范艷麗，韓麗娜，付麗霞，孟雪梅，田建文

(1.寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，銀川 750021；2.寧夏科技廳，銀川 750001)

枸杞葉黃酮類化合物體外清除自由基作用研究

范艷麗1，韓麗娜1，付麗霞1，孟雪梅1，田建文2

(1.寧夏大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，銀川 750021；2.寧夏科技廳，銀川 750001)

采用有機(jī)溶劑浸提法(70%乙醇)提取枸杞葉中的黃酮類化合物，然后以枸杞葉黃酮提取物為研究對(duì)象，以Vc和BHT為陽(yáng)性對(duì)照，通過(guò)自由基清除實(shí)驗(yàn)體外評(píng)價(jià)產(chǎn)物的抗氧化活性。結(jié)果表明：枸杞葉黃酮提取物中黃酮類化合物的含量為277.7 mg/g。枸杞葉黃酮提取物對(duì)超氧陰離子自由基、羥基自由基、DPPH+、亞硝基自由基、ABTS+具有顯著的清除能力，其最大清除率分別為62%，84%，80%，34%，78%，對(duì)Fe3+的還原能力達(dá)到Vc和BHT還原能力的50%。結(jié)論：所提取的枸杞葉黃酮類化合物具有較高的體外抗氧化活性，可為枸杞葉黃酮類化合物資源的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

枸杞葉；黃酮類化合物；抗氧化

枸杞屬落葉灌木植物，是我國(guó)傳統(tǒng)的藥食同源植物[1]。枸杞葉與枸杞子同根同源，其營(yíng)養(yǎng)成分種類與枸杞果基本相同，含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分以及黃酮類化合物、甜菜堿、阿托品等活性成分[2]。《中華本草》記載：枸杞葉“味苦；甘；性涼，補(bǔ)虛益精；清熱明目。主虛勞發(fā)熱；煩渴；目赤昏痛”[3]，指明枸杞葉具有清熱解暑、養(yǎng)肝明目、軟化血管的保健功效。一直以來(lái)，我國(guó)民間就有飲用枸杞葉茶和烹制枸杞葉瘦肉湯的飲食方法。黃酮類化合物屬于植物次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要以甙元和糖甙兩種形式存在，生理活性及藥理作用多樣，如清除氧自由基[4]、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[5]、抗過(guò)敏[6]、抗炎保肝[7]等。研究證實(shí)：枸杞葉中總黃酮含量遠(yuǎn)高于枸杞果[8]。將枸杞葉黃酮提取物添加到高營(yíng)養(yǎng)的復(fù)合羊肉糜中，不僅賦予羊肉糜特有香氣，保持羊肉糜的硬度、膠黏性和咀嚼性，還能夠顯著抑制羊肉糜中不飽和脂肪酸氧化，是一種天然的功能性調(diào)味品[9]。本實(shí)驗(yàn)采用有機(jī)溶劑浸提法提取枸杞葉中的黃酮類化合物，并進(jìn)一步研究其體外抗氧化活性，意在探明枸杞葉黃酮類化合物的抗氧化活性及應(yīng)用前景，為枸杞葉資源能夠更充分合理地利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

枸杞芽茶為食品級(jí)，購(gòu)于寧夏科苑示范基地；98%BHT為食品級(jí)，購(gòu)于徐州廣皓生物科技有限公司；DPPH，購(gòu)于西安沃爾森生物科技有限公司；抗壞血酸(Vc)、N-1-萘乙二胺鹽酸鹽、鄰菲羅啉、無(wú)水對(duì)氨基苯磺酸、三氯化鐵、30%過(guò)氧化氫、焦性沒(méi)食子酸、氯化亞鐵、無(wú)水乙醇、蘆丁、ABTS、Tris等試劑均為分析純，購(gòu)于天津市大茂化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

