韋志平, 韓秋玉, 孫志堅(jiān), 馬志俊, 韓亞萍

(1. 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬南京市高淳人民醫(yī)院, 江蘇 高淳, 211300; 2. 江蘇省人民醫(yī)院, 江蘇 南京, 210029; 3. 江蘇省丹陽(yáng)市人民醫(yī)院, 江蘇 丹陽(yáng), 212300)

腎綜合征出血熱患者血清白細(xì)胞介素-8、L-選擇素水平的變化及意義

韋志平1, 韓秋玉1, 孫志堅(jiān)2, 馬志俊3, 韓亞萍2

(1. 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬南京市高淳人民醫(yī)院, 江蘇 高淳, 211300; 2. 江蘇省人民醫(yī)院, 江蘇 南京, 210029; 3. 江蘇省丹陽(yáng)市人民醫(yī)院, 江蘇 丹陽(yáng), 212300)

腎綜合征出血熱; 白細(xì)胞介素-8; L-選擇素

腎綜合征出血熱(HFRS)是由漢坦病毒引起的自然疫源性疾病，以發(fā)熱、出血、腎臟損害為主要表現(xiàn)，其基本病理變化是廣泛的毛細(xì)血管損傷和炎癥反應(yīng)[1-2]。本研究探討血清白細(xì)胞介素-8(IL-8)和L-選擇素(L-sel)的變化，評(píng)價(jià)其在HFRS發(fā)病中的作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2007年1月—2008年3月收治的HFRS患者共19例，其中男13例，女6例，年齡27～60歲，平均47歲，入院時(shí)間平均為(4.0±1.4) d, 皆有典型的臨床表現(xiàn)，經(jīng)檢測(cè)血清HFRS特異性IgM陽(yáng)性而確診。按1997年衛(wèi)生部頒布的流行性出血熱診斷標(biāo)準(zhǔn)分型，其中輕型2例，中型8例，重型8例，危重型1例。為便于比較，將輕型與中型合并為輕癥組，重型與危重型合并為重癥組。因低血壓期持續(xù)短暫，故與少尿期合并統(tǒng)計(jì); 另取15名健康成人作為對(duì)照組。

1.2 研究方法

所有患者均以液體療法為主，未使用免疫調(diào)節(jié)劑。按病期采血，分離血清后置-80 ℃保存。IL-8采用雙抗體夾心 ABC-ELISA方法檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司，先將抗人IL-8單抗包被于酶標(biāo)板上，然后加樣品，使IL-8與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IL-8抗體，形成免疫復(fù)合物連接在板上，再加辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加酶底物OPD顯色，用分光光度計(jì)在492 nm處測(cè)OD值, IL-8濃度與OD值呈正比，通過繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IL-8濃度，正常值為(25.8±16.7) ng/L(n=15)。L-選擇素亦用ELISA方法檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自?shī)W地利Bender公司，步驟大體同上，正常值為(1 090.0±138.0) ng/L(n=20)。外周血嗜中性粒細(xì)胞(PMN)計(jì)數(shù)采用血細(xì)胞自動(dòng)分析儀檢測(cè)。采用Microsoft Excel 2000軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示各樣本數(shù)據(jù)，組間差異用雙尾t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

HFRS輕、重組各病期血清IL-8均高于正常水平，但以低血壓少尿期最為顯著，在發(fā)熱期與低血壓少尿期，重癥組顯著高于輕癥組(P<0.05或P<0.01)。輕、重組病程早期均見PMN升高，輕癥組恢復(fù)較快，于多尿期便趨近正常，重癥組則延至恢復(fù)期方見回降; 在低血壓少尿期, 2組有顯著差異(P<0.05), PMN與IL-8及L-選擇素的變化趨勢(shì)大體一致。HFRS發(fā)熱期與低血壓少尿期，血清L-選擇素均顯著升高，且重癥組顯著高于輕癥組(P<0.05), 重癥組于多尿期便趨近正常，而輕癥組于多尿期仍處于較高水平。見表1。

3 討 論

關(guān)于HFRS的發(fā)病機(jī)制目前有兩種學(xué)說，一是病毒直接作用學(xué)說，另一是免疫發(fā)病機(jī)制。由于前一種學(xué)說缺乏循證醫(yī)學(xué)的依據(jù)，故多數(shù)學(xué)者傾向于后一種學(xué)說[4-5]。作者以往的研究[5-6]證明, HFRS急性期存在促炎/抗炎失平衡，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、γ-干擾素(IFN-γ)等促炎細(xì)胞因子大量釋放，而IL-4、IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)等抗炎細(xì)胞因子則相對(duì)或絕對(duì)不足，呈現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn), HFRS急性期血清IL-8、L-選擇素水平顯著升高，并與外周血中性粒細(xì)胞的升高相平行。

