王慧敏 戈改真 賀麗瓊

內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭 014010

幽門螺桿菌感染對慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道炎癥因子的影響

王慧敏 戈改真 賀麗瓊

內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭 014010

目的 觀察Hp感染對COPD大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥水平的影響。 方法 選取健康雄性大鼠40只，隨機(jī)分為對照組和COPD組，每組各20只。COPD組使用香煙造模并檢測是否成功。隨后分別隨機(jī)選取每組50%的大鼠制造Hp感染模型，并檢測感染是否成功。最后行支氣管肺泡灌洗液，檢測IL-6﹑IL-8﹑TNF-α﹑中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（%）。使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果 感染Hp的COPD組大鼠支氣管肺泡灌洗液中的IL-6﹑IL-8﹑TNF–α及中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（%）均較Hp陰性的大鼠明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。而對照組大鼠Hp感染與否對支氣管肺泡灌洗液中上述炎癥細(xì)胞及炎癥因子的影響較小，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論 Hp和COPD 有著密切聯(lián)系，Hp的感染可以加重COPD的炎癥反應(yīng)，Hp感染在COPD發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要的協(xié)同作用，有可能會誘發(fā)COPD的急性加重，是COPD 的危險因素之一。

幽門螺桿菌；慢性阻塞性肺疾?。谎装Y因子

幽門螺桿菌（Hp）不僅在消化系統(tǒng)疾病中有著十分重要的作用，而且近年來國外發(fā)現(xiàn)Hp與許多呼吸系統(tǒng)疾病有所關(guān)聯(lián)[1-10]，尤其是與慢性阻塞性肺疾?。–OPD）關(guān)系密切[11-15]。國外已有相關(guān)文獻(xiàn)報道，Ali Tabaru等[16]的研究表明，Hp感染的存在會影響COPD患者肺功能。Mitra Samareh Fekri[17]等的研究表明Hp感染的存在可能會使病人易患COPD或?qū)е翪OPD惡化。但是國內(nèi)尚缺乏相關(guān)研究。本研究旨在發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染對COPD大鼠支氣管肺泡炎癥水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

大鼠TNF-α ELISA﹑IL-6 ELISA﹑IL-7 ELISA試劑盒（武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司）；將軍牌香煙（每支的焦油含量為15mg﹑煙氣煙堿含量為1.2mg，山東中煙工業(yè)公司）；脂多糖（LPS，美國Sigma公司）；80cm×60cm×50cm大小的有機(jī)玻璃熏箱（自制）；Hp菌種（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院微生物室提供）；5%NaHCO3（華北制藥河北華民藥業(yè)有限責(zé)任公司）；小型動物肺功能儀（北京拜安吉科技有限公司生產(chǎn)，F(xiàn)inePointe RC系統(tǒng)）；顯微鏡（EASTCOLIGHT 9007-1）

表2 幽門螺桿菌對COPD大鼠氣道炎癥因子的影響

表3 幽門螺桿菌對正常大鼠氣道炎癥因子的影響

1.2 COPD大鼠模型的建立

選取健康雄性C57BL/6大鼠40只，4～6周，體質(zhì)量（56.0±1.6）g，隨機(jī)分為COPD組﹑對照組，每組20只大鼠。COPD組分別于第1﹑14天氣管內(nèi)注入LPS 200μg，第2～40天（第14天除外）將大鼠置熏箱內(nèi)被動吸煙，每日熏煙2次，每次10支香煙，時間持續(xù)1h，兩次熏煙間隔時間4h[18-20]。最后使用小型動物肺功能儀檢測是否造模成功。

1.3 幽門螺桿菌的感染模型

按照文獻(xiàn)[21]接種HP。具體步驟如下：禁食12h后，隨機(jī)抽取COPD組大鼠10只﹑對照組大鼠10只。均首先灌飼0.5mL NaHCO3，12h后分別接種制備好的HP標(biāo)準(zhǔn)菌液0.5mL（1×109CUF/mL），連續(xù)4次，每次間隔48h。于末次接種后第4﹑8 及12周時，禁食12h分別處死大鼠并檢驗是否感染成功。

1.4 大鼠支氣管肺泡灌洗液

IL-6﹑IL-8﹑TNF-α﹑中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（%）的檢測分別使用ELISA試劑盒，具體操作見試劑盒說明。中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)使用顯微鏡計數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS13.0版對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常大鼠與COPD大鼠氣道炎癥因子的水平

Hp感染前兩組大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子測定結(jié)果，見表1。COPD組大鼠氣道炎癥水平明顯升高。

表1 正常大鼠與COPD大鼠氣道炎癥因子的水平

2.2 幽門螺桿菌對COPD大鼠氣道炎癥因子的影響

感染Hp的COPD組大鼠與未感染Hp的COPD組大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子測定結(jié)果，見表2。結(jié)果顯示感染Hp的COPD大鼠氣道炎癥水平進(jìn)一步升高。

