽酶的抗凝試管中，充分混勻后4℃下2000 r/min離心15 min，分離出血漿，-70℃冰箱保存待測。選擇2012年1月—2015年1月陸軍總醫(yī)院體檢的健康者30例為健康對照組，男18例，女12例，年齡38～76(59.94±6.06)歲。選擇同期住院肺良性病變38例作為肺良性病變組，男24例，女14例，年齡37～85(61.87±6.12)歲，其中慢性阻塞性肺疾病17例，肺炎14例，支氣管擴張4例，肺間質纖維化3例。選擇我院2009—2011年胸外科手術切除的33例肺炎性假瘤作為組織良性對照組，入選病例均不伴有高血壓、嚴重動脈粥樣硬化、腦梗死等心、腦、腎系統(tǒng)和代謝、內分泌疾病。4組性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1血漿組：采用放射免疫分析法(RIA)測定每個血漿標本中UⅡ的含量。UⅡ放射免疫試劑盒由美國SIGMA公司提供。按試劑盒說明書進行操作。主要儀器：695B-γ自動計數儀。

1.2.2組織組：采用免疫組化法觀察75例NSCLC組織及33例肺炎性假瘤組織中UⅡ的表達情況。以細胞膜或細胞質內出現棕黃色顆粒者為陽性細胞，未見著色細胞者為陰性。切片中隨機觀察4個高倍視野，每個視野觀察100個細胞，記錄陽性細胞數所占觀察細胞總數百分比，并取4個高倍視野陽性細胞百分比平均值,平均陽性細胞百分比>25 %確定為陽性[9]。

2 結果

2.1血漿和組織UⅡ含量 NSCLC組、肺良性病變組、健康對照組血漿UⅡ含量分別為(4.019±0.928)、(2.995±0.922)、(2.126±0.689)pmol/L。NSCLC組和肺良性病變組血漿UⅡ含量高于健康對照組，且NSCLC組高于肺良性病變組(P<0.05，P<0.01)。NSCLC組和肺炎性假瘤組UⅡ表達陽性率分別為60.0%(45/75)和12.1%(4/33)。NSCLC組UⅡ表達陽性率高于肺炎性假瘤組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=12.857，P<0.01)。

2.2不同病理類型NSCLC血漿和組織UⅡ含量比較 腺癌組、鱗癌組、大細胞肺癌組血漿UⅡ含量分別為(4.049±0.875)、(3.228±0.845)、(2.767±1.338)pmol/L。腺癌組、鱗癌組血漿UⅡ含量高于大細胞肺癌組，且腺癌組高于鱗癌組(P<0.05，P<0.01)。免疫組化標記顯示，UⅡ主要分布于NSCLC細胞的細胞質中，呈棕黃色顆粒，其中腺癌組UⅡ陽性表達率高達100%(29/29)；鱗癌組UⅡ陽性表達率為38.7%(12/31)；大細胞癌組UⅡ陽性表達率為40.0%(6/15)。見圖1。腺癌組UⅡ陽性表達率高于鱗癌組、大細胞癌組(P<0.01)，而鱗癌組和大細胞肺癌組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.3NSCLC血漿和組織中UⅡ表達與有無遠處轉移及TNM分期的關系 NSCLC組中有遠處轉移者、無遠處轉移者血漿UⅡ含量分別為(3.875±1.966)、(3.273±1.485)pmol/L。NSCLC組有遠處轉移者血漿UⅡ含量明顯高于無遠處轉移者(P<0.05)。NSCLC組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者組織中UⅡ表達陽性率分別為13.3%(2/15)、51.9%(14/27)、85.7%(24/28)、80.0%(4/5)。NSCLC組中Ⅰ期UⅡ表達陽性率明顯低于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)；Ⅰ期與Ⅱ期比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期兩兩比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

UⅡ在血管收縮和內皮功能不良相關疾病如心力衰竭、高血壓、腎臟疾病、重度子癇、慢性阻塞性肺疾病急性加重期、糖尿病血管并發(fā)癥和動脈粥樣硬化中發(fā)揮一定的作用[10-16]。近年來研究還發(fā)現，UⅡ及其受體(UT-R)廣泛分布于多種腫瘤細胞株和腫瘤組織中，與腎癌、嗜鉻細胞瘤等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關，但具體作用機制尚未完全闡明，可能與其促細胞增殖、血管生成作用有關。

