胡燁超 陳方芳 荀運浩

IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與原發(fā)性肝癌發(fā)病風險相關性的Meta分析

胡燁超 陳方芳 荀運浩

目的 系統(tǒng)評價IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與原發(fā)性肝癌(HCC)發(fā)病風險的相關性。方法 計算機檢索 PubMed、Web of Science、The Cochrane Library（2016 年 7 期）、CNKI、WanFang Data、VIP 和 CBM數(shù)據(jù)庫，搜集有關 IL-18 基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的病例對照研究，檢索時限均為建庫至2016年8月。2位研究者獨立篩選文獻、提取資料和評價納入研究的偏倚風險后，采用Stata 12.0軟件進行Meta分析。結(jié)果 最終納入7個病例對照研究，包括HCC患者1 021例和對照者1 696例。Meta分析結(jié)果顯示IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險均無相關性，其中A vs C （OR=1.05，95%CI：0.87～1.27，P=0.63）；AA+CAvs CC（OR=1.06，95%CI：0.88～1.27，P=0.56）；AA vs CA+CC （OR=1.05，95%CI：0.73～1.51，P=0.79）；AA vs CC （OR=1.19，95%CI：0.77～1.84，P=0.44）；CA vs CC （OR=1.05，95%CI：0.87～1.28，P=0.60）；AA+CC vs CA（OR=0.95，95%CI：0.81～1.11，P=0.50）。按照人種、基礎疾病和對照來源進行亞組分析，IL-18 基因啟動子 -607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險均無相關性（均P＞0.05）。結(jié)論 現(xiàn)有證據(jù)尚不支持IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關；受納入研究的數(shù)量和質(zhì)量限制，這一結(jié)論仍需更多大樣本、高質(zhì)量研究進一步驗證。

原發(fā)性肝癌 IL-18 位點多態(tài)性 易感性 Meta分析 病例對照研究

原發(fā)性肝癌，習慣稱為肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC），是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率高，遠期預后欠佳。據(jù)全球數(shù)據(jù)顯示，HCC是男性癌癥相關死亡的第2大死因，是女性癌癥相關死亡的第6大死因，嚴重威脅人類健康[1-2]。然而目前尚缺乏對HCC的高效預防措施或預測指標，盡管與HCC發(fā)生相關的某些危險因素已經(jīng)明確，如乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）慢性感染等，但不同個體，慢性HBV感染的臨床結(jié)局不同，提示個體遺傳因素和免疫學差異影響著該疾病的發(fā)展[3-4]。

IL-18是一種強烈的促炎性細胞因子，在巨噬細胞、樹突狀細胞等中均有表達。研究表明IL-18不僅在固有免疫應答中發(fā)揮作用，同時能夠促進可能有助于清除體內(nèi)HBV的Th1型免疫應答[5-8]。編碼人類IL-18的基因位于第11號染色體，其表達量受上游啟動子區(qū)域基因的調(diào)控，Giedraitis等[9]的研究發(fā)現(xiàn)當基因啟動子-607C/A位點發(fā)生C→A突變時，該基因的轉(zhuǎn)錄活性降低，使IL-18的表達量減少，進而影響一些疾病的發(fā)生、發(fā)展[10-13]。

雖然目前國內(nèi)外對IL-18基因啟動子-607C/A位點已有多個研究，但有關HCC的研究較少，且單個研究納入的樣本量較小，得出的結(jié)論存在分歧。因此，本研究希望通過Meta分析方法評價IL-18基因啟動子-607C/A多態(tài)性與HCC發(fā)病風險之間的聯(lián)系。

1 資料和方法

1.1 納入與排除標準

1.1.1 納入標準 （1）研究類型：病例對照研究。（2）研究對象：經(jīng)臨床明確診斷為HCC的患者。（3）暴露因素：IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性。（4）結(jié)局指標：HCC的發(fā)病風險。

1.1.2 排除標準 （1）重復文獻；（2）綜述、摘要、會議論文及 Meta分析；（3）非中、英文文獻；（4）未提供充分原始數(shù)據(jù)或無法獲取數(shù)據(jù)的文獻。

1.2 檢索策略 計算機檢索PubMed、Web of Science、The Cochrane Library（2016 年 7 期）、CNKI、WanFang Data、VIP和CBM數(shù)據(jù)庫，搜集IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC相關性的病例對照研究。檢索時間均為從建庫至2016年8月。檢索采用多個自由詞相結(jié)合的方式，并根據(jù)具體數(shù)據(jù)庫調(diào)整檢索策略。同時，追溯納入研究的參考文獻，以補充獲取相關文獻。中文檢索詞包括：肝癌、肝細胞癌、IL-18、白細胞介素18、白介素18、多態(tài)性、變異、突變；英文檢索詞包括：hepatocellular carcinoma、liver cancer、HCC、IL-18、interleukin-18、polymorphism、polymorphisms、variant、variants、mutation、mutations。以PubMed為例，其具體檢索策略見表1。