2.3 幽門螺桿菌對正常大鼠氣道炎癥因子的影響

感染Hp的對照組組大鼠與未感染Hp的對照組組大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子測定結(jié)果，見表3。結(jié)果顯示感染Hp的對照組大鼠氣道炎癥水平未見明顯升高。

結(jié)果表明，Hp感染可以使COPD大鼠支氣管肺泡灌洗液炎癥因子及炎癥水平顯著增高。而Hp感染對于對照組大鼠的影響相對較小。

3 討論

COPD的主要的病理生理基礎(chǔ)是慢性氣道炎癥反應(yīng)，其管腔內(nèi)主要是中性粒細(xì)胞﹑嗜酸性粒細(xì)胞﹑巨噬細(xì)胞等的聚集，IL-8（白細(xì)胞介素8）及IL-6（白細(xì)胞介素6）是炎癥的主要趨化因子，對炎癥反應(yīng)有著重要的調(diào)節(jié)作用[22]。它們的升高可能通過趨化﹑激活中性粒細(xì)胞，促使中性粒細(xì)胞遷移至炎癥部位，并釋放過氧化物和多種酶，造成氣道損[21]。TNF-α（腫瘤壞死因子α）為一種重要的中性粒細(xì)胞趨化因子，由巨噬細(xì)胞﹑淋巴細(xì)胞﹑肺泡上皮細(xì)胞等釋放，能激活中性粒細(xì)胞﹑巨噬細(xì)胞﹑淋巴細(xì)胞等促進(jìn)炎癥顆粒釋放﹑炎癥細(xì)胞的合成及釋放。TNF-α通過刺激壞死因子-KB（NF-KB）DNA的結(jié)合活性，誘導(dǎo)患者氣道平滑肌細(xì)胞IL-6釋放。本研究結(jié)果提示，Hp感染的COPD組大鼠上述炎癥細(xì)胞及炎癥因子水平均明顯升高，提示Hp和COPD有著密切聯(lián)系，Hp的感染可以加重COPD的氣道炎癥反應(yīng)，Hp感染在COPD發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要的協(xié)同作用，Hp感染有可能會誘發(fā)COPD大鼠的氣道炎癥加重，從而發(fā)生臨床可見的COPD的急性加重，是COPD 的危險因素之一[23]，這對于臨床具有重大的指導(dǎo)意義。對于臨床醫(yī)生而言，如果COPD患者檢測Hp呈陽性結(jié)果的話，建議行根除Hp治療，這樣有可能降低患者的氣道炎癥，從而減少未來的急性加重風(fēng)險，這是COPD患者治療目標(biāo)當(dāng)中的重要方面，這可以提高患者的生活質(zhì)量，降低死亡率。從而降低社會和家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

[1] Mehmet Kanbay，Gurden Gur，Sule Akcay，et al.Helicobacter pylori seroprevalence in patients with chronic bronchitis[J].Respiratory Medicine，2005，99，1213-1216.

[2] Roshan SIVA，Surinder S，Birrin et al.Peptic ulceration，Helicobacter pylori seropositivity and chronic obstructive pulmonary disease[J].Respirology，2013，18，728-731.

[3] Lijie Wang，Yan Guan，Yan Li，et al.Association Between Chronic Respiratory Diseases and Helicobacter pylori：A Meta-Analysis[J].Arch Bronconeumol，2015，51（6）：273-278.

[4] Kodama M，Kitadai Y，Ito M，et a1.Immune response to Ca-gA protein Is associated with improved platelet count after Helieobaeter pylori Eradieation in patients with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Helieobacter，2007，12（1）：36-42.

[5] Rocha M，AVenaud P，Menard A，et a1.Association of Helicobacter species with hepatitis c cirrhosis with of without Hepatocellular careinoma[J].Gut，2005，54（3）：396-401.

[6] 陳星海，王育珊，王江濱.急性冠脈綜合征患者幽門螺桿菌感染狀況調(diào)查及其致病危險性分析[J].中國急救醫(yī)學(xué)，2007，27（5）：385-388.

[7] Figura N，Palazzuoli A，F(xiàn)aglia S，et a1.Infection by cagA positive Helicobaeter pylori strains in patients with ischemic heartdisease[J].Dig Dis Sci，2002，47（4）：831-836.

[8] Rebora A，Drago F，Piccioto A.Helicobacter pylori in patients with rosacea[J].Am J Gastroenterol，1994，89（9）：1603-1604.

[9] 季尚瑋，王江濱，張永貴.慢性乙型肝炎病毒感染患者血清及肝組織中抗幽門螺桿菌抗體及特異性基因分析 [J].中華消化雜志，2009，29（8）：505-509.

