熊 岑，林葉婧，李衛(wèi)崗，張 悅，李 意，柏文良

（1．深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院，深圳518000； 2．廣東石油化工學(xué)院 環(huán)境與生物工程學(xué)院，茂名525000；3．珠海出入境檢驗(yàn)檢疫局 技術(shù)中心，珠海519000）

肥胖會(huì)引起高血壓、心臟病等多種疾病，民眾對(duì)健康和身材控制的要求也越來越高。順應(yīng)市場(chǎng)需求，很多聲稱有減肥功效的保健品出現(xiàn)在市場(chǎng)上，但其產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊。各地執(zhí)法部門曾以減肥為賣點(diǎn)的保健品中檢出如酚酞、麻黃堿、咖啡因等非法藥物添加。媒體也多次進(jìn)行曝光，在保健中添加非法藥物這一行為甚至演變成行業(yè)潛規(guī)則，因此需要對(duì)保健品進(jìn)行針對(duì)性排查和監(jiān)管［1－2］。

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局于2012年3月發(fā)布《關(guān)于發(fā)布保健食品中可能非法添加的物質(zhì)名單（第一批）的通知》中減肥類保健食品非法添加的名單有西布曲明、麻黃堿和芬氟拉明。而氫氯噻嗪、酚酞、茶堿、咖啡因、布美他尼、吲達(dá)帕胺、克倫特羅、苯丙酸諾龍等8種物質(zhì)尚未納入減肥藥保健品非法添加名單中，且無相關(guān)公告或標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。到目前為止，國(guó)家發(fā)布的針對(duì)減肥類保健食品非法添加物質(zhì)的檢測(cè)方法，僅針對(duì)西布曲明、芬氟拉明及麻黃堿等3種物質(zhì)，其他可能添加入減肥類產(chǎn)品的物質(zhì)尚未發(fā)布。保健食品中非法添加藥物測(cè)定方法主要有高效液相色譜法［3］、氣相色譜－質(zhì)譜法、離子遷移法［4］、高分辨質(zhì)譜法［5－6］和液相色譜－質(zhì)譜法等［7－9］。其中，大部分集中在常檢出的幾種非法添加成分，如酚酞、西布曲明的檢測(cè)方法研究［10－12］，和基于液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法的高通量篩查和檢測(cè)上［13－14］。

1 試驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

TSQ Vantage AM 型液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜儀；SK2510LHC型超聲波萃取儀；CPA224S型電子分析天平。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取各標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解并稀釋至質(zhì)量濃度均為10．00mg·L－1。此溶液于4℃下可保存6個(gè)月。用甲醇稀釋成質(zhì)量濃度均為200，100，50．0，20．0，10．0，5．00，1．00，0．50μg·L－1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，使用前現(xiàn)用現(xiàn)配。

鹽酸芬氟拉明：100．0mg·L－1，介質(zhì)為乙腈。

氫氯噻嗪（純度99．5%）、西布曲明鹽酸鹽（純度98%）、克倫特羅鹽酸鹽（純度98．5%）、酚酞（純度99．7%）、苯丙酸諾龍（純度99．35%）、布美他尼（純度95%）、茶堿（純度99．89%）、吲達(dá)帕胺（純度97%）、咖啡因（純度99．5%）標(biāo)準(zhǔn)品；甲醇、甲酸為色譜純，其余試劑均為分析純；試驗(yàn)用水為超純水。

市售36批次減肥類樣品包括減肥茶、減肥膠囊。

1．2 儀器工作條件

1）色譜條件 Thermo Hypersil Gold色譜柱（100mm×2．1mm，1．9μm），柱溫25℃；進(jìn)樣體積5μL；流量0．25mL·min－1；流動(dòng)相A為0．1%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲酸溶液，B為乙腈。梯度洗脫程序：0～3min時(shí)，B為15%；3～5min時(shí)，B由15%升至60%，保持7min；12～17min時(shí)，B由60%升至100%；17～20min時(shí)，B由100%降至15%。

2）質(zhì)譜條件 電噴霧離子源（ESI）；正負(fù)離子切換模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式；傳輸管溫度350℃；霧化溫度400℃；以氮?dú)鉃榍蕷饧拜o助氣，采用恒壓模式，鞘氣壓力206．8kPa，輔助氣壓力34．5kPa；噴霧電壓3 000V（＋）、2 500V（－）。各化合物的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

