汪宏梅, 張云寧, 羅 云

(江蘇省泰興市人民醫(yī)院 檢驗科, 江蘇 泰興, 225400)

流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測急性髓細(xì)胞白血病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的效果分析

汪宏梅, 張云寧, 羅 云

(江蘇省泰興市人民醫(yī)院 檢驗科, 江蘇 泰興, 225400)

目的分析流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測急性髓細(xì)胞白血病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化的效果。方法選取108例急性髓細(xì)胞白血病患者為白血病組，另選取108例健康人員作為健康組，采用MultiSET免洗淋巴細(xì)胞亞群試劑盒，運用美國BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀CD45/SSC設(shè)門檢測10 000個細(xì)胞，采用FACS Diva軟件對細(xì)胞免疫表型及表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分析。結(jié)果白血病組患者的CD3、CD4、CD4+/CD8+、CD16+/CD56+均顯著低于健康組(P<0.05)，CD8+、CD19+均顯著高于健康組(P<0.05)。細(xì)胞CD33、CD38、Cyt-MPO抗原高表達(dá)數(shù)比例較高，分別占總數(shù)的72.5%、70.4%、67.5%; 其次為CD15、CD64，分別占總數(shù)的38.0%、32.5%。高表達(dá)CD33和CD64及Cyt-MPO表達(dá)均呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，但是和CD15表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測急性髓細(xì)胞白血病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群，能夠?qū)ζ渥兓?guī)律有一個清晰的了解。

流式細(xì)胞學(xué)技術(shù); 急性髓細(xì)胞白血病; 外周血淋巴細(xì)胞亞群

急性髓細(xì)胞白血病又稱急性非淋巴細(xì)胞白血病，是一種高度異質(zhì)化的惡性血液病，發(fā)生機(jī)制為骨髓中集聚血細(xì)胞的髓性癌，正常血細(xì)胞的生成受到快速生長的異常白細(xì)胞的干擾，進(jìn)而從骨髓向血液進(jìn)入，取代正常血細(xì)胞[1-2]。目前，臨床還未明確急性髓細(xì)胞白血病的具體病因，普遍認(rèn)為其發(fā)病可能受到病毒感染、化學(xué)物質(zhì)毒性等的影響，而癌細(xì)胞可能會在缺失機(jī)體細(xì)胞/體液免疫功能、較弱的免疫清除能力等的作用下無限增殖[3]。本研究分析流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測急性髓細(xì)胞白血病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化的效果，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2013年5月—2016年5月收治的急性髓細(xì)胞白血病患者108例為白血病組，所有患者均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[4]中急性髓細(xì)胞白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)血常規(guī)檢查及骨髓穿刺檢查確診為急性髓細(xì)胞白血病，均知情同意。其中男58例，女50例，年齡16～54歲，平均(19.4±5.4)歲; 在FAB分型方面, 10例患者為M0, 15例患者為M1, 23例患者為M2, 20例患者為M3, 13例患者為M4, 14例患者為M5, 13例患者為M6。另選取同期來本院進(jìn)行體檢的108例健康人員作為健康組，其中男57例，女51例，平均(22.0±5.3)歲。2組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05), 具有可比性。

1.2 方法

采集2組患者的外周靜脈全血2 mL, 在抗凝管中放置，振搖均勻后備用。分別將50 μL抗凝全血取出來，在FACS專用試管中放置，將20 μL CD3/CD4/CD8/CD45/CD19/CD45/CD1等標(biāo)記的抗體分別加入其中，旋渦混勻，室溫下進(jìn)行15 min的避光放置，將450 μL溶血素加入其中，混勻后進(jìn)行15 min的避光放置，采用MultiSET免洗淋巴細(xì)胞亞群試劑盒，運用美國BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀CD45/SSC設(shè)門檢測10 000個細(xì)胞，采用FACS Diva軟件對細(xì)胞免疫表型及表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 2組患者的外周血T、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較

白血病組患者的CD3、CD4、CD4+/CD8+、CD16+/CD56+均顯著低于健康組(P<0.05)，CD8+、CD19+均顯著高于健康組(P<0.05), 見表1。

表1 2組患者的外周血T、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞亞群 檢測結(jié)果比較 %

