張麗蓉 鄧金花 宋金武 黃報亮 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 （廣東 廣州 510663）

檸檬酸與熱力協(xié)同殺滅醫(yī)院常見感染菌的效果研究

張麗蓉 鄧金花 宋金武 黃報亮 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司 （廣東 廣州 510663）

目的：觀察檸檬酸消毒液與不同熱力協(xié)同殺滅醫(yī)用常見感染菌的效果，為血液透析機(jī)及其他耐熱醫(yī)療設(shè)備的消毒提供更全面的依據(jù)。方法：采用載體浸泡定量殺菌實(shí)驗(yàn)方法，對檸檬酸消毒液與不同熱力協(xié)同作用對醫(yī)院常見感染菌的殺菌效果進(jìn)行比較。結(jié)果：將含8850mg/L的檸檬酸消毒液分別加溫至50?C作用30min和加溫至60?C作用10min，對肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、乙型溶血性鏈球菌和糞腸球菌的平均殺滅對數(shù)值均＞3.00，對枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對數(shù)值分別為1.94和1.33。將含8850mg/L的檸檬酸消毒液加溫至70?C作用30min，對枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對數(shù)值為5.96。將含8850mg/L的檸檬酸消毒液加溫至80?C作用10min，對枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對數(shù)值為5.94。結(jié)論：檸檬酸消毒液加溫至50?C時，對醫(yī)院常見感染菌具有良好的協(xié)同殺滅作用，加溫至70?C時，對枯草桿菌黑色變種芽孢具有良好的協(xié)同殺滅作用。

檸檬酸 熱力 載體定量法 殺菌效果

近年來，血液透析引起的感染常有報道，究其原因仍然是血液透析機(jī)與透析器消毒不到位，故透析治療結(jié)束后進(jìn)行有效的管路消毒顯得尤為重要[1]。由于目前廣泛使用的碳酸氫鈉透析液在管路中會產(chǎn)生鈣的沉淀，而檸檬酸具有很好的溶解作用，同時檸檬酸為食品添加劑或醫(yī)藥化工原料，毒性低，無刺激性，所以近年來將其與熱力協(xié)同用于血液透析機(jī)管路消毒也逐漸廣泛，其主要?dú)⒕Ч煽?、穩(wěn)定性好、腐蝕性小、使用安全等，可用于耐熱器械的清洗、脫鈣和消毒[2,3]。但目前對檸檬酸消毒液與熱力協(xié)同殺菌作用的研究比較多的是固定在80?C和在血液透析機(jī)上的消毒，對其他熱力溫度下和醫(yī)療設(shè)備的消毒研究比較少。本研究旨在比較檸檬酸消毒液在不同熱力協(xié)同作用下對醫(yī)院常見感染菌的殺菌效果，為血液透析機(jī)的實(shí)際消毒提供更全面的依據(jù)，同時為其他耐熱醫(yī)療器械的消毒提供可行性的參考。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1.材料與方法

1.1 一般材料

實(shí)驗(yàn)用檸檬酸消毒液由廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供，實(shí)驗(yàn)時，用無菌標(biāo)準(zhǔn)硬水配制成不同濃度液體，現(xiàn)配現(xiàn)用。

實(shí)驗(yàn)指示菌為肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae）（CMCC 46117），鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii）（ATCC 19606）、乙型溶血性鏈球菌（Streptococcus pyogens）（ATCC 21059）、糞腸球菌（Enterococcus faecalis）（ATCC 29212）和枯草桿菌黑色變種芽孢（Bacillus subtilis var.niger）（ATCC 9372），均由廣東省微生物菌種保藏中心提供。

