李玉靜，鄭桂璇，王雪平，陳浩然

（1．黃河水利職業(yè)技術(shù)學(xué)院，開封475004； 2．汕頭市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，汕頭515041）

蚊蟲是夏季主要衛(wèi)生害蟲，被蚊蟲叮咬會(huì)引起皮膚紅腫、瘙癢等癥狀，且可能被傳染多種疾病，嚴(yán)重危 害 人 類 健 康［1－3］。而 避 蚊 胺 （DEET），又 稱N，N－二乙基－3－甲基苯甲酰胺，是一種廣譜、高效、環(huán)保的人工合成昆蟲驅(qū)避劑。DEET對(duì)蒼蠅、虱子、螞蟻、蚊子、蟑螂、蠓蟲、白蛉、蟬等均有良好的驅(qū)避效果，是市售驅(qū)蚊用品（驅(qū)蚊花露水、驅(qū)蚊手環(huán)、驅(qū)蚊貼等）中廣泛添加的主要驅(qū)蚊成分。但有研究表明，DEET可抑制哺乳動(dòng)物的膽堿酯酶的活性［4－5］，其安全性問題備受關(guān)注，而目前尚無(wú)相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)于測(cè)定驅(qū)蚊用品中避蚊胺含量的文獻(xiàn)報(bào)道較少［6－8］。為明確驅(qū)蚊用品中避蚊胺成分及含量，保護(hù)消費(fèi)者合法權(quán)益不受侵害，正確合理使用驅(qū)蚊用品，避免過(guò)量使用對(duì)人體造成危害，建立一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地測(cè)定驅(qū)蚊用品中避蚊胺含量的分析方法就顯得尤為重要。本工作采用丙酮提取樣品中避蚊胺，提出了氣相色譜－質(zhì)譜法測(cè)定驅(qū)蚊用品中避蚊胺的分析方法。

1 試驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

Agilent 7890A－5975C型氣相色譜－質(zhì)譜儀；MS型分析天平（精度0．1mg）；JP－020S型超聲波清洗儀；GQ 75WZ型離心機(jī)。

鄰苯二甲酸二丁酯內(nèi)標(biāo)溶液：100g·L－1。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取一定量避蚊胺于容量瓶中，用丙酮配制成質(zhì)量濃度為100．0mg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃以下保存，有效期6個(gè)月。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別移取100．0mg·L－1避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1．00，2．00，5．00，10．0，20．0mL 至100mL容量瓶中，加入100g·L－1鄰苯二甲酸二丁酯內(nèi)標(biāo)溶液1．00mL，用丙酮定容，制備成含有相同質(zhì)量濃度內(nèi)標(biāo)物、不同質(zhì)量濃度（1．00，2．00，5．00，10．0，20．0mg·L－1）的避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。

鄰苯二甲酸二丁酯純度為99．5%，避蚊胺純度為99．7%；丙酮為色譜純。

1．2 儀器工作條件

1）色譜條件 DB－WAX型毛細(xì)管氣相色譜柱（30m×0．32mm，0．5μm）；進(jìn)樣口溫度260℃；分流進(jìn)樣，分流比為30︰1；載氣為高純氮?dú)猓兌葹?9．9%），流量1．0mL·min－1；進(jìn)樣量1μL。升溫程序：初始溫度200℃，保持1min；以10℃·min－1速率升溫至260℃，保持8min。

2）質(zhì)譜條件 電子轟擊離子源（EI），離子源溫度250℃；電離能量70eV；溶劑延遲時(shí)間5min；四極桿溫度150℃；接口溫度280℃；錐孔電壓30V，碰撞電壓20V；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，質(zhì)譜質(zhì)量掃描范圍m／z35～500，母離子m／z 192，定量子離子m／z131，定性子離子m／z158。

1．3 試驗(yàn)方法

稱取代表性樣品1．000 0g，加入丙酮5mL和100g·L－1鄰苯二甲酸二丁酯內(nèi)標(biāo)溶液1．00mL，搖勻，振蕩萃取10min，以10 000r·min－1轉(zhuǎn)速離心5min，取上層清液用Oasis MCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱凈化，收集全部流出液，于35℃水浴中用氮?dú)獯抵两?，加入丙?．00mL超聲2min后，再渦旋溶解，經(jīng)0．22μm微孔濾膜過(guò)濾，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2．1 色譜行為