WK-600A型高速中藥粉碎機(jī) 上海新諾儀器設(shè)備有限公司；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；SHB-III型循環(huán)水式多用真空泵 鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；JDG-0.2型真空凍干試驗(yàn)機(jī) 蘭州科近凍干技術(shù)有限公司；TA-XT2i質(zhì)構(gòu)分析儀、DL-5-A型臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；7230G可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海精密科技有限公司；101-3型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海東星建材實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；AL204型電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；HH.SY21-Ni6-C電熱恒溫水浴鍋 北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；DF-2集熱式磁力攪拌機(jī) 常州愛(ài)華儀器制造有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 枸杞葉黃酮化合物的提取及含量測(cè)定

1.3.1.1 枸杞葉黃酮化合物的提取[10]

將枸杞芽茶粉碎，按照料液比1∶70采用70%乙醇于70 ℃下攪拌提取2 h，重復(fù)提取1次，合并提取液，在3000 r/min下離心取上清液，55 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮至較小體積后加入石油醚進(jìn)行脫脂處理，去除葉綠素。用分液漏斗將大部分的石油醚棄除后再進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，蒸掉石油醚后經(jīng)真空冷凍干燥，即得到枸杞葉黃酮類化合物粗品。

1.3.1.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法，以70%的乙醇溶解蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品配成濃度為0.20 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別移取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，2.0，3.0 mL于10 mL容量瓶中，加入4%的NaNO2溶液0.3 mL，搖勻靜置6 min，加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻靜置6 min，加入5%的NaOH溶液4.0 mL，用70%乙醇定容，搖勻靜置15 min。以不加標(biāo)準(zhǔn)品為空白，在510 nm下測(cè)定吸光度值，建立回歸方程。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of rutin

1.3.1.3 枸杞葉黃酮提取物的含量測(cè)定

配制0.20 mg/mL樣品溶液，進(jìn)行顯色測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算出黃酮的濃度，按公式(1)計(jì)算產(chǎn)物的黃酮含量。

(1)

式中：X為黃酮含量(mg/g)；Y為根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出的提取物質(zhì)量濃度(mg/mL)；V1為定容后的黃酮的體積(mL)；C為配制的黃酮溶液的濃度(mg/mL)；V2為測(cè)定吸光度時(shí)所用的黃酮溶液的體積(mL)。

1.3.2 枸杞葉黃酮提取物抗氧化作用的測(cè)定

1.3.2.1 超氧陰離子的清除實(shí)驗(yàn)

采用Yang等[11]的方法并略做修改。取5 mL，0.05 mol/L Tris-HCl緩沖溶液(pH 8.2)于具塞試管中，25 ℃水浴中預(yù)熱20 min，分別加入1 mL不同濃度(0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL)的樣品溶液，再加入25 ℃預(yù)熱的3 mmol/L的鄰苯三酚溶液0.5 mL，混勻后于25 ℃水浴中反應(yīng)5 min，加入1 mL，8 mmol/L的鹽酸終止反應(yīng)，在299 nm處測(cè)定溶液的吸光度，其值記為Ai；空白對(duì)照組以相同體積的蒸餾水代替樣品溶液在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)下測(cè)定溶液的吸光度，其值記為A0；以0.5 mL的蒸餾水代替鄰苯三酚溶液在299 nm處測(cè)定吸光度，其值記為Aj。按照公式(2)計(jì)算得出清除率SR(%)。

(2)

1.3.2.2 羥基自由基的清除活性測(cè)定[12]

取12支25 mL的具塞試管并編號(hào)，分別向1～5號(hào)具塞試管中加入1 mL 0.15 mg/mL的鄰二氮菲溶液、2 mL pH 7.4的PBS緩沖溶液、1 mL 0.2 mg/mL的FeSO4溶液搖勻。將0.2 mg/mL的樣品溶液以0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL分別加入試管中，混勻。6號(hào)、7號(hào)試管分別標(biāo)記為受損傷管和空白參照管，8～12號(hào)試管以蒸餾水代替樣品作為樣品參照。除空白參照管外，其余試管于37 ℃水浴中恒溫1 h，于波長(zhǎng)536 nm處測(cè)定吸光度值，按照公式(3)計(jì)算得出清除率SR(%)。以Vc和BHT為對(duì)照。

