王 靜

（江蘇省邳州市中醫(yī)院檢驗科，江蘇 徐州 221300）

·臨床交流·

感染性標本涂片鏡檢與分離培養(yǎng)相關(guān)性研究

王 靜

（江蘇省邳州市中醫(yī)院檢驗科，江蘇 徐州 221300）

目的探討感染性標本的涂片鏡檢和分離培養(yǎng)的相關(guān)性。方法 應用接種環(huán)無菌操作選取各個菌種不同稀釋度的菌液一環(huán)進行涂片，顯微鏡油鏡下對每張涂片進行觀察，對檢出情況進行記錄，計算陽性的檢出率。通過無菌吸管選取0.1毫升各菌種不同稀釋度菌液，進行分別劃線，接種在沙保羅瓊脂平板或者是營養(yǎng)瓊脂平板，24小時后計算菌落數(shù)。結(jié)果 經(jīng)過涂片染色的鏡檢可以獲取陽性的結(jié)果，金黃色葡萄球菌檢出率相對較高。經(jīng)過分離培養(yǎng)可以獲取陽性的結(jié)果。結(jié)論 在較低濃度念珠菌或細菌感染標本分離培養(yǎng)中，需要按照患者臨床的癥狀或其他檢查的情況考慮實施多次病原體的分離培養(yǎng)，防止發(fā)生漏診的情況，為臨床診治提供參考。

感染性標本；涂片鏡檢；分離培養(yǎng)；相關(guān)性

標本直接涂片的染色鏡檢與接種培養(yǎng)基的分離培養(yǎng)在臨床上有著重要作用，屬于真菌感染或是細菌感染疾病病原學的診斷方式。因為直接涂片的鏡檢主要優(yōu)勢是早期檢驗快速與簡便等，所以在結(jié)核的分枝桿菌中有著廣泛應用，然而，直接涂片的鏡檢對于非抗酸性真菌感染或是細菌感染標本診斷價值與接種培養(yǎng)基的培育是否有相關(guān)性，報道比較少[1]。對此，本文深入研究了感染性標本的涂片鏡檢和分離培養(yǎng)的相關(guān)性，現(xiàn)作以下陳述。

1 資料與方法

1.1 菌種

大腸埃希菌（E.coii，ATCC25922）與金黃色葡萄球菌（S.aureus，ATCC261125）均通過中國藥品生物制品檢定提供，白色念珠菌（C. aibicans）是本室保存的菌種。應用比濁方法把各菌種配制為3×109/mL濃度菌液，然后添加無菌的生理鹽水使其變成10-9/mL、10-1/mL、10-8/mL、10-2/mL、10-7/mL、10-3/mL、10-6/mL、5×10-3/mL、5×10-5/mL、110-4/mL、0-5/mL與5×10-4/mL稀釋度。

1.2 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂，經(jīng)衛(wèi)生部上海生物制品研究所提供，根據(jù)說明書來配置與傾注平板。而按沙保羅瓊脂培養(yǎng)基需要根據(jù)相關(guān)要求進行配制以及傾注平板，整個培養(yǎng)過程需要嚴格按照說明書進行。

1.3 關(guān)于涂片染色的鏡檢

應用接種環(huán)無菌操作選取各個菌種不同稀釋度的菌液一環(huán)進行涂片，不同稀釋程度涂片為10張，在革蘭染色以后，于顯微鏡油鏡下對每張涂片進行觀察，一個涂片10個視野，對檢出情況進行記錄，同時對陽性的檢出率進行計算。

1.4 分離的培養(yǎng)

通過無菌吸管選取0.1毫升各菌種不同稀釋度菌液，進行分別劃線，接種在沙保羅瓊脂平板或者是營養(yǎng)瓊脂平板。每一個稀釋液程度接種三個平板，在溫箱中37攝氏度條件下培養(yǎng)，24小時以后對菌落數(shù)進行計算。

2 結(jié) 果

2.1 分析涂片染色檢出率

白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過23200/mL時，經(jīng)過涂片染色的鏡檢可以獲取陽性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在23200/mL以內(nèi)，就無法檢出細菌；當菌液稀釋度為5×l0-3時，還可以檢出部分大腸埃希菌與金黃色葡萄球菌，但是缺乏檢出白色念珠菌，其中金黃色葡萄球菌檢出率相對較高，見表1。

