有小娟， 劉家揚(yáng)*， 焦國寶

(1.黃淮學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，河南 駐馬店 463000；2.河南仰韶生化工程有限公司，河南 三門峽 472400)

黑曲霉(Aspergillusniger)是一種世界性曲霉屬真菌，由于具有外源基因表達(dá)能力強(qiáng)、遺傳穩(wěn)定性高、高產(chǎn)和高安全性等優(yōu)點(diǎn)，已成為工業(yè)上一種重要的發(fā)酵菌種[1]，用以生產(chǎn)很多產(chǎn)量高、用途廣的發(fā)酵產(chǎn)品，如糖化酶、蔗糖酶、蛋白酶、脂肪酶、阿魏酸酯酶、纖維素酶、阿拉伯木聚糖酶等，可應(yīng)用于食品、飼料、醫(yī)藥和輕工紡織業(yè)等行業(yè)[2-6]；葡萄糖酸、檸檬酸、沒食子酸等有機(jī)酸，可應(yīng)用于食品添加劑行業(yè)等領(lǐng)域[7-9]；同時(shí)作為一種絲狀真菌，因其對重金屬離子優(yōu)良的生物吸附性能，可用于環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域。近年我國發(fā)酵行業(yè)得到了長足的發(fā)展，其中用黑曲霉制備生物產(chǎn)品的項(xiàng)目不斷增多，盡管目前國內(nèi)黑曲霉菌渣年產(chǎn)量無法準(zhǔn)確獲得，但可估算其產(chǎn)量相當(dāng)巨大，如河南仰韶生化工程有限公司生產(chǎn)糖化酶年產(chǎn)6 000 t粉劑項(xiàng)目，黑曲霉菌渣年產(chǎn)量可達(dá)9 000 t。發(fā)酵后的菌渣濕重約占發(fā)酵液總量的2%～3%，含有蛋白質(zhì)、纖維素、細(xì)胞酶等多種營養(yǎng)物質(zhì)和有效成分。過去對菌渣的處理一般采取露天堆積一段時(shí)間后被直接填埋，造成了環(huán)境污染及生物資源的浪費(fèi)。近年來關(guān)于黑曲霉菌渣的研究逐漸增多，主要集中于菌渣的高附加值轉(zhuǎn)化與利用，涉及菌渣營養(yǎng)成分分析及飼用研究，甲殼素、殼聚糖、細(xì)胞酶類、麥角甾醇等有用成分的提取工藝研究，以及作為有機(jī)肥料和生物吸附劑研究等，為黑曲霉菌渣的綜合利用及企業(yè)創(chuàng)收做了積極探索。

1 黑曲霉菌渣成分的研究

1.1 菌渣營養(yǎng)成分

黑曲霉在發(fā)酵過程中通過新陳代謝作用富集了發(fā)酵液中的各種營養(yǎng)成分，發(fā)酵后的過濾菌渣包含少量培養(yǎng)基和大部分黑曲霉菌絲體的固體殘?jiān)?，因此使得菌渣中含有多種營養(yǎng)成分，其中干物質(zhì)含量約97%，粗蛋白約10%，粗脂肪約4%，粗纖維約14.5%，粗灰分約21%，總糖約32.6%，并富含Ca、P、Mg、Fe、K、Na 等多種礦物元素，各種營養(yǎng)成分的含量與幾種飼料原料的基本營養(yǎng)成分比較見圖1和表1，菌渣中可檢出的有害重金屬不論種類還是含量都比較少，可達(dá)到國家相關(guān)安全控制與排放標(biāo)準(zhǔn)[10-12]，因此黑曲霉菌渣可以作為家畜家禽的飼料原料，也可以菌渣還田，作為有機(jī)肥料的原材料，并能節(jié)約生產(chǎn)成本。

圖1 黑曲霉菌渣與幾種飼料原料基本營養(yǎng)成分含量比較[13-15]Fig.1 Comparison of basic nutrients content about Aspergillus niger biomass waste with several feed ingredients[13-15]

