劉蓉芳 ，譚 雄 ，張 輝 ，毛湘屏 ，楊 柳 ，陳志成 ，毛以林 *

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005）

·基礎(chǔ)研究·

慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表達(dá)差異研究

劉蓉芳1，譚 雄2，張 輝2，毛湘屏2，楊 柳2，陳志成2，毛以林2*

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005）

目的探討慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/Caspases表達(dá)差異。方法30只SD大鼠隨機(jī)分為正常組10只，模型組20只。正常組等容量生理鹽水腹腔注射，模型組予阿霉素腹腔注射造模；采用心臟彩超檢測(cè)心功能，采用生理記錄儀記錄血流動(dòng)力學(xué)，心臟切片行Tunel染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡，采用Real-time PCR法檢測(cè)miRNA-1、miRNA-133、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA表達(dá)；采用Western blot及免疫組化法檢測(cè)心肌組織Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)水平。結(jié)果與正常組比，模型組大鼠左室舒張期內(nèi)徑（LVIDd）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）、左心室終末舒張壓（LVEDP）明顯增大(P＜0.05)，而左心室短軸縮短率（LVFS）、左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、心輸出量（CO）、左心室平均壓（LVAP）、左心室內(nèi)壓最大上升速率（dp/dtmax）及左心室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmax）下降(P＜0.01)，Tunel染色示心肌凋亡明顯。 miRNA-1、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA、Caspase-3 蛋白、Caspase-9 蛋白表達(dá)增加(P＜0.01)，miRNA-133 表達(dá)下降(P＜0.01)。結(jié)論miRNA-1、Caspase-3、Caspase-9 在心肌凋亡中表達(dá)增加，miRNA-133表達(dá)下降。

慢性心衰；心肌凋亡；miRNA-1；miRNA-133；Caspase-3；Caspase-9

心肌細(xì)胞凋亡是心力衰竭心臟重構(gòu)主要表現(xiàn)形式之一，參與心肌梗死、心力衰竭、心房顫動(dòng)及主動(dòng)脈狹窄等心臟性疾?。?-3］的病理過程。微小RNA（microRNA，miRNA）是存在于真核生物中的非蛋白質(zhì)編碼RNA分子，主要通過與靶基因mRNAs3’非編碼區(qū)結(jié)合，降低mRNA分子的穩(wěn)定性，導(dǎo)致其降解，或抑制靶mRNA的轉(zhuǎn)錄后翻譯過程來實(shí)現(xiàn)調(diào)控靶基因表達(dá)[4-5]。 微小 RNA-1（microRNA-1，miRNA-1）和微小 RNA-133 （microRNA-133，miRNA-133）是肌肉組織特異性表達(dá)miRNA，在肌肉及心臟中具有重要作用，并均可通過調(diào)控半胱胺酸天冬氨酸酶（Caspases）家族蛋白表達(dá)，從而調(diào)控心肌細(xì)胞調(diào)亡［6］。在Caspase家族蛋白中，Caspase-9處于凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)上游，傳遞激活信號(hào)去下游，Caspase-3是凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)下游最關(guān)鍵的凋亡蛋白酶，主要執(zhí)行凋亡程序。但目前國(guó)內(nèi)關(guān)于慢性心衰心肌凋亡中miRNA-1、miRNA-133、 Caspase-3、Caspase-9表達(dá)及調(diào)控的研究報(bào)道較少，因此本研究通過制作慢性心衰大鼠模型，觀察心衰模型大鼠miRNA-1、miRNA-133/Caspase-3、Caspase-9差異表達(dá)，探討心肌凋亡與 miRNA-1、miRNA-133/Caspase-3、Caspase-9 表達(dá)關(guān)系，為研究心衰的發(fā)生機(jī)制提供新思路。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

5周齡SPF級(jí)SD大鼠30只購于湖南斯克達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司 （實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：43004700025 096）。 飼養(yǎng)溫度20～25℃，濕度50%～70%，體質(zhì)量（160±20） g，雌雄各半。

