孫繼建，潘世杰

(河南省中醫(yī)院，鄭州450000)

血清ALP、ICTP、sTf水平及癌組織BMP表達(dá)對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值

孫繼建，潘世杰

(河南省中醫(yī)院，鄭州450000)

目的探討血清堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽(ICTP)、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)水平及癌組織骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)表達(dá)變化對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值。方法研究對(duì)象為92例行手術(shù)治療的前列腺癌患者，術(shù)后病理檢查證實(shí)診斷。入院后均采用ELISA法檢測(cè)血清ALP、ICTP、sTfR，采用免疫組化法檢測(cè)癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7。術(shù)后隨訪2年，隨訪期間發(fā)生骨轉(zhuǎn)移(經(jīng)病理學(xué)證實(shí))33例(骨轉(zhuǎn)移組)，未發(fā)生骨轉(zhuǎn)移59例(無(wú)骨轉(zhuǎn)移組)。回顧性分析轉(zhuǎn)移組與未轉(zhuǎn)移組入院時(shí)上述指標(biāo)水平差異及相關(guān)性。結(jié)果骨轉(zhuǎn)移組血清ALP、ICTP水平均高于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組，血清sTfR水平低于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組，組間比較P均<0.01。骨轉(zhuǎn)移組癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分均高于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組(P均<0.05)。前列腺骨轉(zhuǎn)移患者血清ALP、ICTP水平與癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分均呈正相關(guān)(P均<0.05)，血清sTfR水平與癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論前列腺癌患者血清ALP、ICTP水平升高，血清sTfR水平降低，癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7表達(dá)增加者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的可能性更大。

前列腺癌；骨轉(zhuǎn)移；堿性磷酸酶；Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽；可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體轉(zhuǎn)鐵蛋白；骨形態(tài)發(fā)生蛋白

前列腺癌是中老年男性常見(jiàn)上皮性惡性腫瘤，其中腺癌占發(fā)病總例數(shù)的95%以上[1]。早期前列腺癌患者無(wú)明顯癥狀，多因腫瘤轉(zhuǎn)移或進(jìn)入晚期才被確診[2]。骨轉(zhuǎn)移是前列腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的常見(jiàn)類型之一[3]，早期診斷并干預(yù)對(duì)改善患者預(yù)后意義重大。本研究回顧性分析血清堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽(ICTP)、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)水平及癌組織骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)表達(dá)變化對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 臨床資料

1.1 基本資料 選取2013年1月～2015年1月于我院行手術(shù)治療的92例前列腺癌患者，年齡58～79(68.6±7.7)歲，BMI 21.0～24.3(22.8±1.6)，血清前列腺特異性抗原(PSA)水平為(146.8±51.7)μg/L。病理檢查證實(shí)診斷，其中M1b期20例、M1c期13例、pT2a期16例、pT2b期20例、pT2c期14例、pT3a期9例。術(shù)后隨訪2年，隨訪期間發(fā)生骨轉(zhuǎn)移(經(jīng)病理學(xué)證實(shí))33例(骨轉(zhuǎn)移組)，未發(fā)生骨轉(zhuǎn)移59例(無(wú)骨轉(zhuǎn)移組)。兩組入院時(shí)年齡、BMI、腫瘤分期等均具有可比性。

1.3 相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)及結(jié)果

1.3.1 血清ALP、ICTP、sTfR水平 患者入院后均于清晨抽取5 mL空腹靜脈血，抗凝后2 800 r/min離心10 min，取血清。采用ELISA法檢測(cè)ALP、ICTP、sTfR，步驟均參照試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司)說(shuō)明書(shū)。結(jié)果顯示，骨轉(zhuǎn)移組血清ALP、ICTP水平高于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組，血清sTfR水平低于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組，組間比較P均<0.01。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清ALP、ICTP、sTfR水平比較