(3)

式中：A1為損傷管的吸光度值；A2為空白參照管的吸光度值；A3為樣品管的吸光度值；A4為樣品參照管的吸光度值。

1.3.2.3 DPPH+的清除活性測(cè)定

按照李鉉軍等[13]的試驗(yàn)方法并稍做修改。量取2 mL不同濃度(0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL)的樣品溶液于具塞試管中，分別加入2 mL，70%的乙醇溶液混勻，避光靜置60 min后在波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定其吸光度，其值記為Aj；分別量取樣品溶液2 mL及2 mL DPPH溶液(濃度為2.0×10-4mol/L)于具塞試管中，混勻后避光靜置60 min，在波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定其吸光度，其值記為Ai；最后再量取70%乙醇溶液2 mL，DPPH溶液2 mL置于具塞試管中，混勻避光靜置60 min，在波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定其吸光度，其值記為A0，按照公式(4)計(jì)算得出清除率SR(%)。同時(shí)以Vc和BHT為陽(yáng)性對(duì)照。

(4)

1.3.2.4 亞硝基離子的清除活性測(cè)定

制備0.2 mg/mL的樣品溶液，將樣品溶液按0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL分別加入具塞試管中，混勻。以蒸餾水代替樣品，作空白對(duì)照，同時(shí)以Vc和BHT為陽(yáng)性對(duì)照。按鐘方麗等[14]的試驗(yàn)方法并稍做改動(dòng)，分別向其中加入5 μg/mL NaNO2溶液1 mL，37 ℃恒溫30 min，加入濃度為0.4%的對(duì)氨基苯磺酸溶液1 mL，混勻，靜置5 min，再加入0.5 mL濃度為0.2%的鹽酸萘乙二胺溶液，混勻后加70%的乙醇定容，靜置15 min后分別在540 nm處測(cè)其吸光度，測(cè)定的各濃度溶液的吸光度記為A1，用蒸餾水代替樣品，操作方法同上，所測(cè)得的吸光度為A0，按照公式(5)計(jì)算得出清除率SR(%)。

(5)

1.3.2.5 ABTS+的清除活性測(cè)定

按Zhang等[15]的試驗(yàn)方法并稍做修改。制備濃度為2 mg/mL的樣品溶液，以Vc和BHT為陽(yáng)性對(duì)照。配制濃度為7 mmol/L的ABTS溶液，與等體積濃度為2.45 mmol/L的過(guò)硫酸鉀溶液混合，避光、4 ℃條件下放置12～16 h[16]。用蒸餾水稀釋ABTS溶液使其在734 nm下的吸光值在(0.7±0.02)之間，取ABTS溶液3.9 mL，加入0.1 mL不同濃度(0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL)的樣品溶液，搖勻，室溫放置6 min，于734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。用蒸餾水代替樣品作為空白對(duì)照，按照公式(6)計(jì)算得出清除率SR(%)。

(6)

式中：A0為空白管的吸光值；A1為樣品的吸光值。

1.3.2.6 總還原能力的測(cè)定[17]

取1 mL樣品(質(zhì)量濃度分別為0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL)于具塞試管中，分別加入2.5 mL的0.2 mol/L磷酸鈉緩沖液(pH 6.6)和1%鐵氰化鉀溶液2.5 mL，混勻后于50 ℃水浴中恒溫20 min，分別加入濃度為10%的三氯醋酸溶液2.5 mL，于3000 r/min離心10 min后取上清液2.5 mL，加入蒸餾水2.5 mL和0.1%的FeCl3溶液1 mL，振蕩混勻靜置10 min，在波長(zhǎng)700 nm處測(cè)定其吸光度。以Vc和BHT為陽(yáng)性對(duì)照。

