郭愛靜，趙 偉，王 可，楊立學(xué)

（石家莊市疾病預(yù)防控制中心，石家莊050011）

鄰苯二甲酸酯（PAEs）又稱酞酸酯，是鄰苯二甲酸形成的酯的統(tǒng)稱［1］，其廣泛用于塑料制品中［2］，以增加塑料的韌性和可塑性［3］。由于PAEs與聚烯烴類塑料分子之間僅僅由氫鍵或范德華力連接，呈游離態(tài)，而二者之間的化學(xué)性質(zhì)并沒有真正的融合在一起，所以PAEs很容易從塑料中遷移到環(huán)境中［4］，并且該類物質(zhì)為脂溶性，親脂性強(qiáng)，更易遷移到油脂中去［5］。PAEs是生物內(nèi)干擾素，長(zhǎng)期接觸會(huì)致癌［6］，在許多國(guó)家被列入黑名單［7］。因此，開展食用油中鄰苯二甲酸酯類化合物的定量分析具有非常重要的意義。

目前增塑劑的測(cè)定方法主要有氣相色譜法（GC）［8］、液相色譜法（LC）［9］、氣相色譜－單四極桿質(zhì)譜法（GC－MS）［4，10］、氣相色譜－三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法（GC－MS／MS）［3，11］、液相色譜－三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法（LC－MS／MS）［12］和液相色譜－高分辨質(zhì)譜法［7］等。其中GC－MS具備較高的定性和定量能力，常用于PAEs的檢測(cè)。油脂中PAEs的前處理方法有凝膠滲透色譜法、分散固相萃取法、固相萃取法等。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB／T 21911－2008中對(duì)于油脂樣品中PAEs的前處理方法為凝膠滲透色譜法（GPC），此方法溶劑用量大、易污染、費(fèi)時(shí)，不能除去脂肪酸等小分子干擾物質(zhì)，方法檢出限高不能滿足食品中PAEs遷移限量標(biāo)準(zhǔn)的要求［2］；分散固相萃取法主要用于含酯的固態(tài)樣品。本工作采用油脂樣品中加入16種D4－PAEs內(nèi)標(biāo)后，經(jīng)乙腈提取，過SILICA／PSA玻璃固相萃取小柱，用乙腈洗脫，洗脫液氮吹后正己烷定容進(jìn)行氣相色譜－質(zhì)譜分析，內(nèi)標(biāo)法定量。使用同位素內(nèi)標(biāo)可有效降低前處理過程中待測(cè)物質(zhì)的損失，定量結(jié)果更準(zhǔn)確。

1 試驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

Agilent 7890B－7000C 型 氣 相 色 譜－串 聯(lián) 質(zhì) 譜儀，配7693自動(dòng)進(jìn)樣器；IKA MS2迷你型渦旋振蕩器；METTLER TOLEDO AE 240型電子天平；Elma T660／H 型超聲波清洗器；Sigma 2－16型離心機(jī)；Organomation N－EVAP111型氮吹儀。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1．000g·L－1，分別稱取鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二（2－甲氧基）乙酯（DMEP）、鄰苯二甲酸二（4－甲基－2－戊基）酯（BMPP）、鄰苯二甲酸二（2－乙氧基）乙酯（DEEP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP）、鄰苯二甲酸二（2－丁氧基）乙酯（DBEP）、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（DCHP）、鄰苯二甲酸二（2－乙基）己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二苯酯（DPhP）、鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）標(biāo)準(zhǔn)品（純度均大于98%）100．0mg，分別用正己烷溶解并定容至100mL。

16種PAEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：10．0mg·L－1，分別移取16種PAEs的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各1．00mL，用正己烷定容至100mL。

