李代紅（天津市第一中心醫(yī)院輸血科，天津 300192）

HLA-SSO基因分型采用序列特異性寡核苷酸（sequence specific oligonucleotide，SSO）引物來鑒定PCR擴增產(chǎn)物中的等位基因。該方法基于標記的單鏈PCR產(chǎn)物與SSO探針進行雜交，通過PCR擴增，獲得單鏈及雙鏈混合PCR產(chǎn)物，用于擴增的引物標記有生物素，因此擴增所得的PCR產(chǎn)物均被生物素標記。雙鏈PCR產(chǎn)物經(jīng)過變性解鏈成單鏈，所有單鏈與微珠上的SSO探針特異性結(jié)合，然后用熒光標記，之后與生物素結(jié)合，利用Luminex平臺進行HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類等位基因的DNA分型。該技術(shù)可用于固體器官（腎、胰腺、心臟、肺等）移植和細胞移植前HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類的DNA分型檢測，疾病關(guān)聯(lián)分析，群體遺傳研究分析和藥物過敏研究。實驗采用枸櫞酸鈉抗凝的患者外周血，采用特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng)，提取血液中的基因組DNA，終濃度為50 ～ 100 ng/μl。按照每個反應孔Master Mix : ddH20 : Taq酶 : 模板DNA以6 : 11.8 : 0.2 : 2 （μl） 的比例進行PCR擴增。將 60℃ 預熱的相應位點的Probe Mix與產(chǎn)物按照7.5 : 2.5 （μl） 加至96孔反應板中混合，于PCR儀中雜交。雜交結(jié)束后，56℃ 下，每孔加入 85 μl Dilution solution/PE-Streptavidin 混合液。利用Luminex 200液相芯片分析系統(tǒng)，通過SSO探針所獲得的相關(guān)信號進行HLA-Ⅰ類和HLA-Ⅱ類等位基因的分型。本實驗中采用的SSO探針在設(shè)計中包含中國常見及確認的HLA 等位基因（CWD）的標識功能，因此，在CWD過濾條件下，可以達到30% 以上的高分辨率結(jié)果。