1.2 藥品及主要儀器

注射用鹽酸阿霉素（深圳萬樂藥業(yè)有限公司），引物（上海生工合成）。HRP goat anti-rabbit IgG（美國(guó) Proteintech），miRNA引物 （上海生工合成），Western-blotting及免疫組化檢測(cè)一抗Caspase-3（美國(guó) CST，Rabbit）,Caspase-9 （美國(guó) proteintech，Rabbit），actin（美國(guó) proteintech，Mouse），二抗 HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)（美國(guó) proteintech），HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)（美國(guó) proteintech），免疫組化二抗通用型二步法檢測(cè)試劑盒PV-9000（中杉金橋,北京），Tunel試劑盒（武漢博士德）。Motic B5顯微攝像圖像分析系統(tǒng)（麥克奧迪），BX43型雙目生物攝像顯微鏡（日本OLYMPUS），便攜式彩色多普勒超聲儀 （DW-PF522，徐州市大為電子設(shè)備有限公司）。BL-420F生理記錄儀，成都泰盟科技有限公司。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及造模

動(dòng)物適應(yīng)飼養(yǎng)1周后隨機(jī)取10只為正常組，余下20大鼠行阿霉素造模。造模方法參考文獻(xiàn)[7]。注射用鹽酸阿霉素按1.5 mg/kg注射，每周2次，共7周。超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左心室短軸縮短率 (LVFS)＜30%，即為心衰造模成功[8]。

2.2 指標(biāo)及檢測(cè)方法

2.2.1 大鼠行為學(xué)觀察及死亡情況 8周后處死動(dòng)物,處死前夜禁食。實(shí)驗(yàn)全程觀察大鼠活動(dòng)狀態(tài)、飲食情況、毛色變化、大小便等，同時(shí)統(tǒng)計(jì)大鼠死亡情況。

2.2.2 心臟超聲檢測(cè)大鼠心功能 大鼠用10%水合氯醛溶液按3 mL/kg麻醉后固定，前胸備皮涂搽脫毛膏及耦合劑，彩色多譜勒超聲診斷儀取大鼠左心室長(zhǎng)軸切面后進(jìn)行M超聲檢測(cè)，連續(xù)記錄10個(gè)心動(dòng)周期，測(cè)量左室舒張期內(nèi)徑（LVIDd mm）、左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD mm）、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、左心室短軸縮短率(LVFS)、心輸出量（CO）,所有數(shù)據(jù)均測(cè)量3次并取其平均值記錄。

2.2.3 生理記錄儀監(jiān)測(cè)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo) 心臟彩超完畢后，分離出大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈1.5～2 cm，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，夾閉近心端，動(dòng)脈導(dǎo)管平行推進(jìn)頸動(dòng)脈后，以振幅高大、波寬較大心室內(nèi)壓力波為標(biāo)志，記錄心室壓力曲線，計(jì)算左心室平均壓(LVAP)、左心室終末舒張壓(LVEDP)、左心室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dtmax)、左心室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax)。

2.2.4 Tunel染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡 打開胸腔，剪下心臟，去掉心房及右室，余下左心室投入10%多聚甲醛溶液固定、石蠟包埋、切片，依次二甲苯透明、 梯度乙醇脫水、PBS漂洗，50 μL TdT+450 uL熒光素標(biāo)記后反應(yīng)l0 min。再加50 μL Tunel反應(yīng)混合液，PBS漂洗、DAPI染色，封片。在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞。隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)不同視野的凋亡細(xì)胞及細(xì)胞總數(shù)，計(jì)算凋亡細(xì)胞平均灰度值。