1.3 文獻篩選、資料提取與納入研究的偏倚風險評價由2位研究者獨立進行文獻篩選、資料提取和納入研究的偏倚風險評價，如遇分歧，則通過討論達成一致。采用自制的資料提取表提取資料，提取內(nèi)容主要包括：（1）納入研究的基本信息，包括第一作者、發(fā)表年份、人種、基因型檢測方法；（2）研究對象來源、基礎疾病情況、病例組和對照組基因型頻數(shù)；（3）偏倚風險評價的關鍵要素。納入研究的偏倚風險采用Newcastle-Ottawa scale（NOS）文獻質(zhì)量評價量表進行評價，滿分9分，評分≥7分為高質(zhì)量研究[14]。

表1 PubMed檢索策略

1.4 統(tǒng)計學處理 采用Stata 12.0統(tǒng)計軟件。首先對納入研究對照組基因型分布是否符合哈迪-溫伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium,HWE）進行檢測。采用OR值及其95%CI為效應指標，分別計算6種遺傳模型（A vs C、AA+CA vs CC、AA vs CA+CC、AA vs CC、CA vs CC、AA+CC vs CA）下的合并效應值，Meta分析的檢驗水準設為α=0.05。在合并分析前，采用χ2檢驗對納入研究結(jié)果間的異質(zhì)性進行檢驗（檢驗水準為α=0.10），同時結(jié)合I2定量判斷異質(zhì)性的大小。若各研究結(jié)果間無統(tǒng)計學異質(zhì)性，采用固定效應模型進行合并分析；若各研究結(jié)果間有統(tǒng)計學異質(zhì)性，則采用隨機效應模型進行合并分析。根據(jù)種族、基礎疾病、對照組來源等進行亞組分析。通過逐一剔除單個研究進行敏感性分析。采用Begg’s檢驗和Egger’s檢驗評價納入研究的發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 文獻檢索結(jié)果 初檢共獲得相關文獻136篇，經(jīng)逐層篩選后，最終納入7個病例對照研究[15-21]，共1 021例HCC患者和1 696例對照。文獻篩選流程及結(jié)果見圖1。

2.2 納入研究的基本特征與偏倚風險評價 納入的7項研究中，中文文獻2篇，英文文獻5篇；其中5項針對亞洲人進行，另2項則分別在美洲人[17]和高加索人[19]中進行。7篇文獻均準確說明了基因檢測方法及對照組來源。當中除1篇[17]外，其余均符合HWE。納入研究的基本特征與偏倚風險評價結(jié)果見表2。

2.3 Meta分析結(jié)果

2.3.1 等位基因（A vs C） 共納入1 021例HCC患者和1 696例對照，隨機效應模型Meta分析結(jié)果顯示，該多態(tài)性與HCC發(fā)病風險無相關性（OR=1.05，95%CI：0.87～1.27，P=0.63），見圖 2。

圖1 文獻篩選流程及結(jié)果

2.3.2 顯性模型（AA+CA vs CC） 共納入1 021例HCC患者和1 696例對照，固定效應模型Meta分析結(jié)果顯示，該多態(tài)性與HCC發(fā)病風險無相關性（OR=1.06，95%CI：0.88～1.27，P=0.56），見圖 3。

2.3.3 隱性模型（AA vs CA+CC） 共納入1 021例HCC患者和1 696例對照，隨機效應模型Meta分析結(jié)果顯示，該多態(tài)性與HCC發(fā)病風險無相關性（OR=1.05，95%CI：0.73～1.51，P=0.79），見圖 4。

2.3.4 共顯性模型1（AA vs CC） 共納入498例HCC患者和843例對照，隨機效應模型Meta分析結(jié)果顯示，該多態(tài)性與HCC發(fā)病風險無相關性（OR=1.19，95%CI：0.77～1.84，P=0.44），見圖 5。

2.3.5 共顯性模型2（CA vs CC） 共納入779例HCC患者和1 267例對照，固定效應模型Meta分析結(jié)果顯示，該多態(tài)性與HCC發(fā)病風險無相關性（OR=1.05，95%CI：0.87～1.28，P=0.60），見圖 6。

