馬婷婷+龔慕辛+王智民+賀蕊+吳莎+張村+李靜+李朝霞+陸允+許永崧

[摘要] 為探討甘草色澤與其質(zhì)量評(píng)價(jià)的相關(guān)性，該研究以精密色差儀和視覺(jué)分析儀測(cè)定甘草根皮和斷面顏色，以HPLC測(cè)定甘草藥材中6種黃酮類(lèi)和2種皂苷類(lèi)成分的含量，采用偏最小二乘回歸法對(duì)兩類(lèi)數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野生和栽培甘草根皮顏色不存在顯著差異，斷面顏色存在顯著或極顯著差異（P<0.05，P<0.01）；野生甘草的甘草苷、異甘草苷、異甘草素含量與甘草酸銨、甘草次酸含量顯著或極顯著高于栽培甘草；相關(guān)性結(jié)果表明，甘草根皮和斷面的顏色均與有效成分含量具有顯著或極顯著相關(guān)性。該研究為傳統(tǒng)以甘草色澤評(píng)價(jià)其質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)，為完善中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供新的參考。

[關(guān)鍵詞] 甘草； 色澤； 含量測(cè)定； 相關(guān)性分析

[Abstract] To explore the correlation between color of Glycyrrhiza uralensis and its quality evaluation，the colors of root bark and transverse section were determined by Precision Color Reader and Visual Analyzer，and the contents of six flavonoids and two saponins in G.uralensis were determined by high performance liquid chromatography（HPLC）.The partial least squares regression（PLSR）method was employed to correlate the colors with component contents in G.uralensis. The results showed that there were no significant differences in the colors of root bark but significant or very significant differences（P<0.05，P<0.01）in the colors of transverse section between the wild and cultivated G. uralensis. Compared with those in the cultivated G. uralensis， the contents of liquiritin， isoliquiritin isoliquiritigenin and the contents of ammonium glycyrrhizinate， glycyrrhetinic acid were obviously significant or remarkably significant in the wild G. uralensis.The correlation results showed that there was a significant or very significant correlation between the colors and the effective component contents. This study provides a scientific basis to evaluate the quality of G.uralensis by color and a new reference for the traditional evaluation methods for Chinese drugs.

[Key words] Glycyrrhiza uralensis； color； determination； correlation analysis

甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草G. inflate Bat.或光果甘草G. glabra L.的干燥根和根莖。主產(chǎn)于新疆、內(nèi)蒙古、甘肅、寧夏等省區(qū)，是臨床常用的大宗藥材。由于掠奪性采挖，甘草野生資源遭到了嚴(yán)重的破壞，栽培甘草目前已經(jīng)成為甘草藥材商品的主要來(lái)源^[1]。在中藥材出口流通領(lǐng)域普遍認(rèn)為栽培甘草質(zhì)量不及野生甘草^[2]。實(shí)際工作中，甘草質(zhì)量常采用外觀(guān)評(píng)價(jià)，以外皮細(xì)緊、色紅棕、質(zhì)堅(jiān)實(shí)、體重、斷面黃白、粉性足、味甜者為佳^[3]。其中，根皮和斷面顏色是品質(zhì)評(píng)價(jià)最直觀(guān)的指標(biāo)。然而，色澤的經(jīng)驗(yàn)鑒別依賴(lài)于人的主觀(guān)感受，缺乏客觀(guān)量化指標(biāo)，傳承和應(yīng)用均存在困難。本文以主產(chǎn)地的野生和栽培烏拉爾甘草為研究對(duì)象，采用精密色差儀和視覺(jué)分析儀對(duì)甘草根皮和斷面顏色進(jìn)行客觀(guān)的量化分析，采用HPLC對(duì)甘草中8種有效成分進(jìn)行定量分析，將兩部分?jǐn)?shù)據(jù)采用偏最小二乘回歸法進(jìn)行相關(guān)分析，并對(duì)相關(guān)結(jié)果進(jìn)行比較與驗(yàn)證，探究色澤與有效成分含量的相關(guān)性，闡釋傳統(tǒng)色澤鑒別作為甘草質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)內(nèi)涵。

