盧玉元，王新

（佳木斯大學(xué)，黑龍江 佳木斯 154007）

聯(lián)合檢測Annexin A3和EZH2蛋白在乳腺癌組織中的表達及臨床意義

盧玉元，王新*

（佳木斯大學(xué)，黑龍江 佳木斯 154007）

目的：聯(lián)合檢測乳腺癌組織中Annexin A3和EZH2蛋白的表達情況并探討其臨床意義。方法：采用免疫組化Max Vision法檢測Annexin A3和EZH2蛋白在各50例乳腺正常組織、乳腺浸潤性小葉癌（ILC）、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌（IDC）組織中的表達情況及二者的相關(guān)性。結(jié)果：Annexin A3和EZH2蛋白在ILC與IDC組織中的表達差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但在乳腺正常組織中的表達低于在ILC與IDC組織中的表達（P＜0.05）。Annexin A3和EZH2蛋白的表達與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)類型、pTNM分期等臨床病理特征均無關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分子亞型等有關(guān)（P＜0.05）。Annexin A3和EZH2蛋白在乳腺癌組織中的表達呈正相關(guān)（r=0.2，P＜0.05）。結(jié)論：Annexin A3和EZH2蛋白在ILC及IDC組織中的表達升高，二者表達呈正相關(guān)。Annexin A3、EZH2有望成為乳腺癌的腫瘤標(biāo)記物，對乳腺癌的早期診斷、治療和判斷乳腺癌患者的預(yù)后具有重要的提示作用。

乳腺癌；乳腺浸潤性小葉癌；乳腺浸潤性導(dǎo)管癌；Annexin A3；EZH2

有數(shù)據(jù)顯示，全球女性癌癥患者中，乳腺癌占其中20%以上，在發(fā)達國家發(fā)生率升高至近30%，每年約有459 000人因乳腺癌去世［1］。乳腺癌會因地區(qū)的不同呈現(xiàn)出不同的發(fā)生率，在歐洲、北美洲、澳洲等地的富人中，在75歲以下婦女中有6%的婦女患有乳腺癌，而在東南亞及一些非洲不發(fā)達地區(qū)，其發(fā)生率僅是發(fā)達國家的1/3［2］。EZH2是一種在胚胎早期發(fā)育中普遍存在的轉(zhuǎn)錄抑制因子，參與基因沉默，在細(xì)胞周期中具有重要調(diào)控作用，是目前候選癌基因中一種屬于PcG基因家族的重要的原癌基因［3］。膜聯(lián)蛋白（Annexin）是一種與多種腫瘤的演進或侵襲、轉(zhuǎn)移均有關(guān)聯(lián)的蛋白，參與細(xì)胞分化、增殖與凋亡、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等一系列生理過程，Annexin A3是Annexin家族中在多種惡性腫瘤中都出現(xiàn)表達失調(diào)的一種蛋白，腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后與其表達失調(diào)有著密切的關(guān)聯(lián)［4］。本實驗采用免疫組化Max Vision法檢測Annexin A3、EZH2蛋白在乳腺正常組織、乳腺浸潤性小葉癌（ILC）及乳腺浸潤性導(dǎo)管癌（IDC）組織中的表達情況，并分析二者與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系以及二者的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.3 結(jié)果判斷 EZH2主要以高倍鏡視野下細(xì)胞核被染成黃色或棕黃色為陽性，每張切片隨機取8個高倍視野。采用半定量評分方法，不染色被判為陰性。（1）按染色強度計分0、1、2、3分，分別為未著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色；（2）按陽性細(xì)胞百分比計分0、1、2、3、4分，分別為無陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞數(shù)小于25%、25%～50%、50%～75%、大于 75%。（1）×（2）分值＞3分判定為陽性。Annexin A3以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，每張切片隨機取8個高倍視野，陽性細(xì)胞比例小于10%為陰性（-），10%～50%為弱陽性（+），50%～75%為陽性（++），大于75%為強陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，Annexin A3和EZH2在乳腺癌和乳腺正常組織的表達采用χ2檢驗，二者的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Annexin A3和EZH2蛋白在乳腺正常組織、ILC及IDC組織中的表達 Annexin A3和EZH2在ILC與IDC組織中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），二者在乳腺正常組織中的表達低于在ILC與IDC組織中的表達（P＜0.05），見表1。