2.2.5 Real-time PCR 法檢測(cè) miRNA-1、miRNA-133及 Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA 表達(dá)取大鼠左心室心尖部分適量，Trizol法提取大鼠心臟組織總RNA，行RNA瓊脂糖凝膠電泳。取2 μg以組織總mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄cDNA，42℃孵育15 min，85℃孵育5 min，冰上冷卻，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于熒光定量PCR反應(yīng)。檢測(cè)miRNA者行miRNA反轉(zhuǎn)錄，根據(jù)所用RNA的量，合成修飾后的miRNA cDNA第一鏈，向冰浴中預(yù)冷的無RNase反應(yīng)管中加入 Poly(A)反應(yīng)液 4 μL+超純 dNTPs(10 mM each)1 μL+25 μM RT primer3 uL+5×RT Buffer 4 μL+SuperRT Reverse Transcriptase 0.5 μL+RNase-Free Water7.5 μL， 至終體積20 uL，反應(yīng)終止后，合成的cDNA反應(yīng)液可以直接進(jìn)行熒光定量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。以各檢測(cè)基因引物（引物序列見表1）進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR。定量PCR擴(kuò)增條件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，40 個(gè)循環(huán)。收集每循環(huán)第3個(gè)步驟熒光信號(hào)量，以2-ΔΔCt反映各樣品相對(duì)于對(duì)照組樣品目的基因的表達(dá)水平，-ΔΔCt=對(duì)照組 ΔCt-各樣品 ΔCt，ΔCt=目的ΔCt-內(nèi)參ΔCt。每個(gè)樣本重復(fù)3次，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。在網(wǎng)址http://www.mirbase.org/cgi-bin/query.pl?terms=214中搜索 miRNA-1、miRNA-133序列，在 NCBI上搜索 Caspase-3、Caspase-9基因的序列，primer5軟件設(shè)計(jì)引物，由上海生工合成。引物資料見表1。

表1 引物名稱序列及產(chǎn)物長(zhǎng)度

2.2.6 Western blot檢測(cè)心肌組織Caspase-3、Caspase-9蛋白含量 剪取0.25 g組織加入200 μLRIPA裂解液蛋白裂解，4℃，12 000 r/min離心15 min，取上清分裝離心管中；照BCA蛋白定量試劑盒（Wellbio）使用說明操作，測(cè)定蛋白濃度。然后電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育：用1×TBST將一抗按照一定比例稀釋[Caspase-3（1∶1 000），Caspase-9（1:200），actin（1∶4 000）]，將膜與一抗一起孵育，4℃過夜。孵育結(jié)束，1×TBST洗3次，每次15 min，然后二抗孵育：用1×TBST 稀釋 HRP 標(biāo)記的二抗（Proteintech），稀釋比例鼠抗（M）1∶4 000，兔抗（R）1∶6 000，將稀釋后的二抗與膜共同孵育45～60 min。孵育結(jié)束，1×TBST洗3次，每次15 min。最后顯色、曝光，使用ECL化學(xué)發(fā)光液（Thermo）與膜孵育3 min，用吸水紙吸盡液體，用保鮮膜將膜包裹雜交膜，在暗盒內(nèi)與X膠片曝光數(shù)秒至數(shù)分鐘；顯影沖洗。將曝光后的底片掃描，并用quantity one專業(yè)灰度分析軟件進(jìn)行分析。以目的蛋白與β-actin的光密度比值表示目的基因在蛋白水平的表達(dá)。

2.2.7 二步免疫組化法檢測(cè)心肌組織Caspase-3、Caspase-9蛋白含量 心肌切片經(jīng)脫蠟、脫水后，3%雙氧水阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，入微波爐修復(fù)，冷卻，加 1∶100 一抗（Caspase-3、Caspase-9）4 ℃過夜；PBS洗3次；加二抗，PBS洗3次；每片滴二甲基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液，水洗蘇木精復(fù)染；脫水、透明、封片。MOTIC圖像分析系統(tǒng)在×400倍光學(xué)顯微鏡下對(duì)Caspase-3、Caspase-9陽性結(jié)果進(jìn)行半定量分析：每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)觀察6個(gè)視野，以陽性產(chǎn)物面積/視野面積表示該蛋白的相對(duì)含量，并取其平均值，重復(fù)3次。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。全部計(jì)量資料用“±s”表示，先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，滿足正態(tài)性時(shí)，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，不滿足正態(tài)性時(shí)選擇秩和檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠行為學(xué)觀察及死亡情況