礦物質(zhì)含量Mn21.13mg·kg-1Mg516.00mg·kg-1Fe631.8mg·kg-1Al706.4mg·kg-1As6.04mg·kg-1Ni7.76mg·kg-1Cu26.75mg·kg-1Cr18.48～28.48mg·kg-1Zn33.28mg·kg-1Ca0.13%P0.27%～23.42%K0.30%Na13.41%

1.2 菌渣有效成分研究現(xiàn)狀

1.2.1 粗蛋白 黑曲霉菌渣中含有豐富的粗蛋白成分，將粗蛋白提取可以獲得大量有價(jià)值的飼料蛋白，成為一種新的增加飼料蛋白含量的有效途徑。目前測定蛋白質(zhì)含量常用的方法主要有四種：凱氏定氮法、雙縮脲試劑法、Folin-酚試劑法(Lowry法)和考馬斯亮藍(lán)法。Jernejc等[16]利用這四種方法測定了從黑曲霉菌絲體中提取的粗蛋白含量，發(fā)現(xiàn)雙縮脲試劑法更適用于菌絲體中蛋白質(zhì)含量的測定，Lowry法測定的結(jié)果偏低，而考馬斯亮藍(lán)法不適用于菌絲體中蛋白質(zhì)含量的測定。劉軍[17]從以黑曲霉為發(fā)酵菌種的檸檬酸發(fā)酵廢液中提取得到單細(xì)胞蛋白，當(dāng)提取條件為殼聚糖濃度90 mg/kg廢液、廢液溫度45 ℃、pH 4.5、攪拌20 min時(shí)，單細(xì)胞蛋白提取率可達(dá)97.8%，廢液COD值減少31.7%。

1.2.2 殼聚糖 殼聚糖(Chitosan)是甲殼素脫乙酰基度超過55%的衍生物，具有無毒、可被生物降解和生物相容性好的特點(diǎn)[18]。甲殼素和殼聚糖的結(jié)構(gòu)式見圖2和圖3。在自然界中，甲殼素廣泛存在于甲殼動物的外殼和植物的細(xì)胞壁中[19]。殼聚糖在很多領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用，在食品行業(yè)可作為乳化劑、抗氧化劑和膳食補(bǔ)充劑使用，在生物技術(shù)領(lǐng)域可用作固定化酶，在農(nóng)業(yè)上用作生物殺蟲劑，在污水治理領(lǐng)域作為絮凝劑、金屬螯合劑使用，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域可用于人造皮膚、血液抗凝劑、藥物傳輸系統(tǒng)和基因治療方面[20-22]。目前，工業(yè)上制取殼聚糖主要以甲殼類動物的外骨骼為原料，但容易受到季節(jié)性和供應(yīng)量的限制，生產(chǎn)過程還會造成環(huán)境污染。而利用真菌制備殼聚糖則具有不受季節(jié)限制、發(fā)酵成本低、無需脫鹽、不含過敏性蝦蛋白、活性高等優(yōu)點(diǎn)，受到行業(yè)越來越多的關(guān)注。全世界每年僅檸檬酸發(fā)酵和糖化酶發(fā)酵產(chǎn)生的黑曲霉菌渣就已超過630 000 t[14，23]，所以黑曲霉菌渣用作制備殼聚糖的原料具有非常好的前景。

圖2 甲殼素的結(jié)構(gòu)式Fig.2 Structural formula of chitin

圖3 殼聚糖的結(jié)構(gòu)式Fig.3 Structural formula of chitosan

1.2.3 麥角甾醇 麥角甾醇(Ergosterol)又稱麥角固醇，是微生物細(xì)胞膜的重要組成成分，真菌能以胞外乙酸為原料合成麥角甾醇[29]，結(jié)構(gòu)式見圖4。麥角甾醇可以增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，是脂溶性維生素D2的前體，具有抑菌、抗腫瘤的藥理作用[30]，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、飼料、食品、化工等領(lǐng)域[31]。