2.2 分離培養(yǎng)檢出率

白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過l90/mL 時，經(jīng)過分離培養(yǎng)都可以獲取陽性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在l90/mL以內(nèi)，經(jīng)過分離培養(yǎng)無法得出大腸埃希菌生長情況；當菌液稀釋度為l0-7、l0-8、l0-9時，可以檢出部分金黃色葡萄球菌與白色念珠菌，但是無法檢出大腸埃希菌，見表2。

表2 分離培養(yǎng)檢出率（n，%）

3 討 論

在淋病與結(jié)核病等感染性疾病診斷中，直接涂片的染色鏡檢為早期快速病原學的診斷常用方式[2]。相關(guān)文獻中報道，在肺結(jié)核的患者痰液標本之中，抗酸性細菌含量在超過5×l04/mL之時，才能夠經(jīng)過涂片染色的鏡檢檢出，但是在真菌感染的標本或是非抗酸性細菌診斷中則比較少用[3]。一般情況下，在尿液或是痰液標本之中，細菌含量在l05/mL以內(nèi)時，即便應用分離培養(yǎng)方式，也容易出現(xiàn)陰性情況，或是因為污染導致細菌感染檢查受到影響[4]。本次研究顯示，白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過23200/mL時，經(jīng)過涂片染色的鏡檢可以獲取陽性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在23200/mL以內(nèi)，就無法檢出細菌；當菌液稀釋度為5×l0-3時，還可以檢出部分大腸埃希菌與金黃色葡萄球菌，但是缺乏檢出白色念珠菌，其中金黃色葡萄球菌檢出率相對較高；白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)超過l90/mL時，經(jīng)過分離培養(yǎng)都可以獲取陽性的結(jié)果，如果白色念珠菌、金黃色葡萄球菌與大腸埃希菌菌落數(shù)在l90/mL以內(nèi)，經(jīng)過分離培養(yǎng)無法得出大腸埃希菌生長情況；當菌液稀釋度為l0-7、l0-8、l0-9時，可以檢出部分金黃色葡萄球菌與白色念珠菌，但是無法檢出大腸埃希菌。

本文研究結(jié)果顯示涂片染色的鏡檢在細菌或者是念珠菌菌落數(shù)超過23200/mL的標本中比較適用，分離培養(yǎng)在念珠菌或是細菌菌落數(shù)超過l90/mL的標本檢驗中比較適用。分離培養(yǎng)和涂片染色鏡檢對標本之中念珠菌、細菌檢出情況有著不一致性，其可能和所接觸標本量、觀察方法有著相關(guān)性。即便分離培養(yǎng)的方法可以將標本之中病原體檢出，但是如果標本之中念珠菌或是細菌數(shù)量比較少時，會發(fā)生漏診情況。所以在經(jīng)過治療以后或是慢性感染癥患者年菌株量比較少標本之中，需要選擇至少0.1毫升標本接種的培養(yǎng)基，方便分離培養(yǎng)的方法對病原體進行檢查，整個檢查過程需要與患者治療情況、病史相結(jié)合，確保檢查結(jié)果的準確性。

本次研究表明，當不同菌種處于同一培養(yǎng)基上時，所檢出或是生長情況存在差異，這種差異容易引起分離培養(yǎng)的漏診。就算在同一種菌種與同一種濃度下，在經(jīng)過多次分離的培養(yǎng)以后，所檢出細菌數(shù)量同樣存在著巨大差異。因此，在較低濃度念珠菌或者是細菌感染標本分離培養(yǎng)中，需要按照患者臨床的癥狀或是其他檢查的情況考慮實施多次病原體的分離培養(yǎng)，防止發(fā)生漏診的情況，為臨床診治提供參考。

[1]張 肖,朱同華,沈國榮.痰標本分析前涂片鏡檢的臨床價值分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2016,38(11):1559-1561.

[2]劉 瑜,趙亞玲,滑 鑫.標本涂片鏡檢與培養(yǎng)結(jié)果的關(guān)系分析[J].中國繼續(xù)醫(yī)學教育,2015,7(16):18-19.

[3]汪林嬌,易 薇,趙曙剛.痰標本涂片鏡檢與細菌培養(yǎng)結(jié)果符合性的分[J].中國醫(yī)藥科學,2016,6(19):139-141.

[4]鄧 沖.分離培養(yǎng)法與涂片鏡檢法在診斷女性淋球菌感染的臨床應用比較[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2013,35(14):1853-1854.

R446.5

B

ISSN.2095-8242.2017.065.12686.02

本文編輯：王雨辰