2.3.6 超顯性模型（AA+CC vs CA） 共納入1 021例HCC患者和1 696例對照，固定效應模型Meta分析結(jié)果顯示，該多態(tài)性與HCC發(fā)病風險無相關性（OR=0.95，95%CI：0.81～1.11，P=0.50），見圖 7。

2.4 亞組分析 Meta分析結(jié)果顯示，有3個基因模型（A vs C、AA vs CA+CC、AA vs CC）存在異質(zhì)性，為探討異質(zhì)性來源，對該3個模型進行基于人種的亞組分析，結(jié)果提示，在亞洲人群中，IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC的發(fā)病風險無相關性。按照基礎疾病和對照來源進行亞組分析，結(jié)果顯示差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），見表3。

2.5 敏感性分析 逐一剔除單個研究，對剩余研究重新進行Meta分析，結(jié)果顯示各遺傳模型合并效應量均未發(fā)生明顯變化，提示本研究結(jié)果穩(wěn)定。

表2 納入研究的基本特征和偏倚風險評價

2.6 發(fā)表偏倚 Begg’s檢驗和Egger’s檢驗結(jié)果顯示，除CA vs CC模型存在發(fā)表偏倚（Begg’s檢驗：P=0.02，Egger’s檢驗：P=0.03）外（圖 8），其余各模型均未見明顯的發(fā)表偏倚。

圖2 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的Meta分析（A vs C）

圖3 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的Meta分析（AA+CA vs CC）

圖4 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的Meta分析（AA vs CA+CC）

圖5 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的Meta分析（AA vs CC）

圖6 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的Meta分析（CA vs CC）

圖7 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的Meta分析（AA+CC vs CA）

3 討論

本研究采用Meta分析方法，對IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險的相關性進行評價，結(jié)果顯示6個遺傳模型均與HCC發(fā)病風險無相關性。本研究結(jié)果與Zhu等[22]的Meta分析結(jié)果相似，該研究的納入文獻與本研究所納入文獻一致，并且同樣得出了陰性結(jié)果，從而進一步佐證了本研究結(jié)果的可靠性與真實性。而本研究的優(yōu)勢在于，在數(shù)據(jù)處理分析過程中，額外采用了超顯性模型（AA+CC vs CA）以更加全面地評估IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險的相關性，其結(jié)果仍為陰性。值得注意的是，本研究有3個基因模型存在顯著異質(zhì)性，其主要來源可能是納入研究的人群種族、基因型檢測方法、對照組來源和基礎疾病不同等。筆者也觀察到本Meta分析的納入研究中有1項研究[17]對照組不符合HWE，并且，發(fā)表偏倚顯示在CA vs CC模型中存在發(fā)表偏倚?？紤]到以上因素，對于本研究結(jié)果需謹慎解讀。

表3 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的亞組分析

圖8 IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險相關性的Begg's漏斗圖（CA vs CC）

目前已有的關于IL-18基因啟動子-607C/A位點的研究主要集中于CHB尚未發(fā)展為HCC階段。Hirankarn等[23]的研究表明，在泰國人群中，IL-18基因啟動子-607位點A/A基因型與慢性HBV感染相關。國內(nèi)的1項研究顯示，IL-18基因啟動子-607A/A基因型及A等位基因可能是CHB的危險因素[24]。Motavaf等[25]的研究也得出了相似的結(jié)果。由于慢性HBV感染是HCC發(fā)病的重要危險因素，IL-18基因多態(tài)性或許能夠通過影響CHB，進一步影響HCC發(fā)病風險，為探討IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HBV相關HCC的相關性，筆者根據(jù)基礎疾病進行亞組分析，結(jié)果顯示，6個基因模型均未發(fā)現(xiàn)IL-18基因啟動子-607 C/A位點多態(tài)性與HBV相關HCC發(fā)病風險存在相關性。并且Teixeira等[17]、Lau等[20]2項研究是隱性模型和共顯性模型1異質(zhì)性的主要來源。這可能與該2項研究納入人群種族不同和復雜的基礎疾病狀況有關。按人種進行的亞組分析表明，IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與亞洲人群的發(fā)病風險無相關性。需要注意，由于本研究納入的關于美洲人群[17]及高加索人群[19]的研究均僅有1項，筆者未進一步對該兩個亞組進行分析，因此，將來的研究可進一步討論該多態(tài)性與特定人群HCC發(fā)病風險的相關性。