1 材料

HP-C220型精密色差儀[漢譜（上海）光電科技有限公司]；VA400型IRIS視覺(jué)分析儀[ 阿默思（上海）儀器貿(mào)易有限公司]；Agilent 1100型高效液相色譜儀（四元梯度泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和二極管陣列檢測(cè)器，Agilent科技有限公司）；EYELAN-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛(ài)朗儀器有限公司）；HHS電熱恒溫水浴鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)出品）；VO 400真空干燥箱（德國(guó)memmert）；DV215CD型電子分析天平（OHAUS CORPORATION，USA）；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電加熱套（上海一科儀器有限公司）。

無(wú)水乙醇（分析純）、磷酸（分析純）購(gòu)自北京化工廠(chǎng)；乙腈（色譜純）購(gòu)自Fisher公司；娃哈哈純凈水。

甘草藥材經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院劉長(zhǎng)利副教授鑒定均為豆科植物甘草G. uralensis的干燥根及根莖。樣品的收集范圍覆蓋了甘草主產(chǎn)區(qū)，共25批樣品，詳細(xì)信息見(jiàn)表1。甘草酸銨（批號(hào)110731-201418），甘草次酸（批號(hào)110723-201514），甘草苷（批號(hào)15082811），甘草素（批號(hào)150922），異甘草苷（批號(hào)150922），異甘草素（批號(hào)150922），甘草查爾酮A（批號(hào)150922），光甘草定（批號(hào)150922），甘草酸銨和甘草次酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，其余對(duì)照品購(gòu)自北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司，對(duì)照品經(jīng)氫譜鑒定結(jié)構(gòu)，同時(shí)經(jīng)210，254，276，360 nm波長(zhǎng)下的面積歸一化法測(cè)定，純度均大于95%。

2 方法

2.1 顏色測(cè)定

2.1.1 精密色差儀

精密色差儀是一種基于CIELAB均勻色空間進(jìn)行顏色測(cè)量的儀器。CIELAB均勻色空間是當(dāng)前最通用的測(cè)量物體顏色的色空間。CIELAB均勻色空間用明度指數(shù)L*，色品指數(shù)a*，b*三維坐標(biāo)來(lái)表示^[4]。L*是明度，0為黑色，100為白色，ΔL*=L*野生-L*栽培，正值表示偏淺，負(fù)值表示偏深；a*是紅綠軸，+a*表示紅色，-a*表示綠色，Δa*=a*野生-a*栽培，正值表示偏紅，負(fù)值表示偏綠；b*是黃藍(lán)軸，+b*表示黃色，-b*表示藍(lán)色，Δb*=b*野生-b*栽培，正值表示偏黃，負(fù)值表示偏藍(lán)。采用精密色差儀測(cè)定25批甘草根皮和斷面顏色，并計(jì)算總色值E*ab，E*ab=[（L*）2+（a*）2+（b*）2]1/2，用來(lái)表征野生和栽培甘草的顏色差異。精密色差儀經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)白板、標(biāo)準(zhǔn)黑腔校正后，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。采用SPSS 19.0軟件中的兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較野生和栽培甘草根皮和斷面顏色的差異，結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.2 視覺(jué)分析儀

視覺(jué)分析儀是一種采用機(jī)器視覺(jué)技術(shù)將采集得到的中藥圖像通過(guò)RGB色空間來(lái)表示的一種測(cè)色儀器。該測(cè)色儀為圖像中每一個(gè)像素的RGB分量分配一個(gè)8～248的強(qiáng)度值，將紅、綠、藍(lán)3個(gè)顏色通道以不同強(qiáng)度相互疊加得到多種多樣的顏色，并把每一種疊加得到的顏色定義一個(gè)色號(hào)。各分量的強(qiáng)度值越小，明度越低，強(qiáng)度值越大，明度越高。例如，色號(hào)0，R，G，B均為8，顏色為黑色；色號(hào)4095，R，G，B均為248，顏色為白色。采用視覺(jué)分析儀測(cè)定25批甘草根皮和21批甘草斷面顏色（有4批甘草飲片較小，視覺(jué)分析儀未給出數(shù)據(jù)），每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次，取平均值，并對(duì)每種樣品能檢測(cè)出的所有色號(hào)進(jìn)行整理，選取能在70%的樣品中檢測(cè)到的色號(hào)。甘草根皮篩選出的色號(hào)有2422（light brown），2438（light olive brown），2439（grayish yellowish brown），2694（light brown），2695（light reddish brown）和2711（light olive brown）；甘草斷面篩選出的色號(hào)有3784（moderate yellow），3785（pale orange yellow），3801（pale yellow），3802（pale yellow），4057（light yellow），4058（pale orange yellow），4074（pale yellow）和4075（pale yellow），記錄這些色號(hào)在甘草根皮和斷面顏色中所占比例。采用SPSS 19.0軟件中的兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)（Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)）比較野生和栽培甘草根皮和斷面顏色的差異，見(jiàn)圖2。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 測(cè)定成分的選擇