避蚊胺的總離子流色譜圖見圖1。

圖1 避蚊胺的總離子流色譜圖Fig．1 TIC chromatogram of DEET

2．2 內(nèi)標(biāo)物的選擇

由于避蚊胺沸點(diǎn)較高，且內(nèi)標(biāo)物的物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)需要與目標(biāo)物接近，試驗(yàn)選擇鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二戊酯、磷酸三苯酯進(jìn)行內(nèi)標(biāo)物篩選。結(jié)果表明：鄰苯二甲酸二丁酯為內(nèi)標(biāo)物，不僅能與避蚊胺分離完全，而且其保留時(shí)間、響應(yīng)因子均與避蚊胺的接近，峰形尖銳且對(duì)稱。試驗(yàn)選擇鄰苯二甲酸二丁酯為內(nèi)標(biāo)物。

2．3 凈化柱的選擇

試驗(yàn)考察了硅膠鍵合反相吸附劑C18柱、聚合物鍵合反相吸附劑Oasis HLB柱、強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱（Oasis MCX）、弱陽(yáng)離子交換柱（Oasis WCX）、強(qiáng)陰離子交換柱（Oasis MAX）和弱陰離子交換柱（Oasis WAX）等對(duì)目標(biāo)化合物的凈化效果。通過(guò)空白基質(zhì)加標(biāo)試驗(yàn)，重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算避蚊胺的回收率。結(jié)果表明：陰離子交換柱（Oasis MAX、Oasis WAX）對(duì)避蚊胺的保留能力差，避蚊胺的回收率偏低；陽(yáng)離子交換柱（Oasis MCX、Oasis WCX）、C18柱和 Oasis HLB柱對(duì)避蚊胺均有較好的保留，避蚊胺經(jīng)強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱（Oasis MCX）凈化后，其回收率達(dá)到96．2%。試驗(yàn)選擇Oasis MCX強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱為凈化柱。

2．4 色譜柱的選擇

選取SE－54、OV－1701、HP－5、DB－WAX等不同極性的色譜柱，比較其分離效果。試驗(yàn)結(jié)果表明：使用SE－54、OV－1701、HP－5等色譜柱進(jìn)行分析時(shí)，目標(biāo)峰有輕微前展現(xiàn)象，分離效果差；而使用DBWAX色譜柱進(jìn)行分析時(shí)，得到的色譜圖峰形尖銳、峰對(duì)稱性好，能保證定量分析的準(zhǔn)確性。試驗(yàn)選擇DB－WAX毛細(xì)管色譜柱為分析柱。

2．5 質(zhì)譜條件的選擇

避蚊胺分子結(jié)構(gòu)中含有羰基，由于其羰基的吸電子作用使亞氨基的N－H鍵極性明顯增加，氮上的氫原子較易變?yōu)橘|(zhì)子，而呈弱酸性，因此采用正離子模式掃描。將1．00mg·L－1避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)溶液注入質(zhì)譜檢測(cè)器中，進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜掃描，在正離子掃描模式下，得到準(zhǔn)分子離子峰［M＋H］＋m／z192，優(yōu)化錐孔電壓等參數(shù)使分子離子峰達(dá)到最大強(qiáng)度。對(duì)分子離子峰進(jìn)行碰撞碎裂優(yōu)化，選擇MRM模式采集，離子源溫度為250℃，錐孔電壓為30V，碰撞電壓為20V，對(duì)分子離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析（子離子掃描），得到較多的碎片離子信息，定量離子對(duì)為m／z192，131；定性離子對(duì)為m／z192，158，見圖2。在上述質(zhì)譜條件下，避蚊胺的峰形對(duì)稱尖銳，并且未見明顯的干擾峰，總離子流色譜圖見圖1。