本研究的局限性：（1）納入研究數(shù)量較少，樣本量偏小，并且只納入了公開發(fā)表的中英文文獻，可能存在發(fā)表偏倚；（2）納入研究均為病例對照研究，各研究間存在較大異質(zhì)性，缺乏高質(zhì)量臨床研究證據(jù)的支持；（3）HCC的病因可能是多方面的，與遺傳、環(huán)境等因素相關，本研究并未對多個因素如基因-基因、基因-環(huán)境的交互作用進行分析；（4）納入研究多針對亞洲人群，使本研究結(jié)論的外推性受到一定的限制。

綜上所述，基于現(xiàn)有證據(jù)的Meta分析表明，尚不能認為IL-18基因啟動子-607C/A位點多態(tài)性與HCC發(fā)病風險具有相關性。受納入研究數(shù)量和質(zhì)量的限制，本研究結(jié)論尚需開展更多高質(zhì)量的研究進行驗證。

[1] Torre L A,Bray F,Siegel R L,et al.Global cancer statistics,2012[J].CA:a cancer journalfor clinicians,2015,65(2):87-108.

[2] Chen W,Zheng R,Baade P D,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA:a cancer journalfor clinicians,2016,66(2):115-132.

[3] Dragani T A.Risk of HCC:genetic heterogeneity and complex genetics[J].J Hepatol,2010,52(2):252-257.doi:10.1016/j.jhep.2009.11.015.

[4] El-Serag H B.Epidemiology of viral hepatitis and hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterology,2012,142(6):1264-1273.e1.doi:10.1053/j.gastro.2011.12.061.

[5] Tuncbilek S.Relationship between cytokine gene polymorphisms and chronic hepatitis B virus infection[J].World J Gastroenterol,2014,20(20):6226-6235.doi:10.3748/wjg.v20.i20.6226.

[6] Lu Y,Bao J G,Deng Y,et al.Role of IL-18 gene promoter polymorphisms,serum IL-18 levels,and risk of hepatitis B virus-related liver disease in the Guangxi Zhuang population:a retrospective case-control study[J].Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2015,16(14):6019-6026.

[7]WawrockiS,Druszczynska M,Kowalewicz-Kulbat M,et al.Interleukin 18(IL-18)as a target for immune intervention[J].Acta Biochimica Polonica,2016,63(1):59-63.doi:10.18388/abp.2015_1153.

[8] 劉駿,盛吉芳.慢性乙型肝炎患者血清Th1/Th2型細胞因子水平研究[J].國際流行病學傳染病學雜志,2006,33(1):15-18.

[9] Giedraitis V,He B,Huang W X,et al.Cloning and mutation analysis of the human IL-18 promoter:a possible role of polymorphisms in expression regulation[J].J Neuroimmunol,2001,112(1-2):146-152.

[10] Wang H,Shi S,Yan W,et al.Ischemic stroke susceptibility gene in a Northern Han Chinese population[J].Neural Regen Res,2013,8(20):1881-1891.doi:10.3969/j.issn.1673-5374.2013.20.007.

[11] Tavares N A C,Santos M M S,Moura R,et al.Interleukin 18(IL18)gene promoter polymorphisms are associated with type 1 diabetes mellitus in Brazilian patients[J].Cytokine,2013,62(2):286-289.doi:10.1016/j.cyto.2013.03.004.

[12] Gao S J,Zhang L,Lu W,et al.Interleukin-18 genetic polymorphisms contribute differentially to the susceptibility to Crohn's disease[J].World J Gastroenterol,2015,21(28):8711-8722.doi:10.3748/wjg.v21.i28.8711.

[13] Li X,Ren D,Li Y,et al.Increased cancer risk associated with the-607C/A polymorphism in interleukin-18 gene promoter:an updated meta-analysis including 12,502 subjects[J].J BUON,2015,20(3):902-917.

[14] George W,Beverley J S,O'Connell J.The Newcastle-Ottawa Scale(NOS)for assessing the quality of nonrandomised studies in meta-analyses[EB/OL].http://www.ohri.ca/programs/clinical_epidemiology/oxford.asp.

[15] Migita K,Sawakami-KobayashiK,Maeda Y,et al.Interleukin-18promoter polymorphisms and the disease progression of Hepatitis B virus-related liver disease[J].Transl Res,2009,153(2):91-96.doi:10.1016/j.trsl.2008.11.008.

[16] 陳謙,廖維甲,何松青,等.Interleukin-18基因啟動子區(qū)單核苷酸多態(tài)性與肝細胞癌遺傳易感性關系的研究[J].免疫學雜志,2012,12:1051-1055.

[17] Teixeira AC,Mendes C TJr,Marano LA,et al.Alleles and genotypes of polymorphisms of IL-18,TNF-alpha and IFN-gamma are associated with a higher risk and severity of hepatocellular carcinoma(HCC)in Brazil[J].Hum Immunol,2013,74(8):1024-1029.doi:10.1016/j.humimm.2013.04.029.