目前麥角甾醇的萃取方法主要有皂化回流法、超聲波萃取法、微波萃取法、超臨界流體CO2萃取法[32]。皂化回流法是一種經(jīng)典萃取方法，具有萃取成本低、操作耗能少、方法簡便的優(yōu)點(diǎn)，與其他方法相比優(yōu)勢明顯，是萃取麥角甾醇常用的方法之一；超聲波萃取法除具有操作耗能少的特點(diǎn)外，還具有萃取速度快的優(yōu)點(diǎn)；微波萃取法的優(yōu)點(diǎn)是萃取速度快，試劑用量省；超臨界流體CO2萃取法是一種綠色環(huán)保萃取技術(shù)，具有萃取時(shí)間短、無毒、產(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)[33]。何翠紅等[13]以葡萄糖酸鈉生產(chǎn)廠的黑曲霉菌渣為原料，利用石油醚連續(xù)萃取、濃縮、重結(jié)晶，得到麥角甾醇的提取率為0.81%。郭育濤等[34]從黑曲霉粗提液中分離得到麥角甾醇，用紫外吸光光譜法和薄層色譜法對麥角甾醇進(jìn)行定量測定，得到麥角甾醇的產(chǎn)量達(dá)0.983 mg/g干培養(yǎng)基；邱從平等[35]采用先以酸堿降解然后用有機(jī)溶劑萃取的方法，從廢棄菌絲中提取麥角甾醇，極大降低了有機(jī)溶劑使用量，節(jié)約了麥角甾醇的回收成本。

圖4 麥角甾醇的結(jié)構(gòu)式Fig.4 Structural formula of ergosterol

1.2.4 細(xì)胞酶類 黑曲霉作為重要的工業(yè)發(fā)酵菌，可生產(chǎn)超過30 種酶制劑，黑曲霉菌渣中仍含有一定量的細(xì)胞酶。目前，主要應(yīng)用黑曲霉菌渣提取蔗糖酶、葡萄糖氧化酶和植酸酶。

蔗糖酶(Sucrase)能夠催化蔗糖水解，生成葡萄糖和果糖[36]，是動物、植物和微生物體中重要的水解酶。欽傳光[37]以黑曲霉廢菌體為原料提取蔗糖酶，在以pH 4.6的磷酸鹽緩沖液為提取劑，35 ℃條件下提取1 h獲得活力達(dá)到93單位/g的蔗糖酶提取物。

葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase)是一種需氧脫氫酶，能夠有效去除氧，起到殺菌的作用，工業(yè)上多用黑曲霉提取得到該酶，由于葡萄糖氧化酶具有無毒、無副作用的優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥和飼料等行業(yè)[38-41]。Lu等[42]的研究表明從生產(chǎn)葡糖糖酸鈉、葡萄糖酸鉀、葡萄糖酸鈣和葡萄糖酸鎂的黑曲霉菌渣中都可以提取到葡萄糖氧化酶，在低鹽濃度下金屬氯化物和葡萄糖酸鹽能夠激活葡萄糖氧化酶的活性，在高鹽濃度下金屬氯化物和葡萄糖酸鹽不同程度地抑制葡萄糖氧化酶的活性，而在同一鹽濃度下，金屬氯化物對葡萄糖氧化酶活性的抑制程度要高于葡萄糖酸鹽。郭剛軍等[43]以黑曲霉菌渣為原料，使用有機(jī)溶劑沉淀法、聚乙二醇(PEG)分步沉淀法、羥基磷灰石柱層析法提取得到了比活為193 U/mg的葡萄糖氧化酶，酶的純度提高8.58倍，并且該方法成本低、操作簡便，適合大規(guī)模生產(chǎn)。

植酸酶(Phytase)又稱肌醇六磷酸磷酸水解酶，廣泛分布于植物和微生物(細(xì)菌、酵母菌、霉菌)中，能夠?qū)⒅菜崴獬杉〈己蜔o機(jī)磷酸鹽[44-45]，是一種重要的飼料和食品添加劑，可起到補(bǔ)充礦物質(zhì)和減少糞便中磷酸鹽排泄的作用，能減少富營養(yǎng)化導(dǎo)致的環(huán)境污染問題，已被廣泛應(yīng)用于食品、飼料、環(huán)保等行業(yè)[46]。馮立志[47]以廢棄黑曲霉菌絲體為原料制備酸性植酸酶，并用于食品和飼料原料的脫磷酸，每克飼料用12～30 U粗酶制劑，結(jié)果表明脫磷酸作用效果明顯。

