葛曉燕，房 磊

(1.河南商丘學(xué)院，河南商丘 457600；2.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林 132101)

柳葉沙棘籽油對竭力運(yùn)動(dòng)后小鼠抗衰老能力的影響

葛曉燕1，房 磊2

(1.河南商丘學(xué)院，河南商丘 457600；2.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林 132101)

為了研究柳葉沙棘籽油對小鼠竭力運(yùn)動(dòng)后抗衰老能力的影響，采用水代法提取柳葉沙棘籽油，并通過喂食柳葉沙棘籽油驗(yàn)證小鼠的抗衰老能力。將50只健康小鼠，隨機(jī)分為5組，即正常組、模型組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。除正常組外，其余小組均使用90 mL/L的D-gal溶液加速小鼠衰老。低劑量組、中劑量組和高劑量組的小鼠被灌胃對應(yīng)劑量的柳葉沙棘籽油，模型組注射同正常組等劑量的9 g/L的生理鹽水。結(jié)果表明，低、中、高劑量組的肝臟指數(shù)與正常組相比無顯著變化(P>0.05)，模型組與正常組相比小鼠的肝臟指數(shù)顯著下降(P<0.05)；低、中、高劑量組的MDA含量相比正常組，無顯著變化(P>0.05)；模型組的MDA含量與正常組相比，顯著下降(P<0.05)；低、中、高劑量組的SOD活性與正常組相比，無顯著變化(P>0.05)，模型組與正常組的SOD活性顯著下降(P<0.05)。此外，在試驗(yàn)過程中無任何不良反應(yīng)出現(xiàn)。因此，柳葉沙棘籽油在小鼠竭力運(yùn)動(dòng)下對組織的衰老有一定的延緩作用，并具有一定的安全性。

柳葉沙棘籽油；竭力運(yùn)動(dòng)；小鼠；抗衰老

柳葉沙棘是沙棘的一個(gè)品種，屬于胡頹子科，高約5 m，其枝部頂端具短刺；幼枝細(xì)長且伸長，密被褐色鱗片和散生淡白色星狀柔毛，老枝灰棕色。柳葉沙棘果實(shí)富含豐富的維生素，大量試驗(yàn)表明，柳葉沙棘中含有豐富的維生素C和維生素E，而且維生素C和E的含量明顯高于普通沙棘油。維生素C和維生素E是抗氧化元素的主要成分。同時(shí)在柳葉沙棘油中含有豐富的黃酮類化合物，黃酮類化合物是一種重要的活性成分，具有良好的抗氧化效果。相關(guān)研究表明，黃酮類化合物有抗心律失常、抗心肌缺血、抗腦缺血、抗自由基和肝保護(hù)等作用，可以有效提高細(xì)胞代謝能力。

近年來，許多學(xué)者已經(jīng)對竭力運(yùn)動(dòng)后小鼠抗衰老問題進(jìn)行了研究。彭麗娜等人通過對小鼠竭力運(yùn)動(dòng)后進(jìn)行瑪咖灌胃，探討小鼠竭力運(yùn)動(dòng)后的耐受力及衰老功能。通過檢測腎臟線粒體呼吸鏈酶Ⅰ-Ⅲ、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性均升高、而丙二醛含量降低可知竭力運(yùn)動(dòng)后的小鼠補(bǔ)充瑪咖可增強(qiáng)耐受力，延緩衰老[1]。何首烏作為我國傳統(tǒng)中藥，具有促進(jìn)造血功能、增強(qiáng)免疫力、降血脂保肝等功能，李亦涵等人通過其提取物二苯乙烯的研究發(fā)現(xiàn)，二苯乙烯具有延緩皮膚衰老、改善骨質(zhì)疏松癥、改善阿茲海默癥等功能[2]。而這些方法并沒有對竭力運(yùn)動(dòng)后小鼠短期流失大量營養(yǎng)及機(jī)體保護(hù)成分，導(dǎo)致小鼠短期衰老加速的問題進(jìn)行研究。因此，本文采用柳葉沙棘籽油對竭力運(yùn)動(dòng)后小鼠抗衰老能力進(jìn)行研究。

本研究主要以柳葉沙棘果為原料，提取出柳葉沙棘籽油，通過對竭力運(yùn)動(dòng)下的小鼠進(jìn)行為期7周柳葉沙棘籽油攝入，觀察小鼠肝臟指數(shù)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性、以及丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量的變化，探討柳葉沙棘籽油對小鼠竭力運(yùn)動(dòng)后的抗衰老能力的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用品 試驗(yàn)對象為100只健康小鼠，雌雄個(gè)數(shù)相同，體重20 g～22 g，由長春生物制品研究所有限公司提供；柳葉沙棘果，由內(nèi)蒙古沙漠之花生態(tài)產(chǎn)業(yè)科技有限公司提供，粉碎待用；9 g/L生理鹽水購于沈陽化學(xué)試劑廠；90 mL/L的D-gal溶液購于沈陽化學(xué)試劑廠。