正常組大鼠鼠毛光澤、貼順，眼睛有神，活潑，反應(yīng)靈敏，飲食及二便正常，體質(zhì)量增加明顯，大鼠無死亡；模型組大鼠鼠毛無光澤、脫落，喜靜倦怠，大鼠有腹水，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢，多數(shù)大鼠大便稀，大鼠因嚴(yán)重腹水死亡5只。

3.2 兩組大鼠心功能比較

與正常組比，模型組LVIDd、LVESD明顯增大而 LVFS、LVEF 及 CO 下降（P＜0.05，P＜0.01)，見表 2。

表2 兩組大鼠心臟彩超數(shù)值比較 （±s）

表2 兩組大鼠心臟彩超數(shù)值比較 （±s）

注：與正常組相比，#P＜0.05； ##P＜0.01。

組別正常組模型組F值P值n 10 15 LVIDd/mm 4.02±0.81 6.56±1.31#4.610 0.040 LVESD/mm 2.68±0.43 8.95±2.34##9.125 0.000 LVEF/%90.17±2.20 31.04±4.13##58.65 0.000 LVFS/%55.85±10.08 27.32±2.32##26.64 0.000 CO/mL·min-1 76.96±5.06 46.28±2.90##41.017 0.000

3.3 兩組大鼠血流動(dòng)力學(xué)比較

與正常組相比，模型組LVAP、dp/dtmax、-dp/dtmax明顯降低(P＜0.01)，LVEDP 明顯增高(P＜0.01)，見表3。

表3 兩組大鼠心臟血流動(dòng)力學(xué) （±s）

注：與正常組相比，##P＜0.01。

組別 n正常組模型組F值P值10 15 LVAP/mmHg 133.9±11.56 86.55±9.80##79.85 0.000 LVEDP/mmHg 3.94±0.75 15.29±2.20##50.12 0.000 dp/dtmax/mmHg·s-1 6 610±841.4 4 126±925.9##109.1 0.000-dp/dtmax/mmHg·s-1 6 454±700.1 2 367±1216##121.06 0.000

3.4 Tunel法檢測(cè)細(xì)胞凋亡

400×光鏡下觀察：Tunel染色示正常細(xì)胞核呈長(zhǎng)梭形，藍(lán)色，排列規(guī)整，凋亡心肌細(xì)胞呈棕褐色。模型組與正常組相比，棕褐色壞死顆粒物質(zhì)明顯增多，表明模型組心肌凋亡明顯，棕褐色顆粒物質(zhì)平均灰度值較正常組明顯增高 (P＜0.01)；見表4，圖1。

表4 兩組大鼠心臟切片Tunel灰度值 （±s）

表4 兩組大鼠心臟切片Tunel灰度值 （±s）

注：與正常組相比，##P＜0.01。

組別正常組模型組F值P值n 10 15灰度值72.65±4.37 129.5±6.84##77.79 0.000

圖1 兩組大鼠心肌切片光鏡圖（Tunel染色，×400）

3.5 Real-time PCR 法檢測(cè) miRNA-1、miRNA-133、Caspase-3mRNA、Caspase-9mRNA 表達(dá)

與正常組相比，模型組miRNA-1、Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA 表達(dá)增加，miRNA-133表達(dá)下降(P＜0.01)，表明心肌凋亡組組織中，miRNA-1、Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA 表達(dá)增加 ；miRNA-133表達(dá)下降，見表5。

表5 兩組大鼠基因表達(dá)量比較 （±s）

表5 兩組大鼠基因表達(dá)量比較 （±s）

注：與正常組相比，##P＜0.01。

組別正常組模型組F值P值n 10 15 miRNA-1 0.96±0.11 2.64±0.29##78.49 0.000 miRNA-133 1.11±0.12 0.25±0.09##109.9 0.000 Caspase-3 mRNA 1.00±0.05 1.49±0.13##9.618 0.000 Caspase-9 mRNA 0.99±0.55 2.79±0.20##142.6 0.000