目前國內外尚無同時報道UⅡ在NSCLC血漿和組織中表達的文獻。Morimoto等[5]研究報道，UⅡ在腎上腺皮質瘤組織中高度表達，但在瘤旁正常腎上腺皮質組織中UⅡ表達極弱甚至檢測不到，還發(fā)現，UⅡ及其受體在腎上腺皮質腺瘤和腎上腺皮質癌組織中表達差異無顯著性，且UⅡ免疫反應強弱程度與腎上腺皮質癌組織病理學分型無顯著相關性。由此推測，對于腎上腺皮質腫瘤，UⅡ可能不具有惡性化潛能。本研究結果表明，NSCLC組血漿UⅡ含量高于健康對照組和肺良性病變組；UⅡ主要分布于腫瘤細胞的細胞質中，呈棕黃色顆粒，NSCLC組組織陽性表達率亦明顯高于肺炎性假瘤組，血漿和組織表達趨勢基本一致。提示NSCLC細胞可自身合成、分泌UⅡ，并通過自分泌和(或)旁分泌的方式，直接或間接維持和促進腫瘤細胞增殖，并有可能作為腫瘤產物抑制宿主免疫反應，更有利于腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視。

本研究發(fā)現腺癌患者血漿和組織UⅡ含量均高于其他類型NSCLC，尤其是UⅡ在腺癌組織中的陽性表達率最高。提示UⅡ的表達與病理類型相關，血漿和組織UⅡ表達趨勢一致，且NSCLC尤其是腺癌中可能有自分泌環(huán)路的存在，UⅡ能激活自分泌和(或)旁分泌生長刺激信號通路，刺激腫瘤細胞增殖及分化。Federico等[17]報道UⅡ在結腸癌細胞中高度表達，結腸癌主要以腺癌為主，提示UⅡ在腺癌中具有特異性高表達，是否可作為一種新的肺腺癌腫瘤標記物值得深入研究。本研究結果顯示，NSCLC組有遠處轉移者血漿UⅡ含量高于無遠處轉移者，Ⅰ期患者組織中UⅡ表達陽性率低于Ⅲ、Ⅳ期，但Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義。提示有遠處轉移的NSCLC患者血漿和組織UⅡ表達水平較無遠處轉移組明顯增高，且陽性表達水平與臨床分期及預后相關，臨床分期越晚，浸潤范圍越廣，UⅡ陽性表達水平越高，臨床預后也就越差。

UⅡ可能是一種新發(fā)現的腫瘤轉移相關因子，參與了肺癌的侵襲和轉移。劉振玉等[18]報道，UⅡ在肺癌組織中的表達量高于對照組，遠處轉移的晚期肺癌患者高于無遠處轉移者，但UⅡ水平與肺癌病理類型無關。本研究結果與其不一致?？紤]原因為，腺癌具有高度浸潤和破壞性生長特征，易侵犯血管和淋巴管壁，而出現較多的血行及淋巴轉移。轉移是惡性腫瘤患者死亡的主要原因,惡性腫瘤細胞無限侵襲性增殖及其轉移依賴于血管生成，這些新生成的血管將不斷生長的腫瘤和循環(huán)系統(tǒng)直接連接起來，使其供給腫瘤生長需要的物質。UⅡ作為近年新發(fā)現的血管活性肽，具有血管活性及促進有絲分裂的雙重作用，相比較其他惡性腫瘤，對NSCLC尤其是腺癌的侵襲性生長和轉移的惡性潛能明顯增加，可以作為監(jiān)測肺腺癌惡性生長的一個分子標志物，檢測UⅡ表達對肺癌的診斷及預后評價有一定的實用價值。

UⅡ特異性受體拮抗劑的研究對了解UⅡ及其受體的生理特性，探索其治療作用十分重要。研究證實，UⅡ受體拮抗劑Palosuran(ACT-058362)能提高糖尿病小鼠生存率，增加胰島素分泌，延緩血糖、糖化血紅蛋白和血脂升高[19]，但其在肺癌診治的研究目前尚未見報道，相信隨著其受體拮抗劑的深入研究，對NSCLC尤其是腺癌的治療有重要意義。

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