2 黑曲霉菌渣應(yīng)用現(xiàn)狀

2.1 制備飼料

黑曲霉菌渣中含有豐富的營養(yǎng)成分，與市售飼料原料相比，菌渣所含的總糖、粗脂肪、粗蛋白、粗纖維的含量都比較高，特別是總糖含量高達(dá)32.6%，可以作為飼料原料添加到動物飼料中。菌渣中含有的礦物元素也極其豐富，尤其是鈉和鐵的含量比較高，并且有害重金屬含量少，可以適當(dāng)補(bǔ)充飼料中的礦物元素。因此從營養(yǎng)成分上看，黑曲霉菌渣是一種良好的飼料添加劑，不僅可以豐富飼料的營養(yǎng)成分，還可降低飼喂成本。

梁銳君等[48]以黑曲霉菌渣作為飼料，采用真代謝能法(TME)飼喂雞(鴨)，證明黑曲霉菌渣作為飼料添加劑添加到飼料中具有可行性，既節(jié)約資源又保護(hù)環(huán)境，達(dá)到“雙贏”的結(jié)果。吳萍等[49]以廢菌渣為原料生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白飼料，通過混合固態(tài)發(fā)酵法大大提高了粗蛋白的含量。阮南等[50]的研究結(jié)果表明以黑曲霉菌渣作為單細(xì)胞蛋白飼料來源，能夠提高活性蛋白質(zhì)的利用率，進(jìn)而提高飼料的營養(yǎng)價(jià)值。

2.2 制備有機(jī)肥或土壤改良劑

黑曲霉菌渣中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素，可在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上作為有機(jī)肥料或土壤改良劑使用。陳秀龍等[14]對干燥后的黑曲霉菌渣成分進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)菌渣含有豐富的有機(jī)質(zhì)和營養(yǎng)元素，其中有機(jī)質(zhì)含量為53.40%，全氮含量為1.67%，有效磷含量為0.06%，速效鉀含量為0.07%，并且菌渣中的重金屬含量符合直接排放標(biāo)準(zhǔn)，所以黑曲霉菌渣可以作為復(fù)混肥料的原材料。Kadatoka[51]以檸檬酸生產(chǎn)廠產(chǎn)生的黑曲霉菌渣為研究對象，研究了廢菌渣作為種植玉米的土壤改良劑的可行性，結(jié)果表明廢菌渣可以增強(qiáng)土壤顆粒的穩(wěn)定性，改善土壤的理化性質(zhì)，增加玉米的產(chǎn)量，所以廢菌渣可以作為一種良好的土壤改良劑。

2.3 用作生物吸附劑或生物修復(fù)劑

隨著農(nóng)業(yè)、工業(yè)和生活用水的增加，水污染逐年加劇，受到污染的水又嚴(yán)重威脅著人和動植物的生命健康[52]。人們嘗試通過不同的途徑處理水污染情況，其中具有高效、適應(yīng)性強(qiáng)特點(diǎn)的生物吸附法是目前應(yīng)用較多的一種污水處理方式。真菌以活菌或死菌(菌渣)狀態(tài)都可以作為生物吸附劑，活菌細(xì)胞主要利用新陳代謝活動來處理廢水，而菌渣主要依賴于物理和化學(xué)去除機(jī)制處理廢水，相對于活菌吸附需要提供基質(zhì)，必須在適宜環(huán)境條件下進(jìn)行吸附的特點(diǎn)，菌渣的生物吸附過程則不太復(fù)雜，而且菌渣允許對其進(jìn)行預(yù)處理以提高生物吸附能力。黑曲霉菌渣作為一種熱門生物吸附劑，已被廣泛應(yīng)用于金屬、腐殖酸、苯酚和染料的生物吸附過程中。

圖5 黑曲霉菌渣綜合利用工藝流程Fig.5 Comprehensive utilization of Aspergillus niger biomass waste

