鄭立，蘭志瓊，艾青青，高必興,2，鄧晶晶，盧先明

·品種品質·

藏藥康定獨活的生藥學研究

鄭立1，蘭志瓊1，艾青青1，高必興1,2，鄧晶晶1，盧先明1

目的：對藏區(qū)習用藥材康定獨活進行生藥學鑒定研究。方法：對康定獨活的性狀特征、橫切面與粉末顯微鑒定特征、大類化學成分種類、總香豆素含量進行了研究，并以圖文形式記錄結果。結果：首次找出了康定獨活藥材的性狀及顯微鑒別特征，并確定該藥材含有揮發(fā)油、香豆素類、有機酸、多糖，可能含有酚類和鞣質、皂苷；建立了康定獨活總香豆素含量測定方法，并測定其總香豆素含量為1.53%。結論：本文為藏區(qū)習用藥材康定獨活的鑒別與應用提供了參考依據，并建立了康定獨活總香豆素含量測定方法。

康定獨活；性狀特征；顯微鑒別；成分分析；總香豆素

康定獨活為傘形科獨活屬植物康定獨活Heracleumsoulieide Boiss. Herb. 的干燥根。產于四川西部和西北部，生長于海拔2600-3500米的山坡上[1]，資源豐富。據課題組前期于四川甘孜州、阿壩州等主產地調查發(fā)現(xiàn)，當地藏族人常將此種獨活作為藏藥“珠瑪（噶）”藥用?！爸楝敗笔驾d于《晶珠本草》，《晶珠本草》[2]云：珠瑪殺蟲，治潰瘍，麻風，疥瘡，止血。但迄今為止，國內外尚未見關于康定獨活生藥學方面的研究報道。本研究采用生藥學方法對康定獨活藥材的性狀及顯微鑒別、成分及含量測定方面進行系統(tǒng)研究，為其鑒別及資源開發(fā)利用奠定扎實的基礎，從生藥學角度為藏醫(yī)臨床用藥的安全性、有效性、穩(wěn)定性提供一定的科學依據。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

CH20BIMF200顯微鏡（日本Olympus），描繪目鏡（北京第三光學儀器廠），UV-1100型紫外-可見分光光度儀（上海天美科學儀器有限公司），萬分之一電子天平（德國Sartorius BP121s），十萬分之一電子天平（德國Sartorius BP211D），紫外分光光度計（日本島津UV-1600型），超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，KQ5200E型，功率200 W，頻率40 KHZ），補骨脂素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號130739-201115，純度99%）

1.2 材料

供實驗的材料均為實地自采及購買，經成都中醫(yī)藥大學藥學院盧先明教授鑒定為來源于傘形科獨活屬植物康定獨活Heracleumsoulieide Boiss. Herb.的干燥根。具體見表1。

表1 康定獨活藥材樣品產地

2 方法與結果

2.1 藥材性狀

采用性狀鑒定法，觀察并記錄樣品的外觀性狀特征，并以高清攝影技術記錄其外觀特征，結果見圖1。

本品呈圓錐形，扭曲，直徑約為1～5 cm，下部分偶有分支。表面棕黃色至棕褐色，具不規(guī)則的縱皺紋和橫環(huán)紋，具有稀疏的細小皮孔及根痕。質堅硬，易折斷，斷面不平整，有一棕色環(huán)。皮部棕褐色，有棕褐色的油斑。木部白色，約占橫切面的1/2，皮部與木部容易分離，露出光滑的木心。香氣特異，味苦。

圖1 康定獨活藥材圖

2.2 橫切面顯微特征

對根進行切片制作，置顯微鏡下觀察、描繪目鏡觀察并記錄橫切面顯微特征。

根部橫切圓形，最外層木栓細胞由4～9列扁平細胞組成，皮層狹窄，稀有油室，裂隙多見。韌皮部寬廣，油室散在，直徑11～72μm，周圍分泌細胞5～9個，內含棕黃色分泌物。韌皮部射線及木射線由2～5列類長方形細胞組成。形成層成環(huán)。導管單個或2～3個聚集。直徑約20～65μm。木質部內存在木纖維。無髓。見圖2、圖3。

圖2 康定獨活橫切面簡圖

圖3 康定獨活橫切面顯微詳圖

2.3 粉末顯微特征

通過光學顯微鏡觀察，并運用顯微成像系統(tǒng)記錄康定獨活藥材的油室、淀粉粒、纖維、導管等纖維特征。

本品粉末黃色，淀粉粒多見，多單粒，偶見復粒，直徑5～13μm。油室多破碎，可見油細胞。導管多螺紋，可見網紋，梯紋導管，直徑13～69μm。纖維多個聚集，呈長梭狀，胞壁厚，胞腔小，且胞腔呈分梭狀，直徑約15～35μm。木栓細胞類方形，橢圓形。見圖4。