甘草益氣補(bǔ)中，扶正固本作用主要與現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)的對(duì)消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)的作用以及抗病毒、抗腫瘤作用有關(guān)^[5]。這些藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)主要集中于皂苷類(lèi)化合物甘草酸、甘草次酸以及黃酮類(lèi)化合物甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、甘草查爾酮A、光甘草定^[6-15]等。因此，選擇這8種有效成分評(píng)價(jià)甘草藥材質(zhì)量。

2.2.2 色譜條件

Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）-0.05%磷酸水（B）；梯度洗脫0～13 min，17%～18% A；13～15 min，18%～26% A；15～23 min，26%～27% A；23～85 min，27%～70% A。流速為1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)，時(shí)間序列采樣0～16 min在276 nm檢測(cè)甘草苷，16～25 min在360 nm檢測(cè)異甘草苷，25～57 min在250 nm檢測(cè)甘草素、異甘草素和甘草酸銨，57～85 min在276 nm檢測(cè)甘草查爾酮A、光甘草定和甘草次酸；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、甘草酸銨、甘草查爾酮A、光甘草定、甘草次酸8種對(duì)照品，用70%乙醇溶解制成含相對(duì)應(yīng)對(duì)照品質(zhì)量濃度為0.400，0.160，0.080 0，0.040，2.00，0.400，0.160，0.100 g·L-1的儲(chǔ)備液；取適量各成分儲(chǔ)備液，加70%乙醇稀釋定容，配制成混合對(duì)照品溶液，用70%乙醇稀釋成6份不同濃度的混標(biāo)工作液。

2.2.4 甘草浸膏粉的制備

每種甘草粉碎成粗粉，稱(chēng)取3份，記錄每份重量，分別加入10倍量70%乙醇回流1 h，過(guò)濾收集濾液；濾渣再分別加入8倍量70%乙醇回流1 h，合并2次濾液，減壓濃縮后，水浴蒸發(fā)得浸膏，移至真空干燥箱中干燥成浸膏粉，稱(chēng)重，計(jì)算出膏率。

2.2.5 供試品溶液的制備

取甘草浸膏粉約50.00 mg，精密稱(chēng)定，加入70%乙醇定容至10 mL量瓶中，復(fù)溶，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。

2.2.6 測(cè)定方法學(xué)考察

2.2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及檢測(cè)限、定量限 取2.2.3項(xiàng)不同濃度的混合對(duì)照品溶液及對(duì)照品初始混合溶液按2.2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，以峰面積（Y）對(duì)質(zhì)量濃度（X）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，按信噪比（S/N）分別約為 3 和 10 時(shí)的相應(yīng)濃度作為檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ），見(jiàn)表2，結(jié)果表明，在測(cè)定范圍內(nèi)各成分線(xiàn)性良好（除甘草苷外的其他成分在樣品中含量較低，若使混標(biāo)溶液中甘草酸銨線(xiàn)性范圍的最低點(diǎn)接近定量限，那么其他成分的濃度會(huì)在定量限以下，故本文甘草酸銨線(xiàn)性范圍的最低點(diǎn)未接近定量限）。

2.2.6.2 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，按2.2.2項(xiàng)色譜條件重復(fù)測(cè)定6次，記錄峰面積，計(jì)算6次峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果顯示，甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、甘草酸銨、甘草查爾酮A、光甘草定、甘草次酸8種對(duì)照品RSD均小于3.0%，表明儀器精密度良好。