1.1.2 主要儀器 超高壓設(shè)備購于包頭軍工設(shè)備有限公司；WF-60萬能粉碎機(jī)購于江陰市申威化輕機(jī)械有限公司；Alpha1506紫外線可見光光度計(jì)購于上海譜元儀器有限公司；電子天平購于上海譜元儀器有限公司；量筒購于沈陽化學(xué)試劑廠；量杯購于沈陽化學(xué)試劑廠；恒溫水浴鍋購于沈陽化學(xué)試劑廠；離心機(jī)購于沈陽化學(xué)試劑廠；NAI-ZLG6分類:恒溫水箱|恒溫鍋購于那艾精密儀器；SXT-02索氏提取器購于那艾精密儀器。

1.2 方法

1.2.1 提取參數(shù)設(shè)定 柳葉沙棘果在50℃環(huán)境下烘干60 h取得；WF-60萬能粉碎機(jī)將沙棘果粉碎至0.70 mm～1.60 mm。

1.2.2 柳葉沙棘籽油水代法提取 首先，將干燥的沙棘果粉碎，將碎渣經(jīng)孔徑35 mm篩，準(zhǔn)確篩選重量200 g，將沙棘粉碎，70℃保溫，然后進(jìn)行恒溫水浴震蕩提取柳葉沙棘籽油，在50℃下提取時(shí)間為2 h。在提取過程中，進(jìn)行4次加入沸水，首次加水量為總水量的70%，第2次加水量為總水量的30%，第3次加水量為總水量的10%，末次加水量為總水量的5%。在轉(zhuǎn)速為3 000 r/min的情況下，離心分離15 min，離心后吸取上層清油[3-6]。

1.2.3 小鼠管理與分組 各組小鼠在非絕對相同的條件下，分籠子飼養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)室，室溫(24±2)℃，環(huán)境良好，標(biāo)準(zhǔn)喂養(yǎng)，無不良因素影響[7]。小鼠隨機(jī)分為低劑量組、中劑量組、高劑量組、正常組、模型組，每組隨機(jī)分配10只小鼠，普通喂養(yǎng)。所有試驗(yàn)小組均從適應(yīng)性訓(xùn)練開始，每星期3次，上午爬桿2次，10 min，下午游泳2次，水溫24℃±1℃，每次18 min。進(jìn)行為期4周的適應(yīng)性訓(xùn)練，無異常的小鼠選取50只進(jìn)行試驗(yàn)。

小鼠運(yùn)動(dòng)采取竭力游泳運(yùn)行，通過該試驗(yàn)來觀察在竭力情況下柳葉沙棘籽油對小鼠的肝臟指數(shù)、SOD活性、MDA含量的影響。小鼠每天進(jìn)行1次竭力游泳，將小鼠放置在泳槽中，腿部負(fù)重體重的5%細(xì)的鋼絲，水溫保持24℃±1℃，再將小鼠放置于水中后計(jì)時(shí)，如果小鼠在水中不運(yùn)動(dòng)，驅(qū)趕迫使其運(yùn)動(dòng)。在小鼠沉入水中13 s不能浮出，停止計(jì)時(shí)，立即打撈出小鼠，干燥小鼠，進(jìn)行接下來的注射、灌胃試驗(yàn)。低、中、高劑量組、及模型組每天1次皮下注射9%D-gal溶液10 mL。模型組小鼠每日皮下注射0.9%的生理鹽水10 mL，正常組小鼠每日一次10 mL蒸餾水灌胃，低、中、高三個(gè)劑量組分貝給予柳葉沙棘籽油8、10、12 mL，分別用對應(yīng)劑量的柳葉沙棘籽油每日1次灌胃。連續(xù)7周，每周稱體重，并記錄小鼠體重變化情況。末次灌胃后，停止喂養(yǎng)12 h。并進(jìn)行如上的竭力游泳運(yùn)動(dòng)。運(yùn)動(dòng)后小老鼠摘掉眼球，放血處死，取出肝臟，清除表面血漬，天平稱重，計(jì)算小鼠肝臟指數(shù)，肝臟指數(shù)=肝臟濕重(mg)/小鼠體重(g)，測定SOD活性及MDA含量[9-10]。