圖4 康定獨活粉末圖

2.4 大類成分定性分析

2.4.1供試液的制備水供試液的制備：取藥材粗粉約10g，置于具塞三角錐型瓶中，加水100 mL，冷浸24 h，濾過，取10 mL濾液為冷水提取液做氨基酸、多肽、蛋白質的檢查。剩余藥渣在60℃水浴鍋上加熱0.5 h，過濾，得熱水提取液做糖、多糖、苷類、皂苷、鞣質、有機酸等檢查。

乙醇供試液、酸水供試液的制備：取藥材粗粉10g，加10倍量的95%乙醇，水浴鍋加熱回流1h，過濾，濾液分成兩部分，一份為乙醇供試液做黃酮、蒽醌、酚、苷、香豆素、內酯、萜類、強心苷、甾體等檢查；一份將乙醇液濃縮成膏狀（至無醇味），加5%鹽酸使溶解，過濾，得酸水供試液做生物堿檢查。

石油醚供試液制備：取粗粉1g，置于具塞三角錐形瓶中，加石油醚10 mL，室溫放置3h，過濾，濾液即為石油醚供試液做油脂、揮發(fā)油檢查。

2.4.2 結果康定獨活根含有揮發(fā)油、香豆素類、有機酸、多糖；可能含有2，6-二去氧糖的強心苷、酚類和鞣質、皂苷；不含氨基酸、多肽、蛋白質、生物堿類、蒽醌、黃酮類。具體方法及結果見表2。

表2 康定獨活藥材化學成分定性分析方法及結果

注：“-”表示無現(xiàn)象。“+”表示有現(xiàn)象。

2..5 總香豆素含量測定

2.5.1 對照品溶液的制備 精密稱定補骨脂素對照品10.0 mg，置于50 mL的容量瓶中，加甲醇適量，超聲使其溶解，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，即得（每1 mL含補骨脂素0.19 mg）。

2.5.2 供試品溶液的制備 精密稱定本品粉末0.5 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇25 mL，靜置24 h，回流90 min，放冷后，過濾至50 mL容量瓶中，殘渣用甲醇洗滌兩次，每次10 mL，用甲醇定容至50 mL，后取1 mL加入25 mL容量瓶中，用甲醇定容至25 mL；甲醇作為空白溶劑。以空白溶劑作為參比，于290 nm下測定吸光度，依標準曲線上讀出供試品溶液中的補骨脂素的重量（μg），計算，即得。

2.5.3 測定波長的選擇 參照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則0401) ,在200～400 nm波長下分別對對照品溶液及供試品溶液進行掃描，結果顯示，三種溶液均在290 nm左右有吸收峰，故將290 nm作為測定波長。

2.5.4 線性關系考察 精密吸取對照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分別置于50 mL的容量瓶中，甲醇定容至刻度，用甲醇作為空白溶劑。以空白溶劑作為參比，照紫外-可見分光光度法（附錄ⅤA），于290 nm下測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線。得出回歸方程得出回歸方程Y=0.0640X-0.0056，r=0.9986，補骨脂素在0～20 μg范圍內，吸光度與濃度呈良好的線性關系。

2.5.5 精密度實驗 精密量取對照品溶液1 mL置于50 mL容量瓶中，用甲醇作為空白溶劑。以空白溶劑作為參比，于290 nm下測定吸光度，連續(xù)測定6次，RSD為0.72%。

2.5.6 穩(wěn)定性實驗 精密稱定藥材粉末0.5 g，按供試品方法操作，于290 nm下測定吸光度，每15 min測定，測7次，共105 min?？刀í毣頡SD為0.71%。

2.5.7 重復性試驗 分別精密稱定藥材粉末0.5 g，平行六份，按樣品制備方法操作，于290 nm下檢視，康定獨活RSD為1.07%。

2.5.8 加樣回收實驗 分別精密稱定藥材粉末0.1 g，分別加入補骨脂素貯備液適量，按供試品方法制備后，于290 nm下測定，計算總香豆素的回收率，結果：康定獨活平均回收率為101.01%，RSD=1.45%。

