倪永付，朱 濤，閆秋成

（濟寧出入境檢驗檢疫局，濟寧272000）

滅多威、殺線威均屬于氨基甲酸酯類殺蟲劑，其結(jié)構(gòu)式見圖1。目前已報道的關(guān)于這兩種農(nóng)藥的測定方法有 氣 相 色 譜 法［1－2］、液 相 色 譜 法［3－4］、氣 相 色譜－質(zhì)譜 法［5］、液 相 色 譜－串 聯(lián) 質(zhì) 譜 法［6－8］，國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763－2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》［9］中關(guān)于蔬菜、水果中滅多威的測定方法為 NY／T 761－2008［10］，殺線威的測定方法為NT／T 1453［11］和 SN／T 0134－2010［12］。NY／T 761－2008使用乙腈提取，氨基固相萃取柱凈化，采用高效液相色譜法測定；NT／T 1453使用乙酸乙酯提取，硅膠固相萃取柱凈化，采用液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定；SN／T 0134－2010使用乙腈提取，活性炭柱和弗羅里硅土固相萃取柱凈化，采用液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定。固相萃取法雖然能達到滿意的凈化效果，但操作較為繁瑣，分散固相萃取技術(shù)因其具有使用成本低、操作簡便、快速等特點，在農(nóng)藥殘留檢測中比固相萃取技術(shù)更受青睞。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)由于其檢測速度快、靈敏度高，在分析領(lǐng)域得到越來越廣泛地應(yīng)用。石墨烯是一種二維碳材料，比表面積大，與常規(guī)的吸附劑C18、N－丙基乙二胺（PSA）、碳黑（GCB）相比，具有更強的吸附能力。目前關(guān)于使用石墨烯作為分散固相萃取吸附劑測定洋蔥中滅多威、殺線威殘留的研究鮮見報道。本工作采用石墨烯作為分散固相吸附劑，提出了石墨烯分散固相萃取結(jié)合液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定洋蔥中滅多威、殺線威殘留量的分析方法。

圖1 滅多威和殺線威的結(jié)構(gòu)式Fig．1 Structural formulae of methomyl and oxamyl

1 試驗部分

1．1 儀器與試劑

Agilent 1290－6460型液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧離子源；IKA GM 200型高速均質(zhì)機；MMV－1000W型振蕩器；CR 22GⅢ型高速冷凍離心機；IKA MS 3型渦旋混勻器。

滅多威標(biāo)準(zhǔn)溶液：100．0mg·L－1。

殺線威標(biāo)準(zhǔn)溶液：100．0mg·L－1。

滅多威、殺線威混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：將100．0mg·L－1的滅多威、殺線威標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 各1．00mL轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻備用。

甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲酸均為色譜純；無水硫酸鈉為分析純，于650℃灼燒4h，冷卻后貯存于干燥器中，備用；試驗用水為超純水。

1．2 儀器工作條件

1）色譜條件 Agilent Poroshell 120EC－C18色譜柱（3．0mm×100mm，2．7μm），柱溫30℃；進樣體積5μL；流量0．35mL·min－1；流動相A為水，B為甲醇。梯度洗脫程序：0～1．0min時，B為10%；1．0～2．0min時，B由10%升至90%，保持3min；5．0～7．1min時，B由90%降至10%，保持0．9min。

2）質(zhì)譜條件 噴射流離子聚焦電噴霧離子源，正離子掃描模式；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式；干燥氣溫度325℃，干燥氣流量10L·min－1；霧化氣壓力310．3kPa；鞘氣溫度350℃，鞘氣流量11L·min－1；毛細管電壓4 000V；碰撞氣為高純氮（純度不小于99．999%）；各離子對駐留時間均為100ms。其他質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 質(zhì)譜參數(shù)Tab．1 MS parameters

1．3 試驗方法

稱取試樣5．000 0g于離心管中，加入乙腈10mL，均質(zhì)1min，加入無水硫酸鈉5g，渦旋混勻，振蕩提取30min后，于6℃以9 000r·min－1轉(zhuǎn)速離心5min，取乙腈層2mL至15mL離心管中，加入石墨烯14mg，渦旋30s，離心，取上清液經(jīng)0．22μm有機相濾膜過濾后，按儀器工作條件進行測定。

2 結(jié)果與討論

2．1 色譜行為

在優(yōu)化的色譜及質(zhì)譜條件下對滅多威、殺線威的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行測定，其色譜圖見圖2。

2．2 樣品前處理條件的選擇

2．2．1 提取劑

根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763－2014推薦的測定方法，比較了乙腈、乙酸乙酯、丙酮等常用的農(nóng)藥殘留提取劑對滅多威和殺線威回收率的影響。試驗結(jié)果表明：3種提取劑的提取效率接近；使用乙酸乙酯提取，需要轉(zhuǎn)溶后再進行分散固相萃取，后續(xù)處理操作較繁瑣；而使用丙酮提取，提取雜質(zhì)較多，不利于后續(xù)凈化；使用乙腈不僅能夠滿足回收率要求，而且分散固相萃取凈化后直接上機檢測，無需轉(zhuǎn)溶操作，能夠節(jié)約時間，提高效率。試驗采用乙腈為提取劑。

圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM色譜圖Fig．2 MRM chromatograms of mixed standard solution

2．2．2 分散固相萃取凈化劑

分散固相萃取吸附材料需要滿足對雜質(zhì)吸附而對目標(biāo)物不產(chǎn)生吸附或者雖產(chǎn)生吸附但能滿足檢測回收率的要求。試驗采用空白洋蔥基質(zhì)提取液配制10μg·L－1的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察了 C18、PSA、GCB、石墨烯作為分散固相萃取吸附劑對基質(zhì)的凈化效果。結(jié)果表明：4種凈化劑均對基質(zhì)有較好的凈化作用，但達到相同的凈化效果時，石墨烯的用量更少，更符合經(jīng)濟、環(huán)保的要求。試驗選擇石墨烯作為分散固相萃取凈化劑。