注：與無(wú)骨轉(zhuǎn)移組比較，*P<0.01。

1.3.2 癌組織骨形成蛋白2(BMP-2)、BMP-4、BMP-7表達(dá) 取兩組手術(shù)切除的癌組織標(biāo)本，常規(guī)固定，石蠟包埋，切片，脫蠟，3%雙氧水孵化8 min，蒸餾水清洗，加入磷酸鹽緩沖液10 mL浸泡，90 ℃孵化10 min；加入工作濃度為1∶20的BMP-2、BMP-4、BMP-7一抗，室溫下孵育過(guò)夜；自然冷卻后加入二抗，室溫孵化40 min；蘇木紫染色，封片，鏡檢。BMP-2、BMP-4、BMP-7一抗購(gòu)自美國(guó)Molecuar Probes公司，羊抗兔IgG二抗(1∶1 000)購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。BMP蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色。根據(jù)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞比例綜合評(píng)價(jià)結(jié)果。染色強(qiáng)度：0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色或黑色；陽(yáng)性細(xì)胞比例：<10%為1分，≥10%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。以染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分的乘積作為總評(píng)分。結(jié)果顯示，骨轉(zhuǎn)移組癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分均高于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組(P均<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分比較(分

注：與無(wú)骨轉(zhuǎn)移組比較，*P<0.01。

1.3.3 骨轉(zhuǎn)移患者血清ALP、ICTP、sTfR水平與癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分的相關(guān)性 骨轉(zhuǎn)移患者血清ALP、ICTP水平與癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分均呈正相關(guān)(P均<0.05)，血清sTfR水平與癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)(P均<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 骨轉(zhuǎn)移患者血清ALP、ICTP、sTfR水平與癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分的相關(guān)性

2 討論

骨轉(zhuǎn)移是前列腺癌患者病情發(fā)展及預(yù)后的重要影響因素。發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的前列腺癌細(xì)胞通常表現(xiàn)為大腺泡結(jié)構(gòu)消失，并向卵圓形小腺發(fā)展，腺腔內(nèi)部可能伴有基底層消失，同時(shí)存在淀粉樣小體消失。發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的癌變骨組織內(nèi)通常同時(shí)存在大量骨母細(xì)胞及溶骨性新骨[4]。早期骨轉(zhuǎn)移患者無(wú)明顯臨床癥狀，當(dāng)出現(xiàn)骨骼劇烈疼痛而就診時(shí)，骨轉(zhuǎn)移多已進(jìn)入中晚期，失去最佳治療時(shí)機(jī)，患者預(yù)后極差。目前診斷前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的主要方法是X線檢查、放射性核素全身顯像技術(shù)等影像學(xué)方法[5]。但影像學(xué)檢查多需持續(xù)觀察數(shù)月，診斷滯后，時(shí)效性差，延誤治療時(shí)機(jī)，診斷特異性低，且放射線等可損傷機(jī)體。

骨細(xì)胞在代謝過(guò)程中可生成相關(guān)標(biāo)志物，當(dāng)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至骨時(shí)，干擾骨細(xì)胞正常代謝過(guò)程，相關(guān)標(biāo)志物水平異常[6]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于使用骨標(biāo)志物診斷前列腺癌骨轉(zhuǎn)移已有許多研究，各種骨標(biāo)志物在早期診斷前列腺癌骨轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確性及可靠性不一[7]。