3.6 Western blot法(WB法)及免疫組化法檢測(cè)Caspase-3、Caspase-9 蛋白表達(dá)

免疫印跡法及免疫組化法顯示，與正常組相比，模型組 Caspase-3、Caspase-9 蛋白表達(dá)增加（P＜0.01），免疫組化染色顯示心肌棕褐色顆粒陽性表達(dá)較多，表明在凋亡心肌組織中Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)亦升高，與Caspase-3、Caspase-9mRNA表達(dá)一致。 見表6、圖 2、圖3。

表6 兩組大鼠Caspase-3、Caspase-9蛋白質(zhì)表達(dá) （±s）

表6 兩組大鼠Caspase-3、Caspase-9蛋白質(zhì)表達(dá) （±s）

注：與正常組相比，##P＜0.01。

組別 n Caspase-3 WB（15KD） WB（35KD） 免疫組化Caspase-9 WB 免疫組化正常組模型組F值P值10 15 0.21±0.03 0.37±0.05##10.69 0.000 0.17±0.03 0.40±0.07##5.508 0.000 86.1±6.77 163.2±15.80##14.85 0.000 0.18±0.038 0.49±0.12##48.82 0.000 35.6±6.75 132.8±10.52##30.98 0.000

圖2 兩組大鼠Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)電泳圖

圖3 兩組大鼠心肌切片光鏡圖（免疫組化，×400）

4 討論

心肌細(xì)胞調(diào)亡是受相關(guān)基因嚴(yán)格控制的主動(dòng)過程,在慢性心力衰竭（CHF）發(fā)生、發(fā)展過程中，由于許多病理因素（如腎上腺素、血管緊張素Ⅱ、氧化應(yīng)激、致炎細(xì)胞因子、缺血、壓力或容量負(fù)荷過重、缺氧等）均可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡［9］。心力衰竭心肌凋亡的途徑由外源性途徑（涉及細(xì)胞表面死亡受體）和內(nèi)源性途徑（涉及線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）兩條通路介導(dǎo)。外源性途徑中，死亡配體結(jié)合死亡受體，通過Caspase-8激活下游的Caspase，觸發(fā)線粒體凋亡事件。內(nèi)源性途徑被多種生物、化學(xué)和物理刺激所激活,傳遞到線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，觸發(fā)形成凋亡體，激活Caspase-9隨后剪切并激活下游的Caspase,并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。由此可知，兩條通路最終都要通過激活Caspases介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡并參與慢性心衰的發(fā)生、發(fā)展，而其中Caspase-3，是Caspase家族中最重要的凋亡執(zhí)行者之一，是凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)下游最關(guān)鍵的凋亡蛋白酶,它的激活是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志［10］，上游的Caspase-9在細(xì)胞凋亡過程中被各種促凋亡因子形成的凋亡體所激活，從而對(duì)Caspase-3產(chǎn)生作用，使其執(zhí)行凋亡程序。Caspase-3是經(jīng)典凋亡通路后期的共同途徑。近年來的研究認(rèn)為，在分子水平上，下調(diào)Caspase蛋白表達(dá)對(duì)于干預(yù)心室重構(gòu)乃至心力衰竭具有重要意義。