1.2.4 安全性分析 在試驗(yàn)測試過程中，對50只小鼠進(jìn)行全程監(jiān)測并記錄所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本文采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。通過SPSS22.0進(jìn)行t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)間采用“單因素方差分析”的方法進(jìn)行均數(shù)比較，用LSD進(jìn)行兩兩比較，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 沙棘果對小鼠竭力運(yùn)動(dòng)下肝臟指數(shù)的影響

皮下注射9%的D-gal溶液會(huì)加速小鼠的衰老速度[11-12]，柳葉沙棘籽油的3個(gè)不同劑量組均可使小鼠的肝臟指數(shù)與正常組相比無顯著差異(P>0.05)，而模型組與正常組的肝臟指數(shù)相比顯著下降(P<0.05)(表1)。通過多組數(shù)據(jù)分析可知，在小鼠逐步衰老的情況下，柳葉沙棘籽油可以在一定程度上延緩衰老，維持肝臟功能。

2.2 柳葉沙棘籽油對小鼠腦組織中MDA含量的影響

根據(jù)測量計(jì)算結(jié)果可知，關(guān)于MDA含量，模型組及低劑量組與正常組小鼠腦組織的MDA含量相比升高明顯(P<0.05)；中、高劑量組的MDA含量與正常組相比，無顯著差異(P>0.05)；低、中、高劑量組與模型組比較，MDA的含量明顯下降(P<0.05)(表2)。多組數(shù)據(jù)顯示，對于逐步衰老的小鼠，柳葉沙棘籽油可以在一定程度上降低MDA含量率，劑量越高效果越顯著，并且在試驗(yàn)過程中，小鼠沒有出現(xiàn)異常。

2.3 柳葉沙棘籽油對小鼠竭力運(yùn)動(dòng)后腦組織中SOD活性影響

如表3的統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，關(guān)于SOD活性，模型組與正常組相比SOD活性顯著降低(P<0.05)；低、中、高劑量組與正常組相比，SOD活性無顯著變化(P>0.05)。在小鼠逐步衰老的過程中，SOD的活性會(huì)降低，但通過數(shù)據(jù)的對比分析可知，在衰老過程中，服用柳葉沙棘籽油的小鼠的SOD活性降低不顯著。因此，柳葉沙棘籽油可在一定程度上延緩SOD活性的降低，從而實(shí)現(xiàn)延緩衰老的目的，且在試驗(yàn)過程中，小鼠沒有出現(xiàn)異常。

2.4 安全性分析

在試驗(yàn)測試過程中，50只小鼠均未出現(xiàn)任何不良反應(yīng)。

表1 各組小鼠竭力游泳運(yùn)動(dòng)后肝臟指數(shù)測量結(jié)果

注:各組與正常組相比，*表示有顯著差異(P<0.05)。

Note:Compared with normal group,*means significant difference(P<0.05).

表2 各組小鼠竭力游泳運(yùn)動(dòng)后腦組織MDA含量的比較

注:各組與正常組相比，*表示有極顯著差異(P<0.05)。

Note:Compared with normal group,*means significant difference(P<0.05).

表3 各組小鼠竭力游泳運(yùn)動(dòng)后腦組織SOD活性的比較

注:各組與正常組相比，*表示有顯著差異(P<0.05)。

Note:Compared with normal group,*means significant difference(P<0.05).

3 討論

柳葉沙棘籽油是從天然植物柳葉沙棘的果實(shí)中提取出來的珍貴天然油脂。沙棘果實(shí)中除了含有不飽和脂肪酸之外，還含有黃酮、維生素、植物甾醇、微量元素和α-生育酚等100多種生物活性物質(zhì)。沙棘果實(shí)含油率約為1.5%，其中果肉油約占總量的43%、果皮渣油約占33%，且易于小鼠吸收。沙棘果中含有豐富的柳葉沙棘籽油，可用水代法進(jìn)行柳葉沙棘籽油的提取。肝臟是小鼠最大的免疫器官，有多種免疫功能。小鼠在竭力游泳情況下，會(huì)促使柳葉沙棘籽油的盡快吸收。本文旨在研究在小鼠竭力運(yùn)動(dòng)下柳葉沙棘籽油對小鼠抗衰老影響。通過分析肝臟指數(shù)、SOD活性及MDA含量得出結(jié)論。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在小鼠竭力運(yùn)動(dòng)的前提下，不同劑量的柳葉沙棘籽油對小鼠的肝臟的指數(shù)影響不同，但均會(huì)增加小鼠細(xì)胞的吞噬能力，降低肝臟器官的指數(shù)，因此可以看出柳葉沙棘籽油具有延緩肝臟衰老萎縮的功能。

在正常情況下，小鼠體內(nèi)自由基及中間產(chǎn)物保持一定的平衡。同時(shí)，本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，在小鼠竭力運(yùn)動(dòng)下，隨著小鼠的衰老，平衡被打破，機(jī)體抗氧化能力降低。本試驗(yàn)研究顯示，在模型組中MDA的含量與正常組相比顯著提高、SOD的活性較正常組相比顯著下降。而柳葉沙棘籽油影響了MDA的含量和SOD的活性，使其延緩了衰老的速度。因此，柳葉沙棘籽油具有良好抗衰老的作用，值得進(jìn)一步深入研究及推廣。

[1] 彭麗娜,賈 鵬.瑪咖對力竭運(yùn)動(dòng)后老年模型大鼠腎臟線粒體呼吸功能及抗衰老能力的影響[J].中國組織工程研究，2016，2(18):2711-2716.