染菌載體用滅菌的不銹鋼圓片。

1.2 方法

1.2.1 菌懸液制備

將各實(shí)驗(yàn)菌種經(jīng)過分離培養(yǎng)，取典型菌落接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，培養(yǎng)24h，用其新鮮斜面培養(yǎng)物配制實(shí)驗(yàn)菌懸液。枯草桿菌黑色變種芽孢經(jīng)純化分離單個菌落，用營養(yǎng)肉湯進(jìn)行增菌培養(yǎng)，按照2002版《消毒技術(shù)規(guī)范》[4]中規(guī)定的細(xì)菌芽孢培養(yǎng)程序，制備出細(xì)菌芽孢懸液，用含l000mg/L胰蛋白胨生理鹽水（TPS）將芽孢懸液稀釋配制成含菌量為1.0×108～5.0×108cfu/mL。

1.2.2 菌片制備

取1.2.1制備的菌懸液10μL分別滴染于無菌脫脂不銹鋼圓片上，置37?C溫箱內(nèi)干燥備用。

1.2.3 中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)菌以肺炎克雷伯菌和枯草桿菌黑色變種芽孢為代表，實(shí)驗(yàn)設(shè)6組，按照2002版《消毒技術(shù)規(guī)范》中規(guī)定的中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)程序進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果，以第1組無菌生長或菌數(shù)遠(yuǎn)少于第2組；第2組菌數(shù)超過5cfu/mL；第3、4、5組菌數(shù)為1.0×108～5.0×108cfu/mL，且組間菌落數(shù)誤差小于15%；第6組不長菌，表明所選中和劑及其濃度適宜。實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次。

1.2.4 載體浸泡定量殺菌實(shí)驗(yàn)

在50?C、60?C、70?C和80?C水浴條件下進(jìn)行，按1片菌片5mL的用量，將檸檬酸溶液加入無菌小平皿中（陽性對照用稀釋液），加入預(yù)先制備的菌片，待菌藥相互作用至各預(yù)定時間，用無菌鑷子將菌片分別移入裝有5.0mL中和劑的試管中，中和作用10min，振搖洗脫，使中和作用充分。吸取1.0mL樣液用傾注法接種，待培養(yǎng)基凝固后置于37?C培養(yǎng)，觀察結(jié)果（對細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)24～48h觀察最終結(jié)果，對枯草桿菌黑色變種芽孢培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果），計數(shù)平板菌落數(shù)，計算平均殺滅對數(shù)值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.結(jié)果

2.1 中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，用含10g/L吐溫80?C組成的磷酸鹽緩沖液（PBS）作為中和劑，可有效中和檸檬酸最高實(shí)驗(yàn)濃度溶液對肺炎克雷伯菌和枯草桿菌黑色變種芽孢的殘余作用，且中和劑和中和產(chǎn)物對實(shí)驗(yàn)菌及培養(yǎng)基均無影響（表1）。

2.2 載體浸泡定量殺菌實(shí)驗(yàn)

載體實(shí)驗(yàn)表明，將濃度為8850mg/L檸檬酸溶液加溫至50?C作用30min和加溫至60?C作用10min，對肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、乙型溶血性鏈球菌和糞腸球菌的平均殺滅對數(shù)值均＞3，對枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對數(shù)值為1.94和1.33。將含8850mg/L的檸檬酸溶液加溫至70?C作用30min，對枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對數(shù)值為5.96。將含8850mg/L的檸檬酸溶液加溫至80?C作用10min，對枯草桿菌黑色變種芽孢的平均殺滅對數(shù)值為5.94（表2）。

表1.中和劑鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2.檸檬酸與不同熱力協(xié)同作用下殺菌實(shí)驗(yàn)效果

3.討論

加熱可以提高化學(xué)消毒劑的殺菌活性、可擴(kuò)大殺菌譜、加快殺菌速度，這已經(jīng)得到多數(shù)研究證實(shí)[5]。本研究結(jié)果表明，將檸檬酸消毒液加溫至50?C作用30min或60?C作用10min，對醫(yī)院常見感染菌具有良好的協(xié)同殺滅作用，且隨溫度升高殺滅醫(yī)院常見感染菌的作用明顯增強(qiáng)；而要對枯草桿菌黑色變種芽孢具有良好的協(xié)同殺滅作用，必須要加溫到60?C作用60min或70?C作用30min或80?C作用10min才能得以實(shí)現(xiàn)。檸檬酸具有一定抗菌作用，殺菌力較弱，不可直接用作消毒劑，但在加熱條件下便能顯示出較強(qiáng)的殺菌作用，熱力是促進(jìn)檸檬酸殺菌效果的重要因素，隨著溫度的升高，微生物受到熱力的作用，活動加速且細(xì)胞外殼的通透性改變，導(dǎo)致胞膜功能損傷而使小分子物質(zhì)及降解的核糖體漏出，檸檬酸消毒液的分子運(yùn)動也會改變，滲透性增高，殺菌效果增強(qiáng)[6,7]。

