王林潔

【摘要】 目的：分析高效液相色譜法對檢測地中海貧血及異常血紅蛋白的檢測價值。方法：選取筆者所在醫(yī)院2013年11月-2016年11月3452例在門診問診患者進(jìn)行地中海貧血基因檢查，運用高效液相色譜法都患者的血紅蛋白組分進(jìn)行分析。根據(jù)地中海貧血基因檢測結(jié)果將3452例患者分為α地貧、β地貧、αβ復(fù)合型地貧三組。分析血紅蛋白檢查聯(lián)合高效液相色譜法對地中海貧血及異常血紅蛋白檢測的靈敏度及診斷精度。結(jié)果：3452例受檢患者經(jīng)高效液相色譜法對α型地貧檢測靈敏度為28.08%（214/762），確診率為28.08%（214/762），對β地貧檢測靈敏度為98.98%（389/393），確診率為98.98%（389/393）；對αβ復(fù)合型地貧檢測靈敏度及確診率均為100%（20/20）。結(jié)論：采用高效液相色譜法都對β-型地中海貧血患者進(jìn)行篩查診斷精度較高，高效液相色譜法對發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白也要重要的臨床價值。

【關(guān)鍵詞】 地中海貧血； β型； 異常血紅蛋白； 高效液相色譜法； 檢測精度

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.19.033 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）19-0067-02

地中海貧血也叫海洋性貧血，是一種遺傳性貧血疾病[1]。地中海貧血的原因是因為身體無法制造出人體正常需要的血紅蛋白，所以患有地中海貧血的患者會時常出現(xiàn)頭暈、易怒、乏力、白色青白、睡眠不佳的臨床癥狀[2]。地中海貧血已經(jīng)嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量。據(jù)數(shù)據(jù)顯示全球攜帶地中海貧血基因的患者已經(jīng)高達(dá)1.49億[3]。由于地中海貧血是一種遺傳性貧血疾病，基因檢測也是確診地中海貧血的最有效方式，但因為基因檢測費用較高，不適合大面積會對地中海貧血進(jìn)行篩查，本文主要研究高效液相色譜法對檢測β-地中海貧血及異常血紅蛋白的檢測精度及臨床價值。為保證本次研究的順利完成，特將筆者所在醫(yī)院2013年11月-2016年11月3452例在門診問診患者進(jìn)行地中海貧血基因檢查，詳細(xì)情況如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年11月-2016年11月在筆者所在醫(yī)院門診問診的3452例患者，對其進(jìn)行地中海貧血篩查，患者年齡5～48歲，平均（27.3±3.6）歲，取患者靜脈血2 ml并進(jìn)行抗凝。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者均同意篩查地中海貧血，并簽署知情協(xié)議書；（2）均同意醫(yī)護(hù)人員對其進(jìn)行檢查結(jié)果的調(diào)研與觀察；（3）無焦慮或精神疾病。

1.2 方法

抽取各組受檢者靜脈血液2 ml，并使用乙二胺四乙酸（EDTA，江西長青醫(yī)藥科技有限公司）進(jìn)行抗凝，用于地中海貧血基因檢查及高效液相色譜法分析。

1.2.1 高效液相色譜法 采用高效液相色譜法對患者的血紅蛋白進(jìn)行分析，儀器選用（BIORAD VARIANT II）全自動血紅蛋白分析儀，所有操作均嚴(yán)格依照儀器使用說明進(jìn)行操作，并通過辨別鋒形，檢測患者的HbA2和HbF兩項指標(biāo)，判斷患者是否血紅蛋白出現(xiàn)異常。

1.2.2 血紅蛋白分析篩查 使用血紅蛋白HPLC分析系統(tǒng)及其配套試劑盒對3452例受檢患者進(jìn)行基因篩查分析。HPLC分析：嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行操作，對所有研究對象的血液標(biāo)本的血紅蛋白進(jìn)行檢測。

基因檢測：運用Gap-PCR方式對受檢患者α3.7、α4.2、SEA（中亞人常見基因缺失點），三種缺失基因進(jìn)行檢測，并通過反向斑點雜交法檢測α地貧，檢測內(nèi)容包括：α2球蛋白基因的改變及有無缺失，CAC CCGα→CAACAC[6]。運用RDB位點突變法檢測β型地貧的常見的幾個位點：CD41-42、IVS-2-654、id-28 （ A2→G6 ）、Cf278（G→PA）、CD71 -65 （+A、CD71）、CPD49（G6→T）、GPJ3-29（A32→6G） [7]，與九個極為少見的突編位點：ATG→AGG、RDS55-785 （98+ G9）、-PDC98（+ C）、PPAP-30 （T→C）-75（3C→AJH）、PHF-27-18 （DYG→T9）、LI64（+C6）、VFH+65-+ 75 （-AAAC）-32（9C→FA）IVS[8]。檢測時的所有操作均嚴(yán)格按照儀器說明書進(jìn)行操作。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