[18] Bao J,Lu Y,Deng Y,et al.Association between IL-18 polymorphisms,serum levels,and HBV-related hepatocellular carcinoma in a Chinese population:a retrospective case-control study[J].Cancer Cell Int,2015,15:72.doi:10.1186/s12935-015-0223-z.

[19] Karra V K,Gumma P K,Chowdhury S J,et al.IL-18 polymorphisms in hepatitis B virus related liver disease[J].Cytokine,2015,73(2):277-282.doi:10.1016/j.cyto.2015.02.015.

[20] Lau H K,Hsieh M J,Yang S F,et al.Association between Interleukin-18 Polymorphisms and Hepatocellular Carcinoma Occurrence and ClinicalProgression[J].Int J Med Sci,2016,13(7):556-561.doi:10.7150/ijms.15853.

[21] 張清秀,姚云清,李始亮,等.白細胞介素18基因多態(tài)性與HBV所致肝細胞肝癌的相關性[J].中華肝臟病雜志,2016,24(5):352-357.doi:10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2016.05.008.

[22] Zhu S L,Zhao Y,Hu X Y,et al.Genetic polymorphisms-137(rs187238)and-607(rs1946518)in the interleukin-18 promoter may not be associated with development of hepatocellular carcinoma[J].SciRep,2016,6:39404.doi:10.1038/srep39404.

[23] Hirankarn N,Manonom C,Tangkijvanich P,et al.Association of interleukin-18 gene polymorphism (-607A/A genotype)with susceptibility to chronic hepatitis B virus infection[J].Tissue Antigens,2007,70(2):160-163.doi:10.1111/j.1399-0039.2007.00865.x.

[24] Li N,Gao YF,Zhang T C,et al.Relationship between interleukin 18 polymorphisms and susceptibility to chronic hepatitis B virus infection[J].World J Hepatol,2012,4(3):105-109.doi:10.4254/wjh.v4.i3.105.

[25] Motavaf M,Safari S,Alavian S M.Interleukin 18 gene promoter polymorphisms and susceptibility to chronic hepatitis B infection:a review study[J].Hepat Mon,2014,14(7):e19879.doi:10.5812/hepatmon.19879.

Association between IL-18 gene promoter-607C/A polymorphism and risk of hepatocellular carcinoma：a meta-analysis

HU Yechao,CHEN Fangfang,XUN Yunhao.
Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,China

Objective To assess the association between IL-18 gene promoter-607C/A polymorphism and the risk of hepatocellular carcinoma(HCC). Methods Electronic databases PubMed,Web of Science,The Cochrane Library (Issue 7,2016),CNKI,WanFang Data,VIP and CBM from inception to August 2016 were searched for case-control studies on the association between IL-18 gene promoter-607C/A polymorphism and the risk of HCC.Two reviewers independently screened literatures,extracted data and assessed the risk of biases of included studies.Meta-analysis was performed using Stata 12.0 software. Results Seven case-control studies involving 1 021 HCC cases and 1 696 controls were included.The results of meta-analysis showed that there was no significant association between IL-18 single-nucleotide polymorphism and the risk of HCC(A vs C,OR=1.05,95%CI:0.87-1.27,P=0.63,AA+CA vs CC,OR=1.06,95%CI:0.88-1.27,P=0.56,AA vs CA+CC,OR=1.05,95%CI:0.73-1.51,P=0.79,AA vs CC,OR=1.19,95%CI:0.77-1.84,P=0.44,CA vs CC,OR=1.05,95%CI:0.87-1.28,P=0.60,AA+CC vs CA:OR=0.95,95%CI:0.81-1.11,P=0.50).According to subgroup-analysis by ethnicity,underlying disease and control source,no significant association was found between IL-18 gene promoter-607C/A polymorphism and the risk of HCC as well. Conclusion On the basis of current evidence,the-607C/A polymorphism in IL-18 gene promoter is not associated with the risk of HCC.Due to the limited quantity and quality of included data,more large-scale,high-quality studies are needed to verify the above conclusion.

Hepatocellular carcinoma IL-18 Polymorphism genetic Disease susceptibility Meta-analysis Casecontrolstudies

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.21.2017-1088

杭州市科技發(fā)展計劃資助項目（20140733Q40）

310053 杭州，浙江中醫(yī)藥大學（胡燁超、陳方芳）；浙江中醫(yī)藥大學附屬杭州西溪醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科（荀運浩）

荀運浩，E-mail：xuxuxun0924@aliyun.com

2017-05-11）

陳麗）