3 展 望

黑曲霉作為廣泛用作生產(chǎn)食品的發(fā)酵菌株，可生產(chǎn)多種酶制劑和有機(jī)酸，但是由此也產(chǎn)生了大量工業(yè)廢渣。目前，以黑曲霉菌渣為原料制備飼料添加劑研究較多，但如何降低含量過高的金屬元素鈉，進(jìn)一步檢測有害的有機(jī)成分，以及改善飼料的適口性等方面，是黑曲霉菌渣研究的一個(gè)新方向。黑曲霉菌渣作為工業(yè)廢渣的二次資源利用，可用作制備飼料添加劑、有機(jī)肥料或土壤改良劑、生物吸附劑等(圖5)，既能變廢為寶，解決飼料添加劑、有機(jī)肥料、生物吸附劑原材料緊缺、成本高的問題，還可減輕環(huán)境污染，具有較好的經(jīng)濟(jì)和社會效益。本文結(jié)合目前國內(nèi)外研究進(jìn)展，綜述了黑曲霉菌渣高附加值轉(zhuǎn)化與利用的研究進(jìn)展，為工業(yè)菌渣的高值化利用提供參考。

[1] Patel H, Chapla D, Divecha J, et al. Improved yield of α-L-arabinofuranosidase by newly isolatedAspergillusnigerADH-11and synergistic effect of crude enzyme onSaccharificationof maize stover[J]. Bioresources & Bioprocessing, 2015, 11(2): 157-169.

[2] Piumi F, Levasseur A, Navarro D, et al. A novel glucose dehydrogenase from the white-rot fungusPycnoporuscinnabarinus:production inAspergillusnigerand physicochemical characterization of the recombinant enzyme[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2014, 98(24): 10105-10118.

[3] Oyedejia O, Bakarea M, Adewaleb I, et al. Optimized production and characterization of thermostable invertase fromAspergillusnigerIBK1,using pineapple peel as alternate substrate[J]. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 2017，(9): 218-223.

[4] Zhanga J, Lib Q, Thakura K, et al. A possible water-soluble inducer for synthesis of cellulase inAspergillusniger[J]. Bioresource Technology, 2017，(226): 262-266.

[5] Salihua A, Balab M, Alam M. Lipase production byAspergillusnigerusing sheanut cake: An optimization study[J]. Journal of Taibah University for Science, 2016, 10(6): 850-859.

[7] Horeh N, Mousavi S. Enhanced recovery of valuable metals from spent lithium-ion batteries through optimization of organic acids produced byAspergillusniger[J]. Waste Management, 2017,(60): 666-679.

[8] Wawrzyniak U, Ciosek P, Wróblewski W, et al. Electrochemical monitoring of citric acid production byAspergillusniger[J]. Analytica Chimica Acta, 2014，(823): 25-31.

[9] Alekseev K, Dubina M, Komov V. Molecular-genetic and biochemical characteristics of citrate synthase from the citric-acid producing fungusAspergillusniger[J]. Applied Biochemistry and Microbiology, 2016, 52(9): 810-817.

[10] 國家環(huán)境保護(hù)局. GB 8172-87, 城鎮(zhèn)垃圾農(nóng)用控制標(biāo)準(zhǔn)[Z]. 1987-11-06.

[11] 中國石油和化學(xué)工業(yè)協(xié)會. GB/T 18877-2009, 有機(jī)-無機(jī)復(fù)混肥料[Z].2009-04-27.

[12] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. GB 13078-2001, 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(含第一號修改單)[Z]. 2001-07-02.

[13] 何翠紅, 邵加春, 梁銳君, 等. 葡萄糖酸鈉生產(chǎn)廠黑曲霉菌渣的利用研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2011, 6(32): 185-187.

[14] 陳秀龍, 蔡冠杰, 覃新導(dǎo), 等. 黑曲霉菌渣資源化再利用途徑分析[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 31(6): 24-27.

[15] 熊本海, 羅清堯, 趙峰. 中國飼料成分及營養(yǎng)價(jià)值表(2016年第27版)[J]. 中國飼料, 2016,(22): 37-42.

[16] Jernejc K, Cimerma A, Perdih A. Comparison of different methods for protein determination inAspergillusnigermycelium[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 1986, 23(6): 445-448.

[17] 劉軍. 從檸檬酸發(fā)酵廢液中提取單細(xì)胞蛋白的研究[J]. 食品科學(xué), 1999,(8): 47-48.

[18] Lu T, Peng X, Yang H, et al. The production of glucose oxidase using the waste myceliums ofAspergillusnigerand the effects of metal ions on the activity of glucose oxidase[J]. Enzyme and Microbial Technology, 1996, 19(5): 339-342.