微小RNA(microRNA)長(zhǎng)約20～25個(gè)核苷酸，是存在于真核生物中的非蛋白質(zhì)編碼RNA分子，幾乎參與調(diào)控人類生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)階段。研究發(fā)現(xiàn)，心肌中存在著大量調(diào)節(jié)心血管疾病的相關(guān)miRNAs，但MiRNA-1、miRNA-133是橫紋肌組織包括心肌中特異性表達(dá)的miRNA，廣泛參與心臟發(fā)育、心肌肥厚、心肌損傷、凋亡和心律失常等心臟生理和病理生理過程。miRNA可通過調(diào)控半胱胺酸天冬氨酸酶（Caspases）家族蛋白表達(dá)，從而調(diào)控心肌細(xì)胞調(diào)亡［6］。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，與正常組比，模型組大鼠出現(xiàn)死亡較多，LVIDd、LVESD、LVEDP 明顯增大而 LVFS、LVEF、CO、LVAP、dp/dtmax及-dp/dtmax 下降，Tunel染色棕褐色壞死顆粒物質(zhì)明顯增多，表明模型組大鼠心衰心功能明顯下降，同時(shí)心肌凋亡明顯。進(jìn)一步的基因表達(dá)研究表明凋亡心肌中miRNA-1、Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA 表達(dá)增加；miRNA-133表達(dá)下降；蛋白質(zhì)表達(dá)方面，Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)亦升高，與 Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA表達(dá)一致。由此可知，miRNA-1與miRNA-133在心肌凋亡中作用可能相反，miRNA-1心肌凋亡中表達(dá)增加、miRNA-133表達(dá)下降；在miRNA與Caspase二者關(guān)系表達(dá)上，既往國(guó)外有研究報(bào)道m(xù)iRNA-1通過正性調(diào)控Caspase-3促進(jìn)細(xì)胞凋亡[11］，miRNA-133可能是靶向抑制Caspase-9的表達(dá)從而抑制心肌細(xì)胞凋亡［12］。本研究中觀察到 miRNA-1與 Caspase-3、Caspase-9呈正相關(guān)，miRNA-133 與 Caspase-3、Caspase-9 呈負(fù)相關(guān)，而是否存在miRNA-1正性調(diào)控Caspase-3、miRNA-133靶向抑制Caspase-9的關(guān)系需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

miRNA及其調(diào)控的靶基因在心血管疾病的病理過程中扮演著非常重要的角色［13］。明確miRNA及其對(duì)靶基因的調(diào)控，尋找心血管系統(tǒng)重大疾病的藥物治療新靶點(diǎn)，是今后心血管藥物研發(fā)的新的發(fā)展方向。

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Differential Expression of miRNA-1,miRNA133/Caspases in Rats with Chronic Heart Failure

LIU Rongfang1,TAN Xiong2,ZHANG Hui2,MAO Xiangping2,YANG Liu2,CHEN Zhicheng2,MAO Yilin2*
(1.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China;2.The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410005,China)

ObjectiveTo investigate the different expression of miRNA1,miRNA133/Caspases in rats with chronic heart failure.Methods30 SD rats were randomly divided into the normal control group (n=10),the model group (n=20).The normal group was injected intraperitoneally with equal volume normal saline,the model group was injected with doxorubicin intraperitoneally for modeling.The cardiac function was examed by color doppler ultrasound and hemodynamics was recorded.The cell apoptosis was determined by Tunnel staining method.The expression of miRNA-1,miRNA-133,Caspase-3mRNA,Caspase-9mRNA was determined by Real-time PCR,and the expression level of Caspase-3 and Caspase-9 in myocardial tissue of rats was detected by Western blot and immunohistochemistry.ResultsCompared with the normal group,the LVIDd,LVESD and LVEDP of rats in the model group increased significantly(P＜0.05),while LVFS,LVEF,CO,LVAP,dp/dtmax and-dp/dtmax decreased(P＜0.01).The myocardial apoptosis was obvious.The expression of miRNA-1,Caspase-3mRNA,Caspase-9mRNA,protein of Caspase-3 and Caspase-9 increased(P＜0.01),and miRNA-133 decreased (P＜0.01).ConclusionThe expression of miRNA-1,Caspase-3 and Caspase-9 increased and miRNA-133 decreased in myocardial apoptosis.

chronic heart failure;myocardial apoptosis;miRNA-1;miRNA-133;Caspase-3;Caspase-9

R541.6

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.12.008

本文引用：劉蓉芳，譚 雄，張 輝，毛湘屏，楊 柳，陳志成，毛以林.慢性心衰大鼠心肌miRNA-1、miRNA-133/caspases表達(dá)差異研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（12）：1326-1330.

2017-07-28

湖南省自然科學(xué)基金（2016JJ4068）；湖南省中醫(yī)藥科研計(jì)劃（201610）。

劉蓉芳，女，在讀讀博士研究生，中醫(yī)內(nèi)科專業(yè)。

*毛以林，男，博士研究生導(dǎo)師，E-mail:maoyilin8518@126.com。

（本文編輯 楊 瑛）