2 結(jié)果與討論

2.1 枸杞葉提取物中總黃酮的含量

按照1.3.1.3的方法測(cè)定黃酮的含量，帶入公式(1)計(jì)算得：枸杞葉黃酮提取物中的黃酮含量為277.7 mg/g。

2.2 枸杞葉黃酮提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力

圖2 枸杞葉黃酮提取物對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力Fig.2 Superoxide anion radical scavenging ability of flavonoids from Lycium barbarum leaves

超氧陰離子在ROS的形成中起重要作用，可誘導(dǎo)脂質(zhì)、蛋白質(zhì)及DNA中的氧化損傷，因此通過(guò)測(cè)定抗氧化劑對(duì)超氧陰離子的清除能力來(lái)判斷抗氧化劑的抗氧化能力[18]。由圖2可知，Vc、BHT、黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力均隨樣品濃度的增大而增大。當(dāng)樣品濃度為0.5 mg/mL時(shí)，Vc的超氧陰離子自由基清除率達(dá)到70%，BHT和黃酮的清除率也達(dá)到60%。當(dāng)樣品濃度為0.3 mg/mL時(shí)，黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除率將近60%，其清除效果優(yōu)于Vc和BHT。結(jié)果表明：清除超氧陰離子自由基方面，黃酮、BHT、Vc的清除能力沒(méi)有明顯的差異。

2.3 枸杞葉黃酮提取物對(duì)羥自由基的清除能力

圖3 枸杞葉黃酮提取物對(duì)羥自由基的清除能力Fig.3 Hydroxyl radical scavenging ability of flavonoids from Lycium barbarum leaves

羥自由基主要是由過(guò)氧化物負(fù)離子和過(guò)氧化氫反應(yīng)生成的，能夠殺死紅細(xì)胞，降解DNA、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)等化合物[19]，已被公認(rèn)為自由基病理學(xué)中的高度破壞物質(zhì)。由圖3可知，Vc對(duì)羥自由基的清除能力最佳，當(dāng)樣品濃度達(dá)到0.05 mg/mL時(shí)，清除率接近100%。BHT對(duì)羥基自由基的清除能力略次于Vc。黃酮對(duì)羥自由基的清除效果雖不如Vc和BHT，但其對(duì)羥自由基的清除率也達(dá)到了80%。結(jié)果表明：枸杞葉黃酮提取物對(duì)羥自由基具有一定的清除能力，其質(zhì)量濃度對(duì)羥自由基清除率影響不明顯。

2.4 枸杞葉黃酮提取物對(duì)DPPH+的清除能力

圖4 枸杞葉黃酮提取物對(duì)DPPH+的清除能力Fig.4 DPPH+ scavenging ability of flavonoids from Lycium barbarum leaves

抗氧化劑能夠清除自由基，對(duì)氧化損傷有很強(qiáng)的保護(hù)作用，而DPPH+法已被廣泛用于抗氧化劑清除自由基活性的測(cè)定[20]。在DPPH+清除試驗(yàn)中，抗氧化劑將DPPH+還原為黃色化合物——二苯基聯(lián)吡啶，且反應(yīng)的程度取決于抗氧化劑的供氫能力[21]。由圖4可知，對(duì)DPPH+清除能力依次是Vc>黃酮>BHT。黃酮和BHT的清除率均隨樣品濃度的增大而增大，且黃酮對(duì)DPPH+的清除能力優(yōu)于BHT，當(dāng)樣品的濃度為0.4～0.5 mg/mL時(shí)，黃酮對(duì)DPPH+的清除率達(dá)到80%左右，而B(niǎo)HT對(duì)DPPH+的清除率在70%左右。結(jié)果表明：枸杞葉黃酮提取物對(duì)DPPH+具有一定的清除能力，且與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)。

