馬 涔

（蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院，江蘇 蘇州 215006）

產(chǎn)檢前的染色體疾病篩查的方法是羊水細(xì)胞培養(yǎng)和染色體制備，對于妊娠安全的保證非常關(guān)鍵。羊水檢查屬于創(chuàng)傷取樣，標(biāo)本制備帶有難度，孕婦難以接受二次羊水穿刺，因此羊水細(xì)胞的一次性成功培養(yǎng)非常重要[1]。羊水細(xì)胞培養(yǎng)具有操作難度大、技術(shù)要求高、培養(yǎng)時間長、易被污染等特點，綜合性要求高，無菌環(huán)境下的培養(yǎng)至關(guān)緊要。本文分析了羊水細(xì)胞培養(yǎng)污染損害的原因和應(yīng)對方法，提出避免污染的措施，為臨床檢驗提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取我院在2016年3月～2018年3月進行產(chǎn)前檢查的高危孕婦180例進行檢驗分析，產(chǎn)婦中經(jīng)產(chǎn)婦50例，初產(chǎn)婦130例，產(chǎn)婦年齡在26～32歲之間，平均（30.5±0.2）歲；孕周在17～25周之間，平均（20.4±0.6）周。產(chǎn)婦的產(chǎn)前診斷指證如下：高風(fēng)險妊娠、不良生育史、高齡妊娠、B超異常、夫妻中任何一方為染色體平衡易位攜帶者等。

1.2 檢驗方法

1.2.1 實驗室材料

羊水培養(yǎng)基、15mL一次性無菌離心管、25 mL方形培養(yǎng)瓶、CO2培養(yǎng)箱等。

1.2.2 羊水采集

孕婦取仰臥位，在B超引導(dǎo)下進行定位，用無菌注射器抽取20ml羊水，分別注入一次性無菌離心管中，10 ml/根。

1.2.3 接種培養(yǎng)

將需要送檢的羊水細(xì)胞進行離心操作，轉(zhuǎn)速為1500r/min，離心后放置在超凈臺上進行無菌處理，去掉上清液，每個離心管中留取1ml的沉淀細(xì)胞[2]。在培養(yǎng)瓶中分裝4ml羊水培養(yǎng)基，將沉淀細(xì)胞接種在培養(yǎng)瓶中，放置在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度設(shè)置為37℃。培養(yǎng)7d后取出并在顯微鏡下觀察，傳代培養(yǎng)后及時更換新鮮培養(yǎng)液4 mL，繼續(xù)培養(yǎng)至收獲。

1.3 污染后處理方法

羊水污染通常分為細(xì)菌污染和霉菌污染。細(xì)菌污染易被發(fā)現(xiàn)，污染速度較快，表現(xiàn)為培養(yǎng)基活捉，PH值變化，明顯影響到正常細(xì)胞的生長。發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染后，取少量培養(yǎng)液進行涂片染色檢查，證實菌種后加入適量的抗生素。常見的細(xì)菌污染為革蘭陽性菌，可進行取樣細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗。羊水接種后出現(xiàn)污染可應(yīng)用大劑量廣譜抗生素進行抗菌，若12h培養(yǎng)基渾濁未加重可再加入一次。若連續(xù)加入3次后抗菌效果不明顯則要立即更換抗生素，發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞貼壁時更換新鮮培養(yǎng)基，同樣加入抗生素。

2 結(jié) 果

本組羊水細(xì)胞培養(yǎng)180例中，共成功收獲179例，僅有1例由于細(xì)菌污染挽救失敗，培養(yǎng)成功率為99.44%；本次培養(yǎng)收獲時間為（9.2±0.6）d。本次檢驗中被污染的羊水細(xì)胞有10例20瓶，均為同批樣本，細(xì)菌污染，污染細(xì)菌為革蘭陽性菌，成堆出現(xiàn)。發(fā)現(xiàn)羊水細(xì)胞污染后立即更換培養(yǎng)液，并加入青鏈霉素進行大劑量沖擊處理，污染被顯著控制。僅有1例羊水細(xì)胞經(jīng)過多次換液后仍生長不良，未達(dá)到培養(yǎng)要求。取得孕婦理解后再次抽樣檢驗，培養(yǎng)成功。

3 討 論

羊水細(xì)胞培養(yǎng)從采集到收獲需要較長的培養(yǎng)過程，涉及到較多的環(huán)節(jié)，任何一個環(huán)節(jié)均可能造成羊水細(xì)胞或培養(yǎng)液被污染。羊水細(xì)胞的采集帶有創(chuàng)傷性，培養(yǎng)的細(xì)胞一旦被污染后果嚴(yán)重，輕則導(dǎo)致培養(yǎng)的細(xì)胞被廢棄，嚴(yán)重可污染培養(yǎng)箱內(nèi)的其他標(biāo)本甚至實驗室環(huán)境，嚴(yán)重影響產(chǎn)前檢查和分析工作。發(fā)現(xiàn)羊水細(xì)胞污染后，首先要進行抗生素沖擊挽救，避免再次采集檢驗。需要注意的是，抗生素雖然能夠抗菌，同時也會影響羊水細(xì)胞的生長，加之細(xì)菌的耐藥性等，因此要慎重選擇抗生素和沖擊劑量。

為了提升羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功率，降低污染風(fēng)險，本次研究中提出以下防范策略，可有效應(yīng)對污染。首先，要營造無菌實驗室環(huán)境，從源頭杜絕污染。導(dǎo)致細(xì)菌污染的原因有：實驗室不干凈、操作不規(guī)范、超凈臺有菌、培養(yǎng)基不合格或其他器具不合格等。檢驗人員要不斷總結(jié)操作失誤的原因，建立規(guī)范、完善的檢驗制度，確保檢驗的標(biāo)準(zhǔn)、有序進行，降低污染風(fēng)險。其次是高標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境維護。羊水細(xì)胞培養(yǎng)需要較多的無菌培養(yǎng)設(shè)備，如超凈臺、倒置顯微鏡、培養(yǎng)箱和離心機等，實驗技術(shù)人員需要進行高標(biāo)準(zhǔn)的檢驗環(huán)境維護，并從正規(guī)途徑購買實驗室產(chǎn)品。其三是遵循無菌檢驗操作程序，包含試驗前后的消毒和試驗中的無菌處理等，檢驗人員的無菌操作直接影響檢驗結(jié)果，也是導(dǎo)致污染的一個重要因素。實驗室檢驗師要提升自身檢驗責(zé)任感和操作技術(shù)，嚴(yán)格遵守操作流程，確保檢驗過程中的無菌操作。最后，采用雙線獨立平衡培養(yǎng)體系來降低污染風(fēng)險[3]，詳細(xì)記錄培養(yǎng)過程。

綜上，羊水細(xì)胞培養(yǎng)污染危害較為嚴(yán)重，可采用抗生素沖擊等方式進行挽救，建立規(guī)范的檢驗制度，規(guī)范無菌檢驗流程，雙線培養(yǎng)等方式避免細(xì)菌污染，提高羊水細(xì)胞培養(yǎng)成功率。