表1 腎綜合征出血熱患者血清IL-8、L-sel、PMN的變化比較

與對(duì)照組相比, *P<0.05, **P<0.01; 與重癥組相比, △P<0.05。

IL-8主要來源于單核-巨噬細(xì)胞，但在病理情況下內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞等受內(nèi)毒素、TNF-α、IL-1刺激亦可產(chǎn)生IL-8[7]。漢坦病毒是泛嗜性病毒，單核細(xì)胞是其重要的靶細(xì)胞[8], 受病毒感染后不僅產(chǎn)生IL-8，還可通過其產(chǎn)生的TNF-α、IL-1等細(xì)胞因子刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-8, 這可能是HFRS患者血清IL-8升高的重要原因。IL-8最重要的功能之一是趨化和激活中性粒細(xì)胞，后者激活后便借助其表面的L-選擇素與內(nèi)皮細(xì)胞黏附，通過滾動(dòng)效應(yīng)和雙向信號(hào)傳導(dǎo)使PMN及內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生更多的黏附分子，以利于白細(xì)胞跨內(nèi)皮移行; 滲入到血管外的中性粒細(xì)胞則釋放溶酶體酶、超氧陰離子等毒性物質(zhì)，引起毛細(xì)血管的炎癥反應(yīng)[9]。

在急性炎癥中, IL-8是動(dòng)員中性粒細(xì)胞到炎癥部位的主要趨化分子。有學(xué)者[10]在內(nèi)毒素所致急性呼吸窘迫綜合征、腦缺血再灌注性損傷及其他多種急性炎癥中，應(yīng)用IL-8抗體可防止中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及其所致的組織損傷。Strieter[9]對(duì)急性肺損傷過程作了這樣的描述，首先由TNF、IL-1等細(xì)胞因子激活肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其表達(dá)E-選擇素、P-選擇素、細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1), 再與白細(xì)胞表面的L-選擇素相互作用，形成白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的初步黏附和滾動(dòng)效應(yīng); 隨后, L-選擇素脫落，局部產(chǎn)生的IL-8激活白細(xì)胞表達(dá)β2整合素; 后者與內(nèi)皮細(xì)胞表面的ICAM-1緊密結(jié)合，導(dǎo)致白細(xì)胞滲出，產(chǎn)生反應(yīng)性氧、溶蛋白酶及其他細(xì)胞因子。由此可見，白細(xì)胞滲出與激活需要IL-8與L-選擇素的參與，部份危重型HFRS患者所并發(fā)的急性呼吸窘迫綜合征也可能與之有關(guān)。

綜上所述，在漢坦病毒感染過程中，受激活的單核-巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞均能產(chǎn)生IL-8, 后者在L-選擇素等黏附分子的參與下可刺激白細(xì)胞跨內(nèi)皮移行，從而引起廣泛的小血管炎癥反應(yīng)，可見IL-8與L-選擇素均參與了HFRS的發(fā)病過程。

[1] Kraus A A, Raftery M J, Giese T, et al. Differential antiviral response of endothelial cells after infection with pathogenic and nonpathogenic hantaviruses[J]. J Virol, 2004, 78(12): 6143-6150.

[2] Khaiboullina S F, St Jeor S C. Hantavirus immunology[J]. Viral Immunol, 2002, 15(4): 609-625.

[3] Terajima M, Vapalahti O, Van Epps H L, et al. Immune responses to Puumala virus infection and the pathogenesis of nephropathia epidemica[J]. Microbes Infect, 2004, 6(2): 238-245.

[4] Terajima M, Hayasaka D, Maeda K, et al. Immunopathogenesis of hantavirus pulmonary syndrome and hemorrhagic fever with renal syndrome: Do CD8+T cells trigger capillary leakage in viral hemorrhagic fevers[J]. Immunol Lett, 2007, 113(2): 117-120.

[5] 王鎖榮, 孫志堅(jiān), 張東軍, 等. 促炎與抗炎細(xì)胞因子在腎綜合征出血熱發(fā)病中的作用[J]. 中華傳染病雜志, 2007, 25(1): 43-46.

[6] 張東軍, 孫志堅(jiān), 王鎖榮, 等. 腎綜合征出血熱患者血清可溶性細(xì)胞因子、黏附分子及肝腎功能的變化[J]. 中華傳染病雜志, 2007, 25(8): 496-499.

[7] Simbirtsev A, Variouchina E, Konusova V, et al. Local administration of interleukin-1beta for the treatment of lung abscesses induces neutrophil activation and changes in proinflammation cytokine production[J]. Eur Cytokine Netw, 2001, 12(3): 420-429.

[8] Markoti?A, Hensley L, Daddario K, et al. Pathogenic hantaviruses elicit different immunoreactions in THP-1 cells and primary monocytes and induce differentiation of human monocytes to dendritic-like cells[J]. Coll Antropol, 2007, 31(4): 1159-1167.

[9] Strieter R M, Kunkel S L. Acute lung injury: the role of cytokines in the elicitation of neutrophils[J]. J Investig Med, 1994, 42(4): 640-651.

R 692

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1672-2353(2017)23-233-02

10.7619/jcmp.201723097

2017-07-10