2.5 枸杞葉黃酮提取物對(duì)亞硝基離子的清除能力

圖5 枸杞葉黃酮提取物對(duì)亞硝基離子的清除能力Fig.5 Nitroso ion scavenging ability of flavonoids from Lycium barbarum leaves

胡利等[22]研究指出，桑葉黃酮具有較強(qiáng)的清除亞硝酸鹽作用，并且該清除作用隨著反應(yīng)時(shí)間、溫度及黃酮濃度的增加而增大，提示其可用于添加亞硝酸鈉作為發(fā)色劑的肉制品。由圖5可知，在清除亞硝基自由基方面，清除能力依次是Vc>黃酮>BHT，Vc對(duì)亞硝基離子的清除能力明顯強(qiáng)于黃酮和BHT，當(dāng)樣品的濃度達(dá)到0.08 mg/mL時(shí)，清除率達(dá)到80%。黃酮對(duì)亞硝基離子的清除率與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)，當(dāng)樣品的濃度達(dá)到0.1 mg/mL時(shí)，其清除率為34%。BHT對(duì)亞硝基離子的清除率明顯弱于Vc，也略弱于黃酮，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL時(shí)，對(duì)亞硝基的清除率只有27%左右。結(jié)果表明：枸杞葉黃酮提取物對(duì)亞硝基離子具有清除能力，但清除效果不如其對(duì)超氧陰離子自由基、羥自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除效果。

2.6 枸杞葉黃酮提取物對(duì)ABTS+的清除能力

圖6 枸杞葉黃酮提取物對(duì)ABTS+的清除能力Fig.6 ABTS+ scavenging ability of flavonoids from Lycium barbarum leaves

ABTS+清除實(shí)驗(yàn)基于評(píng)價(jià)抗氧化劑在體外清除穩(wěn)定ABTS+的能力[23]。由圖6可知，對(duì)ABTS+的清除能力依次是Vc>BHT>黃酮。當(dāng)樣品的濃度在0.1～0.5 mg/mL時(shí)，Vc和BHT對(duì)ABTS+的清除率均達(dá)到90%以上。樣品的濃度為0.1 mg/mL時(shí)，黃酮對(duì)ABTS+的清除率不足10%，但是它的清除能力隨著樣品濃度的增大而明顯升高，當(dāng)樣品濃度達(dá)到0.5 mg/mL時(shí)，其對(duì)ABTS+的清除率達(dá)到80%左右，接近BHT和Vc的清除率。結(jié)果表明：枸杞葉黃酮提取物能夠有效地清除ABTS+，且與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)。

2.7 枸杞葉黃酮提取物的還原能力

圖7 枸杞葉黃酮提取物的還原能力Fig.7 Reducing ability of flavonoids from Lycium barbarum leaves

樣品的還原能力能夠反映一定的抗氧化性，抗氧化劑可將Fe3+絡(luò)合物還原成綠色或藍(lán)色的Fe2+絡(luò)合物。試驗(yàn)通過(guò)顯色反應(yīng)可以測(cè)定出Fe3+被還原成Fe2+程度的高低，從而可以判斷出黃酮類化合物還原能力的強(qiáng)弱。由圖7可知，Vc、BHT、黃酮的還原能力均隨樣品濃度的增大而增大。樣品濃度為0.1 mg/mL時(shí)，黃酮和Vc的還原能力相當(dāng)，吸光度值均在0.3左右，而此濃度BHT的吸光度值達(dá)到0.6。當(dāng)樣品的濃度為0.5 mg/mL時(shí)，Vc和BHT的吸光度均達(dá)到1.0左右，而黃酮的吸光度為0.5左右，說(shuō)明在還原能力方面，枸杞葉黃酮提取物弱于Vc和BHT，基本上達(dá)到了它們還原能力的50%。