表1 EZH2和Annexin A3在乳腺正常組織、ILC、IDC組織中的表達

2.2 Annexin A3和EZH2表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 EZH2與Annexin A3表達與患者年齡、組織學(xué)類型、絕經(jīng)狀態(tài)、pTNM分期均不相關(guān)（P＞0.05），與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分子亞型有關(guān)（P＜0.05），見表2。

表2 Annexin A3和EZH2表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

續(xù)表2 Annexin A3和EZH2表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 Annexin A3和EZH2蛋白在乳腺癌組織中表達的相關(guān)性 EZH2蛋白與Annexin A3蛋白在乳腺癌組織中的表達呈正相關(guān)（r=0.2，P＜0.05），見表3。

表3 Annexin A3和EZH2蛋白表達之間的關(guān)系

3 討論

Annexin A3是Annexins家族成員之一，由323個氨基酸殘基組成，位于人染色體4q13-q22。在多種類型的腫瘤中均出現(xiàn)了表達失調(diào)的情況，Liu等［5］研究指出Annexin A3蛋白在肺癌組織中的表達會隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況而顯著升高，與本研究Annexin A3蛋白在乳腺癌組織中的表達情況也會隨著淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移而升高的結(jié)果相符合。然而，Kollermann等［6］在對1 589例前列腺癌組織的研究顯示，Annexin A3蛋白在前列腺癌組織中的表達情況比在良性前列腺組織及高級別上皮內(nèi)瘤變中的表達情況要低很多，這與本研究結(jié)果相駁斥，其原因可能是因為腫瘤來源不同，也可能與樣本量大小相關(guān)。這提示我們在不同的組織Annexin A3所起的作用可能并不相同［7］。

EZH2是一種在肺癌、胰腺導(dǎo)管腺癌、膀胱癌、前列腺癌均高表達的PCG基因家族中的一員，其高表達被認(rèn)為是預(yù)后差的重要原因。EZH2的異常表達可使轉(zhuǎn)錄機制失調(diào)，其在多種惡性腫瘤組織中高表達，提示了其有可能成為一種新的腫瘤標(biāo)志物，進一步揭示其潛在的臨床價值成為了當(dāng)前的研究熱點［8-10］。EZH2蛋白在乳腺癌組織中的表達與是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，其高表達的病例術(shù)后無癌癥復(fù)發(fā)間歇期短，生存率低，病死率高［11］。

本研究通過免疫組化Max Vision法來檢測Annexin A3和EZH2蛋白在ILC、IDC及乳腺正常組織中的表達情況，Annexin A3和EZH2蛋白在ILC、IDC組織中的表達均高于乳腺正常組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；Annexin A3和EZH2蛋白在ILC、IDC組織中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明Annexin A3和EZH2均有望作為乳腺良惡性鑒別的客觀指標(biāo)，但均不能作為ILC和IDC特異性的指標(biāo)。Annexin A3和EZH2表達與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、組織學(xué)類型、pTNM 分期均無關(guān)（P＞0.05）。Annexin A3與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分子亞型有關(guān)（P＜0.05），提示AnnexinA3在乳腺上皮的惡性轉(zhuǎn)變過程中表達上調(diào)，其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系，可能促進了淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，在促進乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中有一定的作用。EZH2的表達與乳腺癌腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分子亞型相關(guān)（P＜0.05），說明EZH2蛋白過表達可能會促進乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移，其表達水平的高低可在一定程度上決定乳腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。研究顯示EZH2在乳腺癌組織中的表達情況與臨床分期不相關(guān)，這與Collett等［12］報道相駁，這可能是本研究樣本量小有關(guān)。本研究中EZH2與Annexin A3二者在乳腺癌組織中的表達呈正相關(guān)（r＝0.2，P＜0.05），提示EZH2蛋白在腫瘤中的表達可能受Annexin A3蛋白的調(diào)控。今后EZH2與Annexin A3可能為乳腺癌的治療提供新的靶點，在乳腺癌的診斷和治療上，二者有望為其尋求新的路徑。

［1］ Lakhani SR，Ellis IO，Schnitt SJ，et al.World health organization classification of tumors of the breast［M］.Lyon： IARC Press，2012：14-15.