圖2 避蚊胺二級(jí)質(zhì)譜掃描圖Fig．2 MS／MS spectrum of DEET

2．6 工作曲線與檢出限

稱取相同基質(zhì)的驅(qū)蚊用品6份，分別加入適量的避蚊胺工作溶液系列，制備成避蚊胺的質(zhì)量濃度依次為0．01，0．05，0．10，0．20，0．50mg·L－1的試樣，按試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，以避蚊胺的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制工作曲線。避蚊胺的質(zhì)量濃度在0．01～0．50mg·L－1內(nèi)與其峰面積呈線性關(guān)系，線性回歸方程為y＝0．852 1x＋0．055 41，相關(guān)系數(shù)為0．999 9。

在驅(qū)蚊用品試樣中添加一系列質(zhì)量濃度的避蚊胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，以10倍信噪比計(jì)算得方法的檢出限（10S／N）為0．001mg·kg－1。

2．7 精密度和回收試驗(yàn)

按試驗(yàn)方法在空白驅(qū)蚊用品中進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，回收率和測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）結(jié)果見表1。

表1 精密度和回收試驗(yàn)（n＝6）Tab．1 Results of tests for precision and recovery（n＝6）

由表1可知：在加標(biāo)量在0．01～0．50mg·kg－1內(nèi)，驅(qū)蚊用品中避蚊胺的回收率在93．2%～95．8%之間，RSD在2．1%～3．4%之間。說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度和精密度較高。

2．8 樣品分析

按試驗(yàn)方法對(duì)市售的9個(gè)不同類型的驅(qū)蚊用品（驅(qū)蚊花露水、驅(qū)蚊手環(huán)、驅(qū)蚊貼）中避蚊胺含量進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明：9個(gè)試樣中，檢出陽(yáng)性試樣2個(gè)，陽(yáng)性檢出率為22．2%；9個(gè)不同類型的驅(qū)蚊用品中，避蚊胺含量有所差異，其中驅(qū)蚊貼中避蚊胺的含量最高，最高達(dá)1．6mg·kg－1，這表明驅(qū)蚊用品中存在一定量的避蚊胺。

本工作使用丙酮提取驅(qū)蚊用品中避蚊胺，采用氣相色譜－質(zhì)譜法測(cè)定驅(qū)蚊用品中避蚊胺的含量。該方法前處理簡(jiǎn)單、精密度高、回收率高、檢出限低，可為驅(qū)蚊用品中避蚊胺的檢測(cè)提供技術(shù)參考，為相關(guān)政府行政監(jiān)督部門和企業(yè)提供技術(shù)支持。

［1］ 向婧潔，鐘延強(qiáng)，樊莉，等．蚊蟲驅(qū)避劑新進(jìn)展［J］．中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志，2013，24（1）：79－82．

［2］ 連茹，吳忠平，呂小寶，等．實(shí)時(shí)直接分析離子源－飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速篩查安非他明類物質(zhì)［J］．理化檢驗(yàn)－化學(xué)分冊(cè)，2016，52（1）：1－6．

［3］ 丁建森，錢小妹．氣相色譜法測(cè)定驅(qū)蚊香水中N，N－二乙基間甲苯甲酰胺［J］．理化檢驗(yàn)－化學(xué)分冊(cè)，2005，41（5）：359－359．

［4］ 邵萬(wàn)明．蚊蟲驅(qū)避劑概況及DEET的合成［J］．湖北化工，1994（2）：34－36．

［5］ 危利紅，董琳，王玉潔，等．蚊蟲驅(qū)避劑驅(qū)蚊酯的合成及應(yīng)用［J］．廣州化工，2014，42（4）：94－96．

［6］ 孟鳳霞，郭玉紅，張曉越，等．我國(guó)驅(qū)蚊花露水及其有效成分［J］．中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志，2012，23（4）：277－279．

［7］ 祁婉舒，張立，郭寅龍．實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜法快速鑒別天然驅(qū)蚊產(chǎn)品中的人工添加劑［J］．有機(jī)化學(xué)，2013，33：359－364．

［8］ 王志波．驅(qū)蟲花露水中避蚊胺的定量分析研究［J］．福建分析測(cè)試，2007，16（2）：110－112．