內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：1．000g·L－1，分別稱取D4－鄰苯二甲酸二甲酯（D4－DMP）、D4－鄰苯二甲酸二乙酯（D4－DEP）、D4－鄰苯二甲酸二異丁酯（D4－DIBP）、D4－鄰苯二甲酸二丁酯（D4－DBP）、D4－鄰苯二甲酸二（2－甲氧基）乙酯（D4－DMEP）、D4－鄰苯二甲酸二（4－甲基－2－戊基）酯（D4－BMPP）、D4－鄰苯二甲酸二（2－乙氧基）乙酯（D4－DEEP）、D4－鄰苯二甲酸二戊 酯 （D4－DPP）、D4－鄰 苯 二 甲 酸 二 己 酯 （D4－DHXP）、D4－鄰苯二甲酸丁基芐基酯（D4－BBP）、D4－鄰苯二甲酸二（2－丁氧基）乙酯（D4－DBEP）、D4－鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（D4－DCHP）、D4－鄰苯二甲酸二（2－乙基）己酯（D4－DEHP）、D4－鄰苯二甲酸二苯酯（D4－DPhP）、D4－鄰苯二甲酸二正辛酯（D4－DNOP）、D4－鄰苯二甲酸二壬酯（D4－DNP）標(biāo)準(zhǔn)品（純度均大于98%）10．0mg，分別用正己烷溶解并定容至10mL。

16種D4－PAEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：50．0mg·L－1，分別移取16種D4－PAEs的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各500μL，用正己烷定容至10mL。

乙腈、正己烷、二氯甲烷均為色譜純，試驗(yàn)用水為去離子水。

1．2 儀器工作條件

1）色譜條件 DB－5MS UI色譜柱（30m×0．25mm，0．25 μm）；載 氣 為 高 純 氦 氣 （純 度99．999%），恒流模式，流量1．0mL·min－1；進(jìn)樣口溫度250℃；進(jìn)樣量1．0μL，不分流進(jìn)樣。柱升溫程序：初始溫度60℃，保持1min；以20℃·min－1速率升溫至220℃，保持1min；以5℃·min－1速率升溫至280℃，保持10min；以20℃·min－1速率升溫至300℃，保持4min后運(yùn)行85℃。

2）質(zhì)譜條件 電子轟擊離子源（EI），電離能70eV；離子源溫度250℃，傳輸線溫度280℃；溶劑延遲5min；采用選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）模式，內(nèi)標(biāo)法定量。其他質(zhì)譜參數(shù)見表1。

1．3 試驗(yàn)方法

稱取混勻的試樣0．400 0g于10mL具塞玻璃刻度試管中，移取16種D4－PAEs的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液20μL，渦旋混勻，加乙腈4mL，超聲提取15min，以3 000r·min－1轉(zhuǎn)速離心5min分層，取2mL乙腈相待凈化。取SILICA／PSA混合玻璃固相萃取柱，依次用二氯甲烷5mL、乙腈5mL活化，2mL乙腈相上樣，用乙腈5mL洗脫并一起收集，洗脫液在45℃下用氮吹儀吹干，用正己烷溶解并定容至1．0mL，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

表1 PAEs和D4－PAEs的質(zhì)譜參數(shù)Tab．1 MS parameters of PAEs and D4－PAEs

2 結(jié)果與討論

2．1 色譜行為

鄰苯二甲酸酯類化合物是弱極性化合物，因此選用弱極性的DB－5MS UI柱，通過優(yōu)化柱升溫程序，16種PAEs可以得到較好的響應(yīng)和分離。每一種鄰苯二甲酸酯類化合物與其內(nèi)標(biāo)沒有實(shí)現(xiàn)色譜分離，但二者的定量離子與定性離子不同，不影響定量。16種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標(biāo)的色譜圖見圖1。

圖1 16種鄰苯二甲酸酯類化合物及其內(nèi)標(biāo)的色譜圖Fig．1 Chromatogram of 16PAEs and D4－PAEs

2．2 提取劑的選擇

鄰苯二甲酸酯類化合物為脂溶性化合物，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑。有機(jī)溶劑乙腈、正己烷、乙酸乙酯、甲醇均可用于提取鄰苯二甲酸酯類化合物，但乙酸乙酯、正己烷與油脂互溶，不能用于植物油樣品中鄰苯二甲酸酯類化合物的提取。試驗(yàn)比較了乙腈、甲醇兩種溶劑的提取效果。結(jié)果表明：乙腈的提取效果稍優(yōu)于甲醇，但均能滿足方法的要求。因乙腈的除脂效果優(yōu)于甲醇，試驗(yàn)選用乙腈作為提取劑。