HbA2在2.5%～4.0%、HbF小于2.0%為正常；若HbA2>4.0%、HbF≥2.0%，則可確診為β型地貧。診斷精度為：檢查血紅蛋白的含量，診斷靈敏度為：CD71-65（+A、CD71） 、CPD49（G6→T）指標(biāo)，檢測敏感度。

2 結(jié)果

2.1 地中海貧血基因檢測結(jié)果

在本次3452例受檢患者經(jīng)基因檢測后，發(fā)現(xiàn)地中海貧血基因攜帶者共有1175例，α型地貧基因攜帶者762例，占比64.85%（762/1175）；β地貧基因攜帶者393例，占比33.44%（393/1175）；復(fù)合型基因攜帶患者20例，占比1.7%（20/1175），非地中海貧血患者2277例。

2.2 高效液相色譜法檢測結(jié)果

在762例α型地貧基因攜帶患者中檢測結(jié)果陽性者214例；β地貧基因攜帶者393例，陽性389例；αβ復(fù)合型地貧基因攜帶者20例，陽性20例；由上述數(shù)據(jù)顯示，高效液相色譜法對檢測β型地中海貧血檢測的靈敏度及確診率分別為98.98%（389/393）、98.98%（389/393）；對αβ復(fù)合型地貧血檢測靈敏度均為100%（20/20）。

2.3 對異常血紅蛋白的診斷

3452例受檢患者經(jīng)高效液相色譜法分析后，中診斷出有13例患者出現(xiàn)血紅蛋白異常病癥，其中Hb E4例、電泳特性與正常的血紅蛋白有差異患者3例、Hb Abruzzo患者3例、廉型紅細(xì)胞貧血3例。endprint

3 討論

地中海貧血主要致病原因有以下幾點：（1）缺鐵性貧血，因患者體內(nèi)缺血所以導(dǎo)致患者血細(xì)胞生產(chǎn)降低。（2）患者體內(nèi)造血功能障礙。（3）溶血性貧血，患者體內(nèi)的血細(xì)胞破壞加速，而導(dǎo)致的地中海貧血。 β型地中海貧血是一種多發(fā)于嬰兒的遺傳性貧血綜合癥[7]，一般發(fā)病越早病情也越重，如不及時進(jìn)行治療病情會惡化為慢性進(jìn)行性貧血，只能依靠輸血維持生命，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量，給患者家庭帶來了極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。β型地中海貧血多發(fā)病于新生兒出生后3～6個月，β型地中海貧血是最嚴(yán)重的血紅蛋白病之一[8]。目前在臨床上還沒有具體治療β型地中海貧血的方式，只能對該疾病進(jìn)行預(yù)防[9]。因此，大面積篩查攜帶致病基因的工作就變得尤為重要。由于β型地中海貧血是遺傳性溶血性貧血，所以在婚前對β型地中海貧血進(jìn)行基因檢測十分有必要，β型地中海貧血檢測也成為了提升我國人口質(zhì)量及優(yōu)生優(yōu)育的重要途徑。傳統(tǒng)用于檢測 Hb A2的方法有堿性醋酸纖維膜電泳洗脫法、凝膠電泳/光密度掃描法、柱層析法等，而這些方法操作繁瑣，變異范圍大.嚴(yán)重的β-地貧患兒只能靠輸血維持生命，給患兒帶來極大的痛苦，同時也給患兒家庭帶來沉重的家庭負(fù)擔(dān)。大面積普查β-地中海貧血能減少社會負(fù)擔(dān)，對于未出生的胎兒能起到優(yōu)生優(yōu)育的作用，可以通過中海貧血篩查阻止β-地中海貧血降生。

HPLC高效液相色譜法是2012年國際地中海貧血協(xié)會推薦的確診方法，因高效液相色譜法操作簡單、診斷精度較高、所需費用低廉更加適合大面積篩查，在此基礎(chǔ)上還能彌補(bǔ)基因檢查無法檢測血紅蛋白的漏洞。全自動高效液相色譜技術(shù)是一種新型的分析血紅蛋白的技術(shù)，目前在臨床上廣為使用。在本次研究中，HPLC法對診斷各型地中海貧血都具有較好的臨床效果，尤其對于β-地中海貧血及αβ復(fù)合型地貧的檢測接近完美（20/20），診斷靈敏度也較高。建議在地中海貧血高發(fā)的地區(qū)，如我國廣東、廣西、四川等地，降低診斷標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法對當(dāng)?shù)鼐用襁M(jìn)行大面積的地貧普查，有助于有效控制β型地中海貧血的發(fā)生，值得臨床推廣運用。

綜上所述，高效液相色譜技術(shù)比基因檢測操作簡單、所需資金少。更適合大面積普查地中海貧血，尤其高效液相色譜技術(shù)對檢測β型地貧及αβ復(fù)合型地貧有高達(dá)百分之90以上的診斷精度。同時還能發(fā)現(xiàn)基因檢測無法發(fā)現(xiàn)的血紅蛋白異常，彌補(bǔ)了基因檢查的不足，對β-地中海貧血及異常血紅蛋白的診斷有重要的臨床價值。

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（收稿日期：2017-03-28）endprint