楊力生家門口是一條東西街，他本想往街西頭走，因見離他不遠(yuǎn)的地方有幾個(gè)鄉(xiāng)親在街北邊閑聊，他便轉(zhuǎn)身向東面奔去。不承想，他們兩口子的吵鬧聲早被眾鄉(xiāng)親聽了個(gè)一清二楚，大家看著他匆匆離去的背影，有幾個(gè)和他交往比較不錯(cuò)的鄰居便異口同聲地喊起來：

表1 質(zhì)譜參數(shù)Tab．1 MS parameters

1．3 試驗(yàn)方法

樣品研細(xì)或粉碎，稱取樣品0．500 0g于50mL容量瓶中，加甲醇25mL，超聲提取20min，冷卻至室溫后加甲醇定容?；靹蚝?，用0．22μm濾膜過濾，按儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2．1 色譜行為

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中10種化合物的提取離子對(duì)色譜圖見圖1。

圖1 10種化合物的提取離子對(duì)色譜圖Fig．1 Extracted ion chromatograms of 10compounds

2．2 提取時(shí)間的選擇

試驗(yàn)分別考察了10，20，40min等不同時(shí)間對(duì)超聲提取效果的影響?？瞻谆|(zhì)加標(biāo)回收結(jié)果表明：20min即可完成提取。試驗(yàn)選擇超聲提取時(shí)間為20min。

2．3 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)采用0．1%甲酸溶液－甲醇體系為流動(dòng)相時(shí)，等度洗脫或梯度洗脫后，西布曲明、酚酞、芬氟拉明和苯丙酸諾龍的出峰效果不理想；采用0．1%甲酸溶液－乙腈體系為流動(dòng)相并梯度洗脫后，各物質(zhì)出峰效果良好，但茶堿和氫氯噻嗪會(huì)出現(xiàn)裂峰。綜合考慮，試驗(yàn)選擇0．1%甲酸溶液－乙腈體系進(jìn)行梯度洗脫。

2．4 質(zhì)譜條件的選擇

將各標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋至1．00mg·L－1，對(duì)各化合物進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化。使用直接進(jìn)樣方式，先采用一級(jí)全掃模式得到準(zhǔn)分子離子，再使用二級(jí)掃描模式獲得2～3對(duì)子離子，對(duì)儀器毛細(xì)管電壓、碰撞電壓、噴針電壓、射頻透鏡電壓等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。選擇豐度最高的子離子作為定量離子，其余離子作為定性離子。優(yōu)化的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

實(shí)際樣品中目標(biāo)化合物的定性是結(jié)合保留時(shí)間，化合物一級(jí)和二級(jí)離子等進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)的，幾個(gè)特征子離子的豐度比和目標(biāo)化合物標(biāo)準(zhǔn)品豐度比相比較，最大允許偏差不得超過歐盟2002／657／EC指令［15］中規(guī)定的范圍。

2．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

按儀器工作條件對(duì)各化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行測(cè)定，以化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。各化合物的線性范圍、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。

以3倍信噪比時(shí)化合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為方法的檢出限（3S／N），以10倍信噪比時(shí)化合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為方法的測(cè)定下限（10S／N），結(jié)果見表2。

表2 線性參數(shù)、檢出限和測(cè)定下限Tab．2 Linearity parameters，detection limits and lower limits of determination

2．6 精密度和回收試驗(yàn)

使用空白樣品（膠囊和茶葉類各1種），配制成基質(zhì)加標(biāo)溶液，按試驗(yàn)方法平行測(cè)定5次，計(jì)算其加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見表3。

表3 精密度和回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab．3 Results of tests for precision and recovery（n＝5）

由表3可知：加標(biāo)回收率在72．1%～117%之間，結(jié)果較為滿意；RSD在0．70%～6．2%之間。

2．7 樣品分析

試驗(yàn)共抽檢減肥類保健品36批次，包括減肥茶和減肥膠囊兩大類產(chǎn)品。對(duì)樣品中10種化合物含量進(jìn)行定性定量檢測(cè)。目標(biāo)物的定性檢測(cè)通過色譜圖保留時(shí)間、質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)比來確證，見圖2和圖3。