3 結(jié)論

本研究采用有機(jī)溶劑浸提法，對(duì)枸杞葉中的黃酮類化合物進(jìn)行提取，采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測(cè)得提取產(chǎn)物的黃酮含量為277.7 mg/g，提取物呈黃綠色的粉末狀物質(zhì)。以BHT和Vc為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)枸杞葉黃酮提取物進(jìn)行體外抗氧化活性研究，結(jié)果表明：在一定的濃度范圍內(nèi)，枸杞葉黃酮類化合物的還原能力是Vc和BHT還原能力的50%，其對(duì)超氧陰離子自由基、羥基自由基、DPPH+、亞硝基自由基、ABTS+具有顯著的清除作用，其最大清除能力分別為62%，84%，80%，34%和78%。由此可知，枸杞葉黃酮提取物可以作為一種天然抗氧化劑或調(diào)味品應(yīng)用于油脂及含油食品、肉制品或高檔植物飲料，該研究結(jié)果為枸杞葉資源的綜合利用提供了理論基礎(chǔ)。

[1]鄭國(guó)琦,包晗，楊涓，等.寧夏枸杞果實(shí)韌皮部及其周圍細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)研究[J].西北植物學(xué)報(bào)，2015，35(11)：2211-2218.

[2]馬婷婷，張旭，饒建華，等.枸杞葉成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].北方園藝，2011(13)：194-196.

[3]崔振華，孟躍軍，徐桂花，等.枸杞葉復(fù)合綠茶飲料的研制[J].食品工業(yè)，2013，34(7)：39-42.

[4]Li J E,Fan S T,Qiu Z H,et al.Total flavonoids content,antioxidant and antimicrobial activities of extracts fromMoslachinensisMaxim.cv.Jiangxiangru[J].LWT-Food Science and Technology,2015,64(2):1022-1027.

[5]Miklós Poór,Zita Zrínyi,Tamás Kszegi.Structure related effects of flavonoid aglycones on cell cycle progression of HepG2 cells: metabolic activation of fisetin and quercetin by catechol-O-methyltransferase (COMT)[J].Biomedicine & Pharmacotherapy,2016,83:998-1005.

[6]Myungsuk Kim,Sun Young Kim,Ahmad Randy,et al.Inhibitory effect of theLarixsibiricaand its various flavonoids on the IgE-stimulated mast cell activation and anaphylaxis[J].Journal of Functional Foods,2016,27:631-644.

[7]Chen X M,Andrew R Tait,David D Kitts.Flavonoid composition of orange peel and its association with antioxidant and anti-inflammatory activities[J].Food Chemistry,2017,218:15-21.

[8]范艷麗，龔媛，梁飛，等.微波輔助法提取枸杞葉黃酮的工藝研究[J].中國(guó)食品添加劑，2013(4)：83-89.

[9]韓麗娜，沈浩，田建文，等.枸杞葉黃酮提取物對(duì)復(fù)合羊肉糜冷藏期品質(zhì)的影響[J/OL].食品科學(xué)，http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.2206.TS.20170323.1441.078.html,2017-03-23.

[10]劉蘭英，曹有龍，趙友誼.枸杞葉黃酮純化工藝研究[J].食品科技，2009，34(8)：134-135．

[11]Yang Rifu,Geng Linlin,Lu Haiqin,et al.Ultrasound-synergized electrostatic field extraction of total flavonoids fromHemerocalliscitrinabaroni[J].Ultrasonics Sonochemistry,2017,34:571-579.

[12]Wu P P,Ma G Z,Li N H,et al.Investigation of in vitro and in vivo antioxidant activities of flavonoids rich extract from the berries ofRhodomyrtustomentosa(Ait.)Hassk[J].Food Chemistry,2015,173:194-202.

[13]李鉉軍，崔勝云．抗壞血酸清除DPPH自由基的作用機(jī)理[J].食品科學(xué)，2011，32(1)：86-90．

[14]鐘方麗，王文姣，王曉林，等．猴腿蹄蓋蕨、玉竹總黃酮的體外抗氧化活性研究[J]．中國(guó)食品添加劑，2016(6)：65-72.