與健康組比較, *P<0.05。

2.2 白血病組患者細(xì)胞CD抗原表達(dá)分布情況

分析

白血病組患者細(xì)胞CD33、CD38、Cyt-MPO抗原高表達(dá)數(shù)比例較高，分別占總數(shù)的72.5%、70.4%、67.5%; 其次為CD15、CD64, 分別占總數(shù)的38.0%、32.5%; 再次為CD7，占總數(shù)的13.0%; 最后為CD2、CD19, 均為0%, 見表2。

2.3 白血病組患者高表達(dá)CD33和CD15、CD64及

Cyt-MPO表達(dá)的相關(guān)性分析

白血病組患者高表達(dá)CD33和CD64及Cyt-MPO表達(dá)均呈顯著正相關(guān)(P<0.05), 但是和CD15表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05), 見表3。

3 討 論

急性髓細(xì)胞白血病屬于一種惡性腫瘤性疾病，誘發(fā)因素為造血干細(xì)胞異常增生，現(xiàn)階段急性髓細(xì)胞白血病患者具有較低的5年生存率[5]。發(fā)生這一現(xiàn)象的主要原因為現(xiàn)階段的治療手段無法將致病細(xì)胞徹底清除掉，在一定程度上殘留了致病細(xì)胞，從而造成白血病復(fù)發(fā)，最終造成白血病致死等。很多相關(guān)醫(yī)學(xué)研究[6-8]表明，白血病的發(fā)病受到外周血淋巴細(xì)胞亞群異常的影響。

在免疫系統(tǒng)中，淋巴細(xì)胞占有極為重要的地位，依據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)志及功能，臨床分淋巴細(xì)胞為很多不同群體，在免疫應(yīng)答中進(jìn)行分化及增值前經(jīng)抗原活化，最終將功能表達(dá)出來對效應(yīng)進(jìn)行形式，對機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定的環(huán)境進(jìn)行有效維持。在腫瘤免疫中，T淋巴細(xì)胞發(fā)揮著中心調(diào)控的作用，其屬于一群人胸腺中輸出細(xì)胞，具有特殊標(biāo)志，對細(xì)胞免疫功能及免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行執(zhí)行，其中CD3+細(xì)胞代表T淋巴細(xì)胞總數(shù); 在免疫應(yīng)答過程中, CD4+細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞占有極為重要的地位，能夠促進(jìn)其他免疫細(xì)胞功能的增強(qiáng)或?qū)⑵鋽U(kuò)大。如果其T淋巴細(xì)胞減少，則說明患者體內(nèi)具有較低的細(xì)胞免疫功能; CD8+細(xì)胞一方面會對靶細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，另一方面還會調(diào)節(jié)性免疫抑制CD4+細(xì)胞。如果其T淋巴細(xì)胞相對增加，則能夠為機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)提供良好的前提條件，并促進(jìn)白細(xì)胞對癌變細(xì)胞清除能力的減弱，使癌細(xì)胞殘存，從而提升復(fù)發(fā)率; CD4+/CD8+的穩(wěn)定比例對細(xì)胞免疫反應(yīng)的平衡進(jìn)行維持，其將抗腫瘤作用有效發(fā)揮出來的唯一條件為具有正常的水平[9]。

表2 白血病組患者細(xì)胞CD抗原表達(dá)分布情況分析[n(%)]

表3 白血病組患者高表達(dá)CD33和CD15、CD64及Cyt-MPO表達(dá)的相關(guān)性分析

Cyt-MPO屬于一種過氧化物酶，產(chǎn)生主體為中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒，能夠?qū)⒆銐虻淖杂苫a(chǎn)生出來，途徑為催化氯化物并氧化氧化氫，進(jìn)而對NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的反應(yīng)進(jìn)行抑制，對機(jī)體免疫功能造成直接而深刻的影響; CD15屬于一種碳水化合物抗原，在單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞細(xì)胞膜表面糖蛋白上存在，其一方面作為第二信使在細(xì)胞間的信號傳導(dǎo)中參與，向細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核傳導(dǎo)細(xì)胞外信息，另一方面還使腫瘤細(xì)胞易于在基膜上黏附，途徑為通過細(xì)胞黏附作用，從而為癌癥進(jìn)展提供良好的前提條件; CD19是B細(xì)胞的一個標(biāo)志，在一定程度上影響著B細(xì)胞的分化、增值等; CD45是一種白細(xì)胞表面共同抗原，能夠?qū)⑷堪准?xì)胞獲取過來，這些白細(xì)胞沒有雜細(xì)胞，途徑為通過CD45/SSC設(shè)門; CD33分子屬于一種跨膜受體，分布于髓系細(xì)胞細(xì)胞表現(xiàn)，臨床普遍認(rèn)為其標(biāo)志著粒細(xì)胞特異性; CD64在白細(xì)胞表面分布，屬于一種Fc受體，將體液調(diào)節(jié)和細(xì)胞免疫連接了起來[10]。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會血液學(xué)分會. 急性髓系白血病(復(fù)發(fā)難治性)中國診療指南(2011年版)[J]. 中華血液學(xué)雜志, 2011, 32(12): 887-888.

