潘贇昊，顧巖，石陽，汪成*

（1. 上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院乳腺外科，上海 200002；2. 上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院普外科，上海 200011；3. 上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院腫瘤內科，上海 200002）

臨床論著

Beclin1表達水平與乳腺癌臨床分期相關性的研究

潘贇昊1，顧巖2，石陽3，汪成1*

（1. 上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院乳腺外科，上海 200002；2. 上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院普外科，上海 200011；3. 上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院腫瘤內科，上海 200002）

目的Beclin1是與自噬相關的重要基因，本研究旨在明確其表達水平與乳腺癌臨床分期的相關性。方法隨機抽取2003年-2012年在上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院手術的200例乳腺癌，20例良性乳腺疾病，對220例石蠟標本重新取材，應用免疫組織化學染色法檢測Beclin1的表達水平。結果Beclin1在乳腺癌原位癌組織中表達水平顯著高于浸潤性癌組織，乳腺癌細胞分化越差Beclin1表達水平越低。結論Beclin1檢測在乳腺癌診斷、診療中具有重要價值，可能作為預測乳腺癌病理分期的候選分子標志物。

Beclin1；自噬；乳腺癌；病理分期

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，在女性惡性腫瘤發(fā)病率僅次于呼吸系統(tǒng)腫瘤及消化系統(tǒng)腫瘤[1]。我國乳腺癌的發(fā)病率正逐年上升，給我國女性健康及國民經濟帶來了嚴重的損害[2]。近年來，隨著乳腺癌診斷及治療手段的提高，患者遠期生存率可達80%以上[3]。但仍有部分患者對先有檢查手段不敏感，導致診斷及治療的延誤。因此，需要更多的分子生物學指標，來更精準判斷乳腺癌的惡性程度、對不同治療的反應以及遠期預后。

須降解的細胞質、細胞器、蛋白質等成分，在亞細胞水平形成自噬溶酶體，進而自我吞噬以實現細胞代謝和更新的過程稱為自噬。自噬對腫瘤具有雙向調節(jié)作用：適度的自噬可促進細胞生存，而過度的自噬將誘導腫瘤細胞死亡[4-6]。Beclin1是第一個在哺乳動物中發(fā)現與自噬相關的抑癌基因，Beclin1在調節(jié)自噬活性、激活細胞程序性死亡過程中扮演著重要角色。有研究[7-9]表明Beclin1可以抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，但也有相反的報道稱Beclin1可以促進腫瘤細胞的生存。目前國內外對該基因與乳腺癌相關臨床以及病理學的研究非常匱乏，本研究通過分析Beclin1在乳腺癌組織中的表達與乳腺癌分期之間的關系，探討了Beclin1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為Beclin1檢測在乳腺癌診療過程中的應用奠定了理論基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 隨機抽取了2003年-2012年在上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院手術的病例220例，其中乳腺癌200例，良性乳腺疾病20例。200例乳腺癌病例中，原位癌83例，浸潤性癌117例。

1.2 免疫組化 應用免疫組織化學染色法檢測Beclin1的表達，羊抗人Beclin1抗體（Abcam, ab107639），鼠抗人PR抗體（Abcam, ab107639），兔抗人ER抗體（Abcam, ab107639）。染色陽性位于細胞漿及細胞核內，為棕黃色顆粒，染色強度明顯高于背景者為陽性。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析處理。F檢驗計量樣本的方差齊性，具有方差齊性的計量資料采用t檢驗，不具有方差齊性的計量資料采用z檢驗，構成比及率應用卡方檢驗、Fish確切幾率法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 患者基本資料 本研究所收集的乳腺癌病例患者一般情況詳見表1，統(tǒng)計分析了乳腺癌常見與生活相關的危險因素。

表1 患者基本資料

2.2 Beclin1在正常乳腺組織及乳腺癌組織中的免疫組化結果 見圖1。

2.3 Beclin1在T0-Tis、T1、T2和T3分期乳腺癌組織中陽性率的比較 T0-Tis 期與其它分期相比，Beclin1陽性率在原位癌組的陽性率顯著高于浸潤性癌組（P＜0.05），T1、T2、T3各組間Beclin1陽性率無顯著差異（P＞0.05），Beclin1陽性率在非原位癌患者中與腫瘤體積大小無關。

2.4 Beclin1在不同級淋巴結轉移乳腺癌組織中陽性率的比較 Beclin1陽性率在各組淋巴結轉移乳腺癌患者組織標本中的表達陽性率無顯著性差異（P＞0.05）。

研究結果顯示，Beclin1表達水平在良惡性乳腺組織中有明顯差異（P＜0.05），良性乳腺組織中的表達率為85%（n=17）；在乳腺癌中的表達率為33.5%（n=67），其中原位癌中的表達率為50.6%（n=42），浸潤性癌中的表達率為21.37%（n=25），且浸潤癌中的表達率明顯低于原位癌，結果具有統(tǒng)計學意義。乳腺癌中Beclin1陽性率與組織學分級相關（P＜0.05），級別越高（分化越差），Beclin1陽性率越低。腫塊大小、淋巴結轉移、ER、PR、Ki67及CerbB-2的表達與Beclin1陽性率無關（P均＞0.05）。