[15]Zhang S L,Deng Peng,Xu Y C,et al.Quantification and analysis of anthocyanin and flavonoids compositions,and antioxidant activities in onions with three different colors[J].Journal of Integrative Agriculture,2016,15(9):2175-2181.

[16]Mohamed Ben Sghaier,Ines Skandrani,Nouha Nasr,et al.Flavonoids and sesquiterpenes fromTecuriumramosissimumpromote antiproliferation of human cancer cells and enhance antioxidant activity: a structure-activity relationship study[J].Environment Toxicology and Pharmacology，2011，32(3)：336-348.

[17]李進(jìn)，李淑珍，馮文娟，等．黑果枸杞葉黃酮的體外抗氧化活性研究[J]．食品科學(xué)，2010，31(13)：259-262.

[18]Sun L J,Zhang J B,Lu X Y,et al.Evaluation to the antioxidant activity of total flavonoids extract from persimmon (DiospyroskakiL.) leaves[J].Food and Chemical Toxicology,2011,49(10):2689-2696.

[19]Tan L H,Zhang D,Wang G,et al.Comparative analyses of flavonoids compositions and antioxidant activities of Hawk tea from six botanical origins[J].Industrial Crops and Products,2016,80:123-130.

[20]Jiao J,Gai Q Y,Lou M,et al.Comparison of main bioactive compounds in tea infusions with different seasonalForsythiasuspensaleaves by liquid chromatography-tandem mass spectrometry and evaluation of antioxidant activity[J].Food Research International,2013,53(2):857-863.

[21]Wan P F,Sheng Z L,Han Q,et al.Enrichment and purification of total flavonoids fromFlospopuliextracts with macroporous resins and evaluation of antioxidant activities in vitro[J].Journal of Chromatography B,2014,945-946:68-74.

[22]胡利，賈冬英，姚開(kāi)，等．桑葉黃酮對(duì)亞硝酸鹽的體外清除作用研究[J].中國(guó)調(diào)味品，2015，40(3)：1-5.

[23]Hu Q H,Yu J,Yang W J,et al.Identification of flavonoids fromFlammulinavelutipesand its neuroprotective effect on pheochromocytoma-12 cells[J].Food Chemistry,2016,204:274-282.

StudyonFreeRadicalScavengingEffectofFlavonoidsfromLyciumbarbarumLeavesinVitro

FAN Yan-li1, HAN Li-na1, FU Li-xia1, MENG Xue-mei1, TIAN Jian-wen2

(1.College of Agriculture, Ningxia University, Yinchuan 750021, China；2.Ningxia Science and Technology Department, Yinchuan 750001, China)

The flavonoids fromLyciumbarbarumleaves are extracted by organic solvent extraction(70% ethanol).And the antioxidant activity of flavonoids fromLyciumbarbarumleaves is evaluated by radical scavenging experiments in vitro taking Vc and BHT as positive controls. The results show that the content of flavonoids in the extract is 277.7 mg/g. The flavonoids fromLyciumbarbarumleaves have significant scavenging ability on superoxide anion radical, hydroxyl radical, DPPH+, nitroso radical and ABTS+, and the maximum removal capacity is 62%, 84%, 80%, 34%, 78% respectively, meanwhile, the reducti on ability of the product on Fe3+reaches 50% of that of Vc and BHT. Conclusion:The flavonoids fromLyciumbarbarumleaves have high antioxidant activity in vitro, which can provide the basis for the development and utilization of flavonoids fromLyciumbarbarumleaves.

Lyciumbarbarumleaves；flavonoids；antioxidation

TS201.2

A

10.3969/j.issn.1000-9973.2017.12.007

1000-9973(2017)12-0032-06

2017-06-15

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31660438)

范艷麗(1980-)，女，副教授，博士，研究方向：食品營(yíng)養(yǎng)與特色農(nóng)產(chǎn)品加工。