2．3 凈化方法的選擇

植物油基質(zhì)復(fù)雜，提取劑將鄰苯二甲酸酯類化合物提取的同時(shí)，色素、脂肪等一并被提取，如果不經(jīng)過有效地凈化，將污染色譜和質(zhì)譜系統(tǒng)，從而會(huì)影響色譜柱柱效和設(shè)備靈敏度。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB／T 21911－2008中采用凝膠色譜凈化技術(shù)除去甘油三酯等大分子物質(zhì)，但不能除去脂肪酸等小分子，且該方法試劑用量大，對(duì)試劑空白要求高［2］。試驗(yàn)選用固相萃?。⊿PE）技術(shù)凈化，考察了SILICA／PSA混合玻璃柱、Cleanert PestiCarb、Florisil、C18柱等4種SPE小柱的凈化效果。結(jié)果表明：Cleanert Pesti－Carb小柱的除色素效果最好，但回收率較低；SILICA／PSA混合玻璃柱具有較好的除脂和除色素效果，且回收率較高。試驗(yàn)選擇SILICA／PSA混合玻璃柱來進(jìn)行凈化。

2．4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

將16種鄰苯二甲酸酯類化合物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液用正己烷稀釋配制成0．01，0．02，0．05，0．10，0．20，0．50，1．00mg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，16種同位素內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度均為0．50mg·L－1，在儀器工作條件下進(jìn)行測(cè)定。以每種鄰苯二甲酸酯類化合物的質(zhì)量濃度與其內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度比為橫坐標(biāo)，定量離子峰面積與其內(nèi)標(biāo)的定量離子峰面積的比值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：16種鄰苯二甲酸酯類化合物在0．01～1．00mg·L－1內(nèi)呈線性，相關(guān)系數(shù)均大于0．999，其結(jié)果見表2。

以3倍信噪比計(jì)算方法的檢出限（3S／N），以10倍信噪比計(jì)算方法的測(cè)定下限（10S／N），其結(jié)果見表2。

表2 線性參數(shù)、檢出限及測(cè)定下限Tab．2 Linearity parameters，detection limits and lower limits of determination

2．5 精密度和回收試驗(yàn)

分別在一份植物油陰性樣品中添加3個(gè)濃度水平的16種鄰苯二甲酸酯類化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液，按試驗(yàn)方法平行測(cè)定6次，計(jì)算加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見表3。

表3 精密度和回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab．3 Results of tests for precision and recovery（n＝6）

表3（續(xù)）

由表3可知：方法的回收率在81．7%～113%之間，RSD在2．8%～11%之間，表明方法回收率高、重復(fù)性好，可用于定量的要求。

2．6 樣品分析

按試驗(yàn)方法測(cè)定了30份市售植物油樣品，檢出DBP、DIBP、DBEP、DEHP等4種鄰苯二甲酸酯類化合物，檢出率分別為87%，90%，13%，30%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別在 0．62～3．15mg·kg－1，1．05～10．24mg·kg－1，1．28～3．97mg·kg－1，0．87～2．49mg·kg－1之間。結(jié)果表明：植物油中 DBP、DIBP、DBEP、DEHP等4種鄰苯二甲酸酯類化合物檢出率較高，與植物油所用塑料材質(zhì)包裝有關(guān)，鄰苯二甲酸酯類化合物是脂溶性化合物，容易從塑料包裝遷移到植物油中。

本工作采用固相萃取－同位素稀釋內(nèi)標(biāo)－氣相色譜－質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定植物油中16種鄰苯二甲酸酯類化合物的含量。同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法降低了基質(zhì)效應(yīng)，校正了試驗(yàn)過程中的損失，方法獲得了較高的準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度，可用于植物油中16種鄰苯二甲酸酯類化合物的定量分析。

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