圖1 Beclin1免疫組化染色結果：A、B：正常乳腺組織Beclin1染色陽性及陰性結果；C、D：乳腺癌組織Beclin1染色陽性及陰性結果。

表2 Beclin1在T0-Tis、T1、T2和T3分期乳腺癌組織中陽性率的比較

表3 Beclin1在不同級淋巴結轉移乳腺癌組織中陽性率的比較

3 討論

自噬是細胞維持自身內環(huán)境穩(wěn)定的重要手段，自噬功能異?？蓪е录毎惓Ｔ錾?，甚至出現癌變[10]。深入了解細胞自噬功能以及腫瘤細胞自噬功能正常與否，是判斷腫瘤患者預后以及研制新型抗腫瘤藥物的基礎。Beclin1是第一個在哺乳動物中發(fā)現與自噬相關的抑癌基因，Beclin1在調節(jié)自噬活性、激活細胞程序性死亡過程中扮演著重要角色[11]。

本研究從臨床病理學、腫瘤分期、分級等多方面，探討了Beclin1基因及其產物在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。研究結果顯示Beclin1在乳腺癌患者中的表達水平明顯下降，且乳腺癌細胞分化越差，Beclin1表達水平越低。據此推測，Beclin1在乳腺細胞發(fā)生病變開始，出現功能缺陷，可能是腫瘤細胞其他抑癌基因缺陷相互作用導致Beclin1表達異常，抑制了細胞的自噬功能，進而導致細胞惡性增殖；也可能是Beclin1表達異常導致抑癌基因功能缺陷，從而使得細胞內環(huán)境紊亂并出現惡性增殖。具體生物學通路機制，需要更多動物實驗及細胞學實驗加以佐證[12-15]。

由于標本量有限，本研究尚未明確排除年齡、腫瘤分期、分級以及腫塊大小等相關變量后，Beclin1陰性能否成為乳腺癌患者預后不良的獨立危險因素。為明確Beclin1表達水平減低與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的因果關系，我們須進一步檢測乳腺癌組織中Beclin1陰性的乳腺癌患者正常乳腺組織中Beclin1的表達水平，我們將在后續(xù)的研究中，著重探討兩者間的因果關系。為詳細闡明Beclin1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，Beclin1表達水平與Ki-67不同表達區(qū)間、P53突變率、HER-2表達等之間的關系，以及Beclin1表達與否對乳腺癌患者預后的影響，我們將進一步收集我院乳腺癌標本，并注意收集乳腺癌患者正常乳腺組織標本，為后續(xù)研究奠定基礎。

本研究發(fā)現Beclin1表達水平在良惡性乳腺組織中的差異，分析了乳腺癌中Beclin1陽性率與腫塊大小、淋巴結轉移之間的關系，為Beclin1檢測在乳腺癌診療過程中的應用奠定了理論基礎。研究結果提示，Beclin1檢測在乳腺癌診斷、診療中具有重要價值，可能作為預測乳腺癌病理分期的候選分子標志物。

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Correlation research between Beclin1 expression level and clinical stage of breast cancer

Yunhao PAN1, Yan GU2, Yang SHI3, Cheng WANG1*
1. Department of Breast Surgery, Huangpu District Central Hospital, Shanghai 200002, China;2. Department of General Surgery, Shanghai Ninth People’s Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200011, China; 3. Department of Oncology, Huangpu District Central Hospital, Shanghai 200002, China

ObjectiveBeclin1 is a gene associated with autophagy, the purpose of this research is to clarify the correlation between the expression level and clinical stage of breast cancer.MethodsTotal of 200 cases of breast cancer and 20 cases of benign breast diseases were randomly selected from Central Hospital of Shanghai Huangpu District during 2003-2012 years. 220 paraffin specimens were collected and restained to detect the expression of Beclin1 using immunohistochemical staining technique.ResultsThe expression level of Beclin1 in breast cancer Primary carcinoma tissue was significantly higher than that in invasive carcinoma tissues, and the lower the differentiation of breast cancer cells, the lower the expression level of Beclin1.ConclusionThe results suggest that Beclin1 detection has critical value in the diagnosis and treatment of breast cancer, and may be used as candidate molecular marker to predict the pathological stage of breast cancer.

Beclin1; Autophagy; Breast neoplasm; Pathological staging

基金：上海市黃浦區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)優(yōu)秀青年人才培養(yǎng)項目（No.(2013)HWR/Q-16）

汪成，E-mail：wangcheng1212@sina.cn