[2] 中華醫(yī)學(xué)會血液學(xué)分會. 成人急性髓系白血病(非急性早幼粒細(xì)胞白血病)中國診療指南(2011年版)[J]. 中華血液學(xué)雜志, 2011, 32(11): 804-807.

[3] 陳影. 流式細(xì)胞術(shù)檢測急性髓細(xì)胞白血病免疫表型及其臨床意義[D]. 安徽醫(yī)科大學(xué), 2014.

[4] 賈明峰, 席亞明, 石秀娥, 等. MPO、NQ01優(yōu)基因多態(tài)性與急性白血病易感性的相關(guān)研究[J]. 中國實驗血液學(xué)雜志, 2012, 20(6): 1336-1340.

[5] 張書芹, 王光平, 朱平, 等. 急性髓系白血病CD33+/CD34+細(xì)胞表面核酸適配體的篩選及結(jié)構(gòu)分析[J]. 中國實驗血液學(xué)雜志, 2011, 19(3): 561-565.

[6] 王賢, 夏永泉, 張葵. CD64和CD14單核細(xì)胞相關(guān)性急性髓系白血病診斷中的意義[J]. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 34(2): 158-159.

[7] 呂占武, 胡朝暉, 陳南風(fēng), 等. 糖原染色在急性淋巴細(xì)胞白血病亞型診斷中的應(yīng)用[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床, 2011, 8(2): 180-181.

[8] 王忠英, 林楨, 鄧小燕, 等. 急性髓細(xì)胞白血病17號染色體短臂雜合性缺失的研究[J]. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床, 2011, 8(9): 1025-1026, 1029.

[9] Cogle Christopher R, Scott Bart L, Boyd Thomas, et al. Oral Azacitidine (CC-486) for the Treatment of Myelodysplastic Syndromes and Acute Myeloid Leukemia[J]. The Oncologist, 2015, 20 (12): 1404-1412.

[10] Chen Mo, Zhu Nan, Liu Xiaochuan, et al. JMJD1C is required for the survival of acute myeloid leukemia by functioning as a coactivator for key transcription factors[J]. Genes & Development, 2015, 29 (20): 2123-2139.

Effectofflowcytometryondetectionofperipheralbloodlymphocytesubsetsinpatientswithacutemyeloidleukemia

WANGHongmei,ZHANGYunning,LUOYun

(DepartmentofLaboratory,TaixingPeople′sHospital,Taixing,Jiangsu, 225400)

ObjectiveTo analyze the effect of flow cytometry on detection of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with acute myeloid leukemia.MethodsA total of 108 patients with acute myeloid leukemia were selected as leukemia group, and 108 healthy people were selected as control group. MultiSE lymphocyte subsets regents and flow cytometer (CD45/SSC, America) were used to detect 10 000 cells, and FACS Diva software was used to analyze the cellular immunophenotype and expression intensity.ResultsIn the leukemia patients, the CD3, CD4, CD4+/CD8+, CD16+/CD56+were significantly lower than normal people, while CD8+, CD19+were significantly higher (P<0.05). Expression of antihelion of cell CD33, CD38and Cyt-MPO were high, respectively accounting for 72.5%, 70.4% and 67.5%, and followed by CD15, CD64, which accounting for 38% and 32.5% respectively. High expressions of CD33, CD64and Cyt-MPO all showed positive correlations (P<0.05), but was not related with expression of CD15(P>0.05).ConclusionFlow cytometric analysis of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with acute myeloid leukemia can provide a clear understanding of the change of lymphocyte subsets.

flow cytometry; acute myeloid leukemia; peripheral blood lymphocyte subsets

R 733.71

A

1672-2353(2017)21-036-03

10.7619/jcmp.201721010

2017-06-05