[19] Dutta J. Isolation, purification, and nanotechnological applications of chitosan[J]. Polysaccharides,2015,(5): 1029-1063.

[20] Kandra P, Kalangi H. Current understanding of synergistic interplay of chitosan nanoparticles and anticancer drugs:merits and challenges[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2015, 99(5): 2055-2064.

[21] Xing K, Zhu X, Peng X, et al. Chitosan antimicrobial and eliciting properties for pest control in agriculture:a review[J]. Agronomy for Sustainable Development, 2015, 35(2): 569-588.

[22] Chen X, Sun H, Pan J. Decolorization of dyeing wastewater with use of chitosan materials[J]. Ocean Science Journal, 2006, 41(4): 221-226.

[23] Tayela A, Moussaa S, El-Trasb W, et al. Antimicrobial textile treated with chitosan fromAspergillusnigermycelial waste[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2011,(49): 241-245.

[25] Abdel-Gawad K, Hifney A, Fawzy M, et al. Technology optimization of chitosan production fromAspergillusnigerbiomass and its functional activities[J]. Food Hydrocolloids, 2017,(63): 593-601.

[26] 曹健, 代養(yǎng)勇, 李浪, 等. 黑曲霉電解法制備甲殼素的研究[J]. 食品科學(xué),2006, 27(2): 186-192.

[27] 陳畑, 彭婷婷, 王堯, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化從絲狀真菌中制取殼聚糖的研究[J]. 廣州化工,2014,42(20): 80-82.

[28] Xie Y, Wei Y, Hu J. Depolymerization of chitosan with a crude cellulase preparation fromAspergillusniger[J]. Applied Biochemistry and Biotechnology, 2010, 160(4): 1074-1083.

[29] 韓慶雪. 麥角固醇提取工藝的中試放大研究[D]. 天津:天津大學(xué), 2007.

[30] 高虹, 史徳芳, 楊德, 等. 巴西菇麥角甾醇抗腫瘤活性及作用機(jī)理初探[J]. 中國食用菌, 2011, 30(6): 35-39.

[31] Padgett D, Mallin M, Cahoon L. Evaluating the use of ergosterol as a bioindicator for assessing fungal response to water quality[J]. Environmental Monitoring and Assessment, 2000, 65(3): 547-558.

[32] 曹龍輝, 李曉珺, 趙文紅, 等. 麥角甾醇的研究進(jìn)展[J]. 中國釀造, 2014, 33(4): 9-12.

[33] Santanaa, Jesus S, Larrayozm A, et al. Supercritical carbon dioxide extraction of algal lipids for the biodiesel production[J]. Procedia Eng, 2012, (42): 1755-1761.

[34] 郭育濤, 柯亞萍, 楊琴, 等. 黑曲霉固體發(fā)酵生產(chǎn)麥角固醇的研究[J]. 中國科技信息, 2008,(9): 35-37.

[35] 邱從平, 張慧波, 施立欽, 等. 麥角固醇提取及分離純化研究[J]. 中國科技信息, 2005,(12): 138.

[36] Montiel-González A, Fernández F, Viniegra-González G, et al. Invertase production on solid-state fermentation byAspergillusnigerstrains improved by parasexual recombination[J]. Applied Biochemistry and Biotechnology, 2002, 102(1): 63-70.

[37] 欽傳光. 檸檬酸生產(chǎn)中黑曲霉菌體的利用研究[J]. 糧食與飼料工業(yè), 1997,(10): 22-23.

[38] 邢良英, 王遠(yuǎn)山, 鄭裕國. 葡萄糖氧化酶的生產(chǎn)及應(yīng)用[J]. 食品科技, 2007,(6): 24-26.

[39] Mehmeti E, Stankovic D, Chaiyo S, et al. Wiring of glucose oxidase with graphene nanoribbons:an electrochemical third generation glucose biosensor[J]. Microchimica Acta, 2017, 184(4): 1127-1134.

[40] Lee Y, Yoon I, Suh S, et al. Enhanced disease resistance in transgenic cabbage and tobacco expressing a glucose oxidase gene fromAspergillusniger[J]. Plant Cell Reports, 2002, 20(9): 857-863.