2．2．3 分散固相萃取凈化劑用量

分散固相萃取凈化劑的用量是影響凈化效果的一個重要因素。試驗考察了石墨烯用量分別為1，2，8，14，20mg時對凈化效果（峰面積為指標(biāo)）的影響。結(jié)果表明：石墨烯用量在1～14mg之間時，滅多威、殺線威的峰面積呈上升趨勢；當(dāng)石墨烯的用量為14mg時，兩種化合物的峰面積均達到最大；繼續(xù)增加石墨烯用量，兩種化合物的峰面積無明顯變化。試驗選擇石墨烯用量為14mg。

2．2．4 溶液酸度

溶液的酸度能夠影響分散固相萃取劑和目標(biāo)化合物性質(zhì)及其結(jié)合方式。由于滅多威、殺線威在堿性條件下會迅速分解，根據(jù)農(nóng)藥大典［13］介紹，殺線威的半衰期在pH為5時大于31d，在pH為7時是8d，在pH為9時是3h。試驗根據(jù)實際情況考察了酸度在pH 4～7范圍內(nèi)變化時對分散固相萃取效率的影響，結(jié)果表明：目標(biāo)物隨酸度變化無明顯變化。試驗在實際操作中不對酸度進行調(diào)整。

2．2．5 離子強度

溶液中加鹽可以降低待測物的溶解度，進而影響目標(biāo)物在吸附劑和樣品溶液之間的分配系數(shù)，但高含量的鹽會產(chǎn)生粘滯阻力，從而降低萃取效率。試驗在溶液中加入氯化鈉來調(diào)節(jié)離子強度，分別配制氯化鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0，5%，10%，15%，20%，25%的樣品溶液，考察離子強度對萃取效率的影響。結(jié)果表明：溶液的離子強度對目標(biāo)物的峰面積影響不大。試驗不對離子強度進行調(diào)節(jié)。

2．3 流動相的選擇

使用10μg·L－1的滅多威、殺線威混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣，分別考察了甲醇－0．1%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲酸溶液、乙腈－0．1%甲酸溶液、甲醇－水、乙腈－水為流動相體系時對滅多威、殺線威的峰形和響應(yīng)值的影響。結(jié)果表明：4種流動相體系，滅多威、殺線威的峰形均能達到滿意效果，但響應(yīng)值有較大的差別。甲醇－水為流動相時，兩種化合物的響應(yīng)值明顯高于乙腈－水為流動相時的響應(yīng)值；相對于甲醇－水流動相體系，在甲醇－0．1%甲酸溶液流動相體系下，滅多威響應(yīng)值變化不大，而殺線威的響應(yīng)值下降，峰面積減小。通過調(diào)節(jié)甲醇、水的比例及流量發(fā)現(xiàn)，在梯度洗脫條件下能夠獲得快速分析的色譜條件，優(yōu)化的色譜條件見1．2節(jié)。

2．4 質(zhì)譜條件的選擇

根據(jù)兩種化合物的結(jié)構(gòu)特征，選擇電噴霧正離子源（ESI＋）作為電離模式。首先進行一級質(zhì)譜分析，得到每種化合物的分子離子峰，選取相應(yīng)的母離子峰對其碎裂電壓進行優(yōu)化，然后在最佳碎裂電壓下對其進行二級質(zhì)譜分析、優(yōu)化，得到碎片離子、碰撞能量等信息。將優(yōu)化得到的母離子、子離子、碎裂電壓、碰撞能量建立滅多威、殺線威檢測的多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）參數(shù)，見表1。

2．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限

配制質(zhì)量濃度分別為5．00，10．0，20．0，50．0，100，200μg·L－1的空白洋蔥基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，按儀器工作條件進行測定。以化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的定量離子峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性參數(shù)見表2。以3倍信噪比計算方法的檢出限（3S／N），以10倍信噪比計算方法的測定下 限（10S／N），結(jié)果見表2。

表2 線性參數(shù)、檢出限與測定下限Tab．2 Linearity parameters，detection limits and lower limits of determination

2．6 精密度和回收試驗

稱取空白試樣 5．000 0g，在 10．0，20．0，50．0μg·kg－1等3個濃度水平下按試驗方法進行加標(biāo)回收試驗，每個添加水平平行測定6次，其結(jié)果見表3。

表3 精密度和回收試驗結(jié)果（n＝6）Tab．3 Results of tests for precision and recovery（n＝6）

由表3可知：加標(biāo)回收率在66．5%～94．0%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在7．4%～11%之間。

2．7 樣品分析

按試驗方法對送檢的10份洋蔥樣品進行測定，結(jié)果表明，均未檢出滅多威、殺線威。

本工作以石墨烯作為分散固相萃取吸附劑，建立了石墨烯分散固相萃取－液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測定洋蔥中滅多威、殺線威殘留量的方法，并對提取劑、凈化劑及其用量、溶液酸度、離子強度、色譜條件和質(zhì)譜條件等影響因素進行了優(yōu)化。結(jié)果表明，石墨烯作為分散固相萃取吸附劑具有用量少的優(yōu)點，方法具有較高的精密度，回收率、檢出限和測定下限均能滿足測定要求，適用于洋蔥中滅多威、殺線威殘留量的測定。

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［10］ NY／T 761－2008 蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定［S］．

［11］ NY／T 1453－2007 蔬菜及水果中多菌靈等16種農(nóng)藥殘留測定 液相色譜－質(zhì)譜－質(zhì)譜聯(lián)用法［S］．

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