王愛青

(河南省洛陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽 471023)

中藥四性的生物熱動(dòng)力學(xué)研究
——黃連的不同炮制品藥性的微量熱學(xué)比較

王愛青

(河南省洛陽市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽 471023)

黃連；生物熱動(dòng)力學(xué)；炮制品；四性；藥性

黃連為臨床常用中藥，主要功效為瀉火解毒、清熱燥濕，泡制方法不同，在藥性上也存在差別[1]。本研究通過分析黃連不同炮制品對(duì)大腸桿菌代謝產(chǎn)熱的影響，對(duì)黃連炮制前后藥性變化及黃連藥性的客觀真實(shí)性展開探討，現(xiàn)回顧結(jié)果如下。

一般資料

大腸桿菌生長(zhǎng)熱譜圖采用瑞典Thermometric公司生產(chǎn)的儀器測(cè)定，在實(shí)驗(yàn)過程中控制系統(tǒng)溫度為37℃。大腸桿菌菌株由中國典型培養(yǎng)物保藏中心提供，采用LB培養(yǎng)基。鹽酸小檗堿購自中國藥品生物制品檢定所，黃連由解放軍302醫(yī)院中藥房提供。試劑均為分析純，藥品均用無菌水配制。

研究方法

1.不同炮制品的制備。①酒制黃連：取500 g凈黃連，加入62.5 g黃酒，行燜透處理，于鍋內(nèi)妥善放置，文火炒干，放涼備用。②吳茱萸黃連：取50 g吳茱萸，加入適量水煎煮，取500 g凈黃連與煎液充分拌勻，炒干，放涼備用。③膽汁黃連：取500 g凈黃連，加入30 mL鮮豬膽汁充分拌勻，炒干，放涼備用。④醋制黃連：取500 g凈黃連，加入93.75 g醋充分拌勻，待完全滲入后，曬干，放鍋內(nèi)，輕微翻炒，晾干備用。

2.制備供試品溶液。①實(shí)驗(yàn)色譜條件：流動(dòng)相為乙腈-水，色譜柱為μ-Bondapak C18柱，柱溫為室溫，體積流量為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm，理論塔板數(shù)需>5 000。②制備不同炮制品的總生物堿：采用90%乙醇10倍量回流3次，每次所用時(shí)間為2 h，然后揮發(fā)乙醇，靜置，離心，得濾液和沉淀。用濃HCl調(diào)濾液pH值為1～2，靜置過夜。過濾，水洗至中性，獲取沉淀物。合并沉淀物，真空干燥，即獲得不同黃連炮制品的總生物堿。采用高效液相色譜法測(cè)定不同炮制品總生物堿，以鹽酸小檗堿計(jì)。結(jié)果顯示，生物堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)均>50%。③制備總生物堿溶液：用無菌水配置混懸液，鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液濃度為25 mg/mL，酒制黃連、生黃連、吳茱萸黃連、姜制黃連、膽汁黃連、醋制黃連總生物堿溶液濃度與生藥250 mg/mL相當(dāng)。

3.繪制生長(zhǎng)熱譜曲線。應(yīng)用安瓿法，取5 mL培養(yǎng)基精確加入每個(gè)安瓿瓶，接種大腸桿菌，以1×106/mL為菌接種量，加入定量藥液，加蓋瓶塞，密封。上述操作均在無菌條件下進(jìn)行，放入微量熱儀，跟蹤記錄細(xì)菌在37°C時(shí)的生長(zhǎng)熱譜曲線(p-t曲線)。

結(jié)果

1.確定大腸桿菌生長(zhǎng)速率常數(shù)。在不同藥物作用下，大腸桿菌的生長(zhǎng)速率常數(shù)κ，最大發(fā)熱功率Pmax，指數(shù)生長(zhǎng)期的熱焓△H和傳代時(shí)間tG。見表1。

2.確定細(xì)菌生長(zhǎng)抑制率濃度和半抑制率濃度。定義細(xì)菌生長(zhǎng)抑制率I=(κ1-κ2)/κ1×100%。其中κ1為對(duì)照組常數(shù)，試藥組常數(shù)為κ2。見表1。

表1 不同黃連炮制品作用下大腸桿菌熱力學(xué)參數(shù)

討論

本研究以黃連及其不同炮制品為實(shí)驗(yàn)材料，應(yīng)用微量熱儀測(cè)定大腸桿菌在37°C正常生長(zhǎng)條件下的生長(zhǎng)熱譜圖及給藥后生長(zhǎng)熱譜圖，并對(duì)其生長(zhǎng)熱譜曲線展開分析，發(fā)現(xiàn)酒制黃連、鹽酸小檗堿、吳茱萸黃連、生黃連、膽汁黃連、醋制黃連、姜制黃連均對(duì)大腸桿菌有不等程度的抑制作用[2]。酒制黃連、吳茱萸黃連、姜制黃連的抑制作用相對(duì)較強(qiáng)，大腸桿菌生長(zhǎng)速率常數(shù)有較大的降低幅度，產(chǎn)熱量較大，傳代時(shí)間延長(zhǎng)多；膽汁黃連、鹽酸小檗堿、醋制黃連、生黃連對(duì)大腸桿菌的抑制作用稍弱，生長(zhǎng)速率常數(shù)下降幅度較小，產(chǎn)熱量較少，傳代時(shí)間延長(zhǎng)少[3]。

黃連性寒涼，炮制方法不同，藥性也會(huì)發(fā)生改變，即從制——寒者益寒、反制——以熱制寒。酒制黃連、吳茱萸黃連、姜制黃連藥性偏溫，而膽汁黃連、醋制黃連藥性偏寒，采用微量熱法測(cè)定的結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)一致。黃連是臨床上典型的清熱消炎類抗菌藥，根據(jù)不同炮制品對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)抑制率的差異，可作為一種有效評(píng)價(jià)不同黃連炮制品的方法，即酒制黃連、姜制黃連、吳茱萸黃連較生黃連、醋制黃連抗菌活性更強(qiáng)[4]。

綜上所述，微量熱法可作為一種有效的區(qū)分中藥藥性的手段，在指導(dǎo)臨床應(yīng)用方面價(jià)值顯著。

[1]劉騰飛，陳四玉，劉翠艷.黃連不同的炮制方法和制劑工藝體外抑菌作用的比較研究[J].中國中醫(yī)藥科技，2015,22(1):46-48.

[2]張淑賢.不同用量的吳茱萸炮制過的黃連的成分變化[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2013,11(16):163.

[3]王凌，王少明，莊捷，等.不同炮制方法對(duì)黃連主成分含量及腸吸收的影響[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2011,16(2):165-169.

[4]譚光羨，石錦明，劉紅志.黃連不同炮制方法對(duì)臨床應(yīng)用療效的分析[J].中醫(yī)臨床研究，2011，3(13):50-51.

2017-02-14)