[41] Wong C, Wong K, Chen X. Glucose oxidase: natural occurrence, function, properties and industrial applications[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2008, 78(6): 927-938.

[42] Lu T, Peng X, Yang H, et al. The production of glucose oxidase using the waste myceliums ofAspergillusnigerand the effects of metal ions on the activity of glucose oxidase[J]. Enzyme and Microbial Technology, 1996, 19(5): 339-342.

[43] 郭剛軍, 計(jì)亮年, 楊惠英. 從工業(yè)廢菌絲生產(chǎn)葡萄糖氧化酶[J]. 中國藥學(xué)雜志, 1996, 31(10): 615-617.

[44] Gaind S, Singh S. Production, purification and characterization of neutral phytase from thermotolerantAspergillusflavusITCC 6720[J]. International Biodeterioration & Biodegradation, 2015,(99): 15-22.

[45] GuptaR K, Gangoliya S, Singh N. Isolation of thermotolerant phytase producing fungi and optimisation of phytase production byAspergillusnigerNRF9 in solid state fermentation using response surface methodology[J]. Biotechnology and Bioprocess Engineering, 2014, 19(6): 996-1004.

[46] Bala A, Jain J, Kumari A, et al. Production of an extracellular phytase from a thermophilic mouldHumicolanigrescensin solid state fermentation and its application in dephytinization[J]. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 2014, 3(4): 259-264.

[47] 馮立志. 利用廢棄黑曲霉菌絲體的酸性磷酸酶提高飼料中植酸磷的有效性[J]. 國外畜牧學(xué)(飼料),1991(1): 47.

[48] 梁銳君, 何翠紅, 許少玉, 等. 黑曲霉菌渣在雞鴨飼料中的利用研究[J]. 飼料研究, 2012,(4): 52-53.

[49] 吳萍, 李正鵬, 饒圣宏, 等. 利用廢菌渣生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白飼料研究[J]. 中國飼料, 2008,(22): 38-41.

[50] 阮南, 周曉輝, 馮惠勇, 等. 利用檸檬酸渣生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白飼料的研究[J]. 糧食與飼料工業(yè), 2003,(10): 26-28.

[51] Kadatoka C. Evaluation of waste mycelium from citric acid production plant as a soil amendment[D]. Iowa State : Iowa State University, 1999.

[52] Gupta Vi, Suhas D. Application of low-cost adsorbents for dye removal-a review[J]. Journal of Environmental Management, 2009, 90(8): 2313-42.

[55] 孟雪嬌, 熊小京, 黃藝海, 等. 黑曲霉死菌與活性炭對直接耐曬翠藍(lán)FBL的吸附性能[J]. 環(huán)境工程學(xué)報(bào), 2010, 4(6): 1317-1320.

[56] Vale M, Do Nascimento R, Leitao R, et al. Cr and Zn biosorption byAspergillusniger[J]. Environmental Earth Sciences, 2016, 75: 462.

[57] Song W, Liang J, Wen T, et al. Accumulation of Co(II) and Eu(III) by the mycelia ofAspergillusnigerisolated from radionuclide-contaminated soils[J]. Chemical Engineering Journal, 2016, 304: 186-193.

[58] Sivasamy A, Sundarabal N. Biosorption of an azo dye byAspergillusnigerandTrichodermasp. fungal biomasses[J]. Current Microbiology, 2011, 62: 351-357.

[59] Grainger S, Fu G, Hall E. Biosorption of colour-imparting substances in biologically treated pulp mill effluent usingAspergillusnigerfungal biomass[J]. Water, Air & Soil Pollution, 2011, 217(1): 233-244.

[60] Senturk I, Buyukgungor H, Geyikci F. Biosorption of phenol from aqueous solutions by theAspergillusnigerbiomass: comparison of linear and non-linear regression analysis[J]. Desalination and Water Treatment, 2016, 57: 19529-19539.

[61] Sana S, Roostaazad R, Yaghmaei S. Biosorption of uranium (VI) from aqueous solution by pretreatedAspergillusnigerusing sodium hydroxide[J]. Iranian Journal of Chemistry & Chemical Engineering, 2015, 34: 65-74.