［2］ Youlden DR，Cramb SM，Dunn NA， et al.The descriptive epidemiology of female breast cancer： an international comparison of screening，incidence，survival and mortality［J］.Cancer Epidemiol，2012，36（3）：237-248.

［3］Hobert O，Jallal B，Ullrich A.Interaction of Vav with ENX-1，a putative transcriptional regulator of homeobox gene expression［J］.Mol Cell Biol，1996，16（6）：3066-3073.

［4］博燕萍，吳志明，范乘龍，等.Annexin A3在乳腺癌中的表達及臨床意義［J］.實用腫瘤雜志，2015，30（6）：567-569.

［5］ Liu Y，Li Y，Tan BB，et al.Technique appraisement of comparative proteomics and screening of differentiation-related protein in gastric carcinoma［J］.Hepatogastroenterology， 2013， 60（123）：633-637.

［6］K?llermann J，Schlomm T，Bang H，et al.Expression and prognostic relevance of annexin A3 in prostate cancer［J］.Eur Urol，2008，54（6）：1314-1323.

［7］邱海江，吳志明，王曉稼.Annexins與惡性腫瘤的關(guān)系研究［J］.腫瘤學(xué)雜志，2014，20（2）：156-161.

［8］包合新，李建國，邢桂濱.EZH2和Bmi-1基因在結(jié)直腸癌組織中的表達及其意義［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2014，37（1）：10-12.

［9］Duan Z，Zou JX，Yang P，et al.Developmental and androgenic regulation of chromatin regulators EZH2 and ANCCA/ATAD2 in the prostate Via MLL histone methylase complex［J］.Prostate，2013，73（5）：455-466.

［10］ Knutson SK，Warholic NM，Wigle TJ，et al.Durable tumor regression in genetically altered malignant rhabdoid tumors by inhibition of methyltransferase EZH2［J］.Proc Natl Acad U S A，2013，110（19）：7922-7927.

［11］胡赟宏，林曉燕，崔嶸嶸，等.EZH2蛋白在乳腺癌中的表達及其臨床意義［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2013，13（7）：63-64.

［12］ Collett K，Geir E，Arnes J，et al.Expression of enhancer of zeste homologue 2 is significantly associated with increased tumor cell proliferation and is a marker of aggressive breast cancer［J］.Clin Cancer Res，2006，12（4）：1168-1174.

Expression of Annexin A3 and EZH2 Proteins in Breast Cancer Tissue and Their Clinical Significance

LU Yuyuan，WANG Xin*
（Jiamusi University，Jiamusi 154007，China）

Objective：To detect the expression of Annexin A3 and EZH2 proteins in the breast cancer tissue and explore their clinical significance.Methods：Immunohistochemical Max Vision method was used to detect the expression of Annexin A3 and EZH2 proteins in normal breast tissue，breast invasive lobular carcinoma（ILC），breast infiltrating ductal carcinoma（IDC）tissues（each of 50 cases）and the correlation between them was analyzed.Results：In ILC and IDC tissues， the expression of Annexin A3 and EZH2 had no statistical significance（P ＞ 0.05），but the expression level in normal breast tissue was lower than that in ILC and IDC tissues （P＜0.05）.The expression of Annexin A3 and EZH2 had no correlation with patients′age， menopausal status，histology， pTNM staging （P＞0.05）， but with tumor size， lymph node metastasis， and molecular subtypes （P＜0.05）.The expression of Annexin A3 and EZH2 proteins in breast cancer tissue was positively correlated （r=0.2，P＜0.05）.Conclusions：The expression of Annexin A3 and EZH2 proteins significantly increases in the ILC and IDC tissues and has a positive correlation.Annexin A3 and EZH2 can be tumor markers for early diagnosis，treatment and prognosis of breast cancer.

breast cancer；invasive lobular carcinoma；infiltrating ductal carcinoma；Annexin A3；EZH2

R737.9

A

1008-2344（2017）04-0310-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.04.003

王新（1963—），男（漢），主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師.研究方向：腫瘤學(xué).E-mail：278389575@qq.com

2016-12-23

（文敏編輯）