醫(yī)療水平的快速發(fā)展帶來了醫(yī)療設(shè)備的不斷推陳出新，新的醫(yī)療設(shè)備不僅有新的功能，也會采用新的材料、新的操作方法、新的結(jié)構(gòu)，而醫(yī)院的設(shè)備消毒也需要有更加科學(xué)的方法。科學(xué)的消毒方法不僅能夠達(dá)到良好的消毒效果而且可以保護(hù)設(shè)備的性能，延長設(shè)備的使用壽命。所以綜上所述，醫(yī)院耐熱醫(yī)療設(shè)備的消毒可以根據(jù)實(shí)際情況，綜合操作、保養(yǎng)、機(jī)器故障率、能耗等多方面因素，選擇科學(xué)的消毒方法，以及合適的溫度、時間等參數(shù)。

[1] 陳維,宋金武,鄧金花,等.一種血液透析機(jī)消毒專用過氧乙酸的殺菌效果觀察[J].中國消毒學(xué)雜志,2014,31(4):336.

[2] 林秋蟬,吳清平,鄧金花,等.比較兩種方法測定檸檬酸與熱力協(xié)同殺菌作用[J].中國消毒學(xué)雜志,2013,30(2):103.

[3] 黎燕紅,麥志芹,梁巧媚,等.血液透析機(jī)旁路應(yīng)用三種消毒法的效果對比分析[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志,2016,26(9):99-100.

[4] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.消毒技術(shù)規(guī)范[S].北京:中華人民共和國衛(wèi)生部,2002.

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Study on Combined Killing Common Nosocomial Infectious Bacteria Effect of Citric Acid and Heat

ZHANG Li-rong DENG Jin-hua SONG Jin-wu HUANG Bao-liang Guangdong Huankai Microbial Sci.&Tech.Co., Ltd. (Guangdong Guangzhou 510663)

Objective: To study the sterilizing effect of citric acid disinfectant and different heat in the killing of common nosocomial infectious bacteria, provides a more comprehensive basis for practical disinfection of hemodialysis machine and other heat-resistant medical equipment.Methods: The carrier immersion quantitative germicidal method was used to comparison of the sterilizing effects of citric acid disinfectant and different heat in the killing of common nosocomial infectious bacteria.Results: The average killing logarithm values of Klebsiella Pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Streptococcus pyogens and Enterococcus faecalis spores to citric acid disinfectant with the concentration of 8850mg/L for 30min when heated to 50?C or for 10min when heated to 60?C were higher than 3.00,the average killing logarithm values of Bacillus subtilis var.niger were 1.94 and 1.33 .The average killing logarithm values of Bacillus subtilis var.niger spores to citric acid disinfectant with the concentration of 8850mg/L for 30min when heated to 70?C was 5.96, The average killing logarithm values of Bacillus subtilis var.niger spores to citric acid disinfectant with the concentration of 8850mg/L for 10min when heated to 80?C was 5.94.Conclusion: When heat up to 50?C, citric acid disinfectant has good synergistic effect on common nosocomial infectious bacteria ; heat up to 70?C, it has good synergistic effect on Bacillus subtilis var.niger.

citric acid, heat, carrier quantitative method, sterilizing effect

1006-6586(2017)23-0150-03

R187

A

2017-09-25

張麗蓉，助理工程師，從事微生物安全監(jiān)測與控制產(chǎn)品的研究工作；鄧金花，通訊作者。

廣州市科技項目（201610010172）。