2.5.9 樣品測定 取各批康定獨活0.5 g，精密稱定，按供試品方法制備，計算總香豆素含量及其平均值，結果見表3。

表3 康定獨活藥材總香豆素含量

3.結果與討論

3.1 經課題組前期實地調查發(fā)現(xiàn)，康定獨活資源豐富，具有較大的開發(fā)潛力。但目前關于它的研究報道極少，亟待研究。

3.2 通過研究，首次找出了康定獨活藥材的性狀特征及顯微特征，為藏藥“珠瑪”類的鑒別奠定了扎實的基礎。與白亮獨活[5]相比，兩者性狀及顯微特征有明顯區(qū)別：?康定獨活根為圓錐形，下部分偶有分支；白亮獨活根為圓柱形，下部分支。?康定獨活表面棕黃色至棕褐色；白亮獨活表面灰棕色。?康定獨活木部白色，且木心光滑；白亮獨活木部淡黃色，木部略朽蝕狀。④康定獨活皮層稀有油室，韌皮部油室散在；白亮獨活皮層可見油室，韌皮部有類圓形油室排列成數輪。⑤康定獨活粉末呈黃色，淀粉粒多見，多單粒，偶見復粒，纖維多個聚集；白亮獨活粉末呈黃棕色。淀粉粒眾多，類圓形，無臍點或偶呈點縫狀，多單粒聚集成團，纖維單個或多個聚集。⑥康定獨活木質部內存在木纖維，無髓。⑦白亮獨活薄壁細胞多含淀粉粒。通過上述特征，可以從藥材性狀及顯微特征上鑒別康定獨活與白亮獨活。

3.3 據《中華本草藏藥卷》記載：珠噶類藥材中白亮獨活所含成分有揮發(fā)油、香豆素類、有機酸、萜類[1]。根據課題組前期研究，白亮獨活所含成分中以香豆素類物質為主，且呋喃香豆素含量最多[3-4]。通過化學成分定性實驗，確定康定獨活藥材含有揮發(fā)油、香豆素、有機酸、多糖，與白亮獨活所含成分相似。同時，基于課題組前期關于白亮獨活質量標準研究[5]，首次建立了康定獨活總香豆素含量測定方法，為進一步建立康定獨活的質量標準奠定了扎實的基礎。

3.4 研究結果表明：康定獨活所測總香豆素平均含量為1.53%，白亮獨活為3.49%[5]?？梢姡瑑煞N獨活總香豆素含量差異甚大，提示我們白亮獨活及康定獨活藥用價值的不同，具體有待進一步研究。

[1] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草.藏藥卷[M].上?！蒙虾？茖W技術出版社. 2002∶ 139-140

[2] 帝瑪爾?丹增彭措.晶珠本草（藏文）[M].北京∶ 北京民族出版社. 1986∶98

[3] 孫漢董,林中文,鈕芳娣.傘形科中藥的研究—Ⅶ.白亮獨活根的化學成分(1)[J].云南植物研究.1984,01∶99-102.

[4] 林中文,陳一平,孫漢董,等.白亮獨活的香豆素成分[J].云南植物研究.1993,15(3)∶313-314.

[5] 高必興,蘭志瓊,鄧晶晶,等.白亮獨活(藏藥珠噶)的質量標準研究[J]. 中藥材,2015,38(05)∶962-965.

The pharmacognosy research of Tibetan medicine Kangting Duhuo

/ZHENG Li1, LAN Zhi-Qiong1,AI Qing-qing1,GAO Bi-Xing1,2, DENG Jing-Jin1, LU Xian-Ming1//(1.School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan;2.Sichuan Institute for Food and Drug Control,Chengdu 611730,Sichuan)

Objective:To study the pharmacognostic features of Tibetan conventional medicine Kangting Duhuo.Method:The morphological features, powder and original plant transverse section of microscopic identification, types of chemical species,total coumarin content were researched, and the results were recorded in graphic-text form.Result:The properties and microscopic identification features of KangtingDuhuo was found for the first time. Volatile oil, coumarin, organic acids, polysaccharides were contained. Phenols, tannins and saponins may exist in the herb. The determination method of total coumarin contentin Kangting Duhuo was established, and its total coumarin content was 1.53%.Conclusion:The article provides reference for the identification,development and utilization of KangtingDuhuo. And the determination method of the total coumarin content in Kangting Duhuo is also established.

Kangting Duhuo; morphological characteristics; microscopic identification; component analysis; total coumarin

R 282

A

1674-926X(2017)06-005-04

四川省藏藥標準的制定(301-377)；中藥飲片調劑包裝貯藏養(yǎng)護技術研究-成都中醫(yī)藥大學中藥基礎基地科研訓練及科研能力提高項目子課題（J1310034-07）

1.成都中醫(yī)藥大學藥學院中藥材標準化教育部重點實驗室四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137；2.四川省食品藥品檢驗檢測院四川，成都 611730

鄭立（1995-），女（漢族），在讀本科生，主要研究方向為中藥品種質量與資源開發(fā)Tel∶18408210842 Email∶1095148157@qq.com

蘭志瓊（1979-），女（漢族），博士，副教授，碩士生導師，第四批四川省中醫(yī)藥管理局學術帶頭后備人選，主要從事中藥品種質量與資源開發(fā)的教學、科研工作Tel∶028-61800231 Email∶lanlan1979512@126.com

2016-12-28

（責任編輯：胡慧玲）