[2] 李亦晗,王躍飛,朱 彥.何首烏二苯乙烯苷抗衰老研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2016，3(2):182-185.

[3] 周民生，朱 瑞，毛 明.果蔬產(chǎn)品超高壓加工的研究進(jìn)展[J].中國食品學(xué)報(bào)，2012，12 (8):127-134.

[4] 王 鑫，徐麗萍，張海華.超聲波輔助提取桔梗皂苷方法的研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2012，28 (3):352-356.

[5] 閏克玉,杜紫娟.正交試驗(yàn)法優(yōu)化柳葉沙棘籽油的提取工藝[J].食品研究與開發(fā)，2010，31(4):31-33.

[6] 張麗霞,康 健,吳 桐.復(fù)合溶劑提取柳葉沙棘籽油的工藝條件研究[J].中國釀造，2011，229(4):125-129.

[7] 才金玲，單 群，陸 軍．大豆黃酮對衰老小鼠腦組織氧化損傷的調(diào)節(jié)[J].天津科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2012， 27(1) :18-22.

[8] Han J J， Zheng Y M.Exaction total-saponins by microwave fromRadixplatycodonis[J].J Sichuan Univ Sci Engineer:Nat Sci Ed，2010，23 (4):457-459.

[9] Li M，Reynolds CM，Sloboda DM，et al.Effects of taurine supplementation on hepatic markers of inflammation and lipid metabolism in mothers and offspring in the setting of maternal obesity [J].PLoS One， 2013，8 (10):76961.

[10] 潘 靜,陳金鈴,朱丹丹,等.細(xì)胞衰老機(jī)制的研究新進(jìn)展[J].中國病原生物學(xué)雜志，2015(7):672-675.

[11] 單思聰,孫 爽.超臨界萃取多穗柯黃酮及其抗運(yùn)動(dòng)氧化功能研究[J].食品研究與開發(fā)，2016(20):67-70.

[12] 劉俊平.衰老及相關(guān)疾病細(xì)胞分子機(jī)制研究進(jìn)展[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2014(3):215-230.

EffectofHippophaesalicifoliaSeedOilonAnti-agingAbilityinMiceafterEndeavouringExercise

GE Xiao-yan1，F(xiàn)ANG Lei2

(1.ShangqiuCollege，Shangqiu,Henan，47600,China; 2.AgricultureScienceandTechnologyCollege,Jilin,Jilin,132101,China)

In order to explore the effect ofHippophaesalicifoliaseed oil on the anti-aging ability in mice after endeavouring exercise,we extracted theHippophaesalicifoliaseed oil using the water replacing method.And the anti-aging ability in mice was verified by feeding theHippophaesalicifoliaseed oil.The 50 mice were divided into five groups,such as normal group,model group,low dose group,middle dose group and high dose group.The D-gal was used to accelerate the aging of mice except the normal group.In the low dose group,the middle dose group and the high dose group,the mice were given the corresponding doseHippophaesalicifoliaseed oil by the gavage method.The model group mice were injected with normal saline.The experimental results showed that compared with normal group,the liver indexes of low dose group,middle dose group and high dose group showed no significant changes (P>0.05).Compared with normal group,the liver indexes of model group had significant drops (P<0.05).The liver indexes in low dose group,middle dose group and high dose group had no significant changes (P>0.05).And the MDA concentrations of these groups were higher than that in normal group.For the model group,the MDA content achieved remarkable decline (P>0.05).The SOD activities in low,middle and high dose groups had no significant changes (P>0.05),compared with normal group.The SOD activity in model group droped significantly(P<0.05).Furthermore,there were no side effects during the experiment.Therefore,theHippophaesalicifoliaseed oil has a certain effect on anti-aging ability and security in mice under endeavouring exercise.

Hippophaesalicifoliaseed oil; endeavouring exercise; mouse; anti-aging

2017-04-21

葛曉燕(1983-)，女，河南濮陽人，講師，主要從事體育教育工作。

S852.2

A

1007-5038(2017)12-0064-04