由圖2、圖3可知：樣品中茶堿、咖啡因和西布曲明的色譜圖、質(zhì)譜圖與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜圖基本一致。

各化合物的定量檢測(cè)是根據(jù)定量監(jiān)測(cè)離子對(duì)的色譜峰面積，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量。樣品分析結(jié)果見表4。

由表4可知：36批次保健品中，共有20批次樣品檢出目標(biāo)物，其中14批次樣品檢出茶堿，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2．54×10－4～6．27×10－3g·kg－1；17批次樣品檢出咖啡因，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0．014 0～2．52g·kg－1；1批次樣品檢出西布曲明，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3．85g·kg－1。抽檢樣品中均未檢出氫氯噻嗪、酚酞、布美他尼、吲達(dá)帕胺、芬氟拉明、克倫特羅、苯丙酸諾龍。

圖2 色譜圖的對(duì)比Fig．2 Comparison of chromatograms

圖3 質(zhì)譜圖的對(duì)比Fig．3 Comparison of MS spectra

表4 樣品分析結(jié)果Tab．4 Analytical results of samples g·kg－1

2．7．1 茶堿和咖啡因檢測(cè)結(jié)果分析

檢出茶堿和咖啡因樣品均屬于減肥茶樣品。減肥茶的減肥機(jī)理主要是通過增加能量消耗來達(dá)到減肥目的。其中，茶葉中的茶堿和咖啡因有利尿和興奮代謝的作用?？Х纫蛴信d奮中樞神經(jīng)作用，使睡眠較少消耗增加。抽檢的減肥茶樣品中添加有茶葉或茶葉提取物，茶葉天然含有一定量的茶堿和咖啡因。文獻(xiàn)報(bào)道紅茶、綠茶等常見茶葉中茶堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0．19～1．27g·kg－1范圍內(nèi)，甚至更高范圍，其含量會(huì)隨品種、產(chǎn)地、采摘時(shí)節(jié)和加工工藝不同而變化［16－17］。茶葉中咖啡因質(zhì)量分?jǐn)?shù)在20～200g·kg－1之間，發(fā)酵茶中咖啡因含量遠(yuǎn)大于非發(fā)酵茶，其中非發(fā)酵茶如綠茶甚至要小于20g·kg－1［18］。抽檢的減肥茶產(chǎn)品中的檢出的茶堿和咖啡因含量較低，這是由于減肥茶成分較為復(fù)雜，茶葉也可能是主要成分，而且茶葉品種不明確。例如，25號(hào)樣品成分為荷葉提取物、西洋參提取物、茯苓提取物、澤瀉提取物、山楂提取物、茶多酚、乳糖、赤蘚糖醇、甜菊糖苷。因此，抽檢的減肥茶中檢出的茶堿和咖啡因是屬于樣品本底值，不是非法添加。

2．7．2 西布曲明檢測(cè)結(jié)果分析

36批次減肥類保健品中，只有一款左旋肉堿減肥膠囊中檢出西布曲明，是屬于非法添加違禁藥物的減肥類產(chǎn)品。西布曲明是一種中樞神經(jīng)抑制劑，具有興奮、抑食等作用。將西布曲明非法添加進(jìn)入減肥類保健品中，可以通過增加能量消耗，抑制能量攝取來達(dá)到減肥目的。西布曲明一直列在各地減肥類保健食品中非法添加違禁藥物的重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的名單中。

本工作采用超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定減肥類保健食品中茶堿、氫氯噻嗪、酚酞、布美他尼、吲達(dá)帕胺、咖啡因、芬氟拉明、克倫特羅、西布曲明和苯丙酸諾龍等10種化合物的含量。方法對(duì)36批次減肥茶和減肥膠囊兩類減肥類保健食品進(jìn)行檢測(cè)，檢出共20批次樣品中含有茶堿、咖啡因和西布曲明等3種物質(zhì)。其中1批次檢出的西布曲明屬于非法添加的情況，其余19批次檢出的咖啡因和茶堿是屬于樣品本底值。研究結(jié)果表明，方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，能用于減肥類保健食品中非法添加化學(xué)品的定性定量檢測(cè)。

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