ALP是一種單脂磷酸水解酶，是臨床常用骨形成標(biāo)志物，分布廣泛，具有同工酶的作用，可作為反映肝臟病變和骨良性病變的指標(biāo)；其水平變化對(duì)診斷前列腺癌骨轉(zhuǎn)移有一定特異性，但敏感性較低，往往已發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移其水平才出現(xiàn)明顯升高[7,8]。在影像學(xué)上前列腺癌骨轉(zhuǎn)移多表現(xiàn)為成骨性轉(zhuǎn)移。但是，組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，前列腺癌骨轉(zhuǎn)移灶中成骨與破骨成分同時(shí)存在，反映骨形成與骨吸收的骨重建標(biāo)志物對(duì)診斷前列腺癌骨轉(zhuǎn)移均有重要意義，骨吸收指標(biāo)有可能更早期預(yù)示骨轉(zhuǎn)移[7]。骨吸收標(biāo)志物ICTP是由細(xì)胞外金屬蛋白酶介導(dǎo)的Ⅰ型膠原蛋白分解產(chǎn)物，是構(gòu)成骨骼和肌腱的惟一種膠原蛋白。在多種骨骼代謝疾病的病理過(guò)程中Ⅰ型膠原的合成和降解發(fā)生改變，對(duì)診斷病理性骨質(zhì)破壞具有一定特異性[9]。當(dāng)前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移至骨，導(dǎo)致骨質(zhì)破壞時(shí)ICTP水平可發(fā)生變化。sTfR是血液中主要的含鐵蛋白，通過(guò)細(xì)胞表面受體的蛋白水解作用衍生而來(lái)。血清中sTfR約80%來(lái)源于早期紅細(xì)胞，其和不同的轉(zhuǎn)鐵蛋白以復(fù)合物的形式存在，當(dāng)紅細(xì)胞生成活性增加特別是鐵缺乏時(shí)會(huì)引起sTfR合成增加，血清中sTfR水平升高。在急性時(shí)相反應(yīng)中sTfR低表達(dá)，因此炎癥、惡性病變患者體內(nèi)sTfR多呈低水平狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示，骨轉(zhuǎn)移組血清ALP、ICTP水平高于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組，血清sTfR水平低于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組，提示血清ALP、ICTP水平升高，sTfR水平降低可能預(yù)示前列腺癌患者有發(fā)生骨轉(zhuǎn)移傾向。

BMP多屬于轉(zhuǎn)化因子β超家族，能夠誘導(dǎo)動(dòng)物或人體間充質(zhì)細(xì)胞分化為骨、軟骨、韌帶、肌腱和神經(jīng)組織[10]，與多種疾病如肥胖、糖尿病、腫瘤等發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[11]。BMP刺激纖維母細(xì)胞增殖，降低破骨細(xì)胞活性，導(dǎo)致新骨生成[12,13]；通過(guò)SMAD、BMP-6途徑刺激鐵調(diào)素生成，調(diào)節(jié)鐵元素水平，影響成骨過(guò)程[14～16]。臨床研究顯示，BMP可通過(guò)腫瘤細(xì)胞合成，并以此將局部轉(zhuǎn)移病灶發(fā)展為骨性表型。本研究結(jié)果顯示，骨轉(zhuǎn)移組癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化評(píng)分均明顯高于無(wú)骨轉(zhuǎn)移組，提示BMP水平升高對(duì)骨轉(zhuǎn)移有預(yù)測(cè)作用。本研究相關(guān)性分析結(jié)果顯示，骨轉(zhuǎn)移患者癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7免疫組化總評(píng)分與血清ALP、ICTP水平呈正相關(guān)，與血清sTfR水平呈負(fù)相關(guān)。提示ALP、ICTP、sTfR與BMP-2、BMP-4、BMP-7之間可能存在內(nèi)在聯(lián)系，上述指標(biāo)的相互作用共同促進(jìn)前列腺癌患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。

綜上所述，前列腺癌患者血清ALP、ICTP水平升高，sTfR水平降低，癌組織BMP-2、BMP-4、BMP-7表達(dá)增加者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的可能性更大；臨床可通過(guò)監(jiān)測(cè)上述指標(biāo)變化，早期預(yù)測(cè)骨轉(zhuǎn)移的可能性，并進(jìn)行早期干預(yù)，以改善患者預(yù)后。

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河南省中醫(yī)藥科學(xué)研究專項(xiàng)項(xiàng)目(2013ZY02045)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.48.027

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B

1002-266X(2017)48-0079-03

2017-02-22)