[10] Gasbarrini A，F(xiàn)rancesehi F，Armuzzi A，et a1.Extradigestive Manifestations of Helieobaeter pylori gastric infection[J].Gut，1999，45（Suppl 1）：9-12.

[11] Anastasios Roussos，Nikiforos Philippou，Vasiliki Krietsepi，et al.Helicobacter pylori seroprevalence in patients with chronic obstructive pulmonary disease[J].Respiratory Medicine，2005，99，279-284.

[12] 譚小玉，黎雨，陳俊健.慢性阻塞性肺疾病患者幽門螺桿菌感染狀況及其對肺功能的影響[J].內(nèi)科，2014，9（3）：296-297.

[13] 劉軍，易群.幽門螺桿菌感染與慢性阻塞性肺疾病關(guān)系的meta分析[J].臨床肺科雜志，2014，19（1）：1-4.

[14] 胡杰英.幽門螺桿菌感染與慢性阻塞性肺疾病的關(guān)系 [J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，31（3）：313-314.

[15] 王靜，王江濱，李立.慢性阻塞性肺病患者幽門螺桿菌感染狀況及其致病危險性分析[J].中國老年學(xué)雜志，2010，30（5）：607-608.

[16] Ali Tabaru，Metin Gorguner，Metin Akgun et al.Helicobacter Pylori Infections in Chronic Obstructive Pulmonary Disease[J].EAJM，2012；44：144-8.

[17] Mitra Samareh Fekri；Seyed Mehdi Hashemi Bajgani；Atefe Rasti，et al.Detection of Helicobacter Pylori in Bronchoalveolar Lavage of Patients With Chronic Obstructive Pulmonary Disease by Real Time Polymerase Chain Reaction[J].Jundishapur J Microbiol，2015，8（1）：45-51.

[18] 李征途，徐小明，鞏雪芳，等.應(yīng)用熏煙聯(lián)合脂多糖方法建立慢性阻塞性肺疾病相關(guān)肺動脈高壓小鼠模型 [J].國際呼吸雜志，2014，34（1）：27-30.

[19] 袁永豐，曾亮.復(fù)方薤白膠囊對慢性阻塞性肺疾病大鼠模型氣道重塑作用的研究[J].中國中醫(yī)急癥，2015，24（5）：967-968.

[20] 李紅梅，崔德健，佟欣，等.熏香煙加氣管注內(nèi)毒素和單純熏香煙法建立大鼠COPD模型[J].中國病理生理雜志，2002，18（7）：808-812.

[21] Smythies LE，Chen JA，Lindsey JR，et al.Quantitative analysis of Helicobacter pylori infection in a mouse model[J].J Immuno Meth，2000，242：67-78 .

[22] Anastasios Roussos，Nikiforos Philippou，Vasiliki Krietsepi，et a1.Helicobacter pylori seroprevalence in patients with chronic obstructive pulmofmry disease[J].Respiratory Medicine，2005，99：279-284.

[23] 潘君素，管敏昌，梁軍兵，等.慢性阻塞性肺病患者肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)和細(xì)胞因子IL-8變化[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2013，23（16）：3201-3203.

Effect of Helicobacter pylori infection on airway inflammatory factors in rats with chronic obstructive pulmonary disease

WANG Huimin GE Gaizhen HE Liqiong
The First Affiliated Hospital of Baotou Medical College of Inner Mongolia University of Science & Techology,Baotou 014010,China

Objective To observe the effect of Hp infection on the level of inflammation in bronchoalveolar lavage fluid of COPD rats. Methods A total of 40 healthy male rats were randomly divided into control group and COPD group,with 20 rats in each group.The rats in Group COPD was modeled with cigarette smoke and tested if they were successful,and then 50% rats in each group were randomly selected to make Hp infection model.Finally,bronchoalveolar lavage fluid was used to detect IL-6,IL-8,TNF-alpha,neutrophil percentage(%).SPSS13.0 statistical software was used for data analysis,and P＜0.05 was statistically significant. Results The levels of IL-6，IL-8，TNF-alphaand neutrophil percentage(%) in bronchoalveolar lavage fluid of group COPD infected with Hp were significantly higher than those of Hp negative rats,and the difference was statistically significant.The rats in control group Hp infection has little effect on bronchoalveolar lavage fluid in the inflammatory cells and inflammatory factors,there was no significant difference between. Conclusion Hp and COPD are closely related,and Hp infection can aggravate the inflammatory response of COPD,and it plays an important synergistic role in the pathogenesis of COPD,which may induce acute exacerbation of COPD,and is one of the risk factors of COPD.

Helicobacter pylori; Chronic obstructive pulmonary disease; Inflammatory factors

R563.9

A < class="emphasis_bold"> [文章編號]]

] 2095-0616（2017）21-31-03

2017-08-07）