2.2.6.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取W-G2號(hào)和C-X2號(hào)混合浸膏粉6份，按照2.2.5項(xiàng)方法制備供試品溶液，按2.2.2項(xiàng)色譜條件分別測(cè)定，結(jié)果顯示，各成分含量的RSD均小于3.0%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取W-G2號(hào)和C-X2號(hào)混合供試品溶液，分別于0，3，6，9，12 h按2.2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，結(jié)果顯示，各成分峰面積的RSD值均小于3.5%，表明供試品溶液在 12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的W-G2號(hào)和C-X2號(hào)混合浸膏粉6份，每份約25.00 mg，精密稱(chēng)取，分別加入一定濃度的混合對(duì)照品溶液5 mL（甘草苷，異甘草苷，甘草素，異甘草素，甘草酸銨，甘草查爾酮A，光甘草定，甘草次酸的質(zhì)量濃度分別為0.276，0.046，0.006，0.006，0.470，0.008，0.004，0.004 g·L-1），按2.2.5項(xiàng)方法制備供試品溶液，按2.2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，計(jì)算各成分回收率，結(jié)果顯示，各成分的平均回收率在93.21%～104.9%，RSD均小于5.3%，符合分析要求，見(jiàn)表3。

2.2.7 含量測(cè)定

將制備的供試品溶液，按2.2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖3，根據(jù)線(xiàn)性回歸方程計(jì)算甘草藥材中8種有效成分的含量。采用SPSS 19.0軟件中的兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較野生和栽培甘草中有效成分的含量，見(jiàn)圖4；統(tǒng)計(jì)不同產(chǎn)區(qū)野生和栽培甘草中各有效成分的含量，見(jiàn)圖5。

2.3 色澤與有效成分含量的相關(guān)性分析

偏最小二乘回歸法是一種多元統(tǒng)計(jì)分析方法。

當(dāng)自變量較多且自變量間存在著多重共線(xiàn)性（一些自變量或全部自變量之間有近似線(xiàn)性關(guān)系）時(shí)，會(huì)使求得的回歸系數(shù)不穩(wěn)定且難于解釋。偏最小二乘回歸法可利用對(duì)系統(tǒng)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分解和篩選的方式，提取對(duì)因變量解釋性最強(qiáng)的綜合變量，剔除多重相關(guān)信息和無(wú)解釋意義的信息，從而克服了變量多重共線(xiàn)性在系統(tǒng)建模中的不良作用^[16]。本試驗(yàn)采用minitab 17.1軟件中的偏最小二乘回歸法進(jìn)行甘草根皮和斷面顏色與8種有效成分含量的相關(guān)性分析，依次選擇【統(tǒng)計(jì)】→【回歸】→【偏最小二乘】，以表征顏色的各指標(biāo)作為響應(yīng)（因變量），以8種有效成分作為模型（自變量），點(diǎn)擊【選項(xiàng)】，選擇【逐一剔除法】交叉驗(yàn)證，點(diǎn)擊【確定】后軟件自動(dòng)進(jìn)行回歸分析。根據(jù)得到的相關(guān)系數(shù)，評(píng)價(jià)8種有效成分與整體顏色的相關(guān)性。

2.3.1 相關(guān)性研究

將精密色差儀測(cè)定的外觀(guān)顏色指標(biāo)L*，a*，b*及視覺(jué)分析儀測(cè)定后篩選出的色號(hào)與甘草中甘草苷、異甘草苷、甘草素、異甘草素、甘草酸銨、甘草查爾酮A、光甘草定和甘草次酸含量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見(jiàn)表4，5。

2.3.2 相關(guān)性驗(yàn)證

另取3種樣品編號(hào)為C-J7，C-M9，W-G3的甘草按2.1.1項(xiàng)方法對(duì)甘草根皮和斷面顏色進(jìn)行測(cè)量并對(duì)成分含量高低進(jìn)行預(yù)測(cè)；按2.2.4，2.2.5項(xiàng)方法制備供試品溶液，按2.2.2項(xiàng)色譜條件測(cè)定，計(jì)算甘草藥材中8種有效成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表6。

3 結(jié)果與討論

3.1 顏色測(cè)定

由圖1可知，野生與栽培甘草根皮L*，a*，b* 和E*ab 無(wú)差異，表明野生和栽培甘草根皮顏色無(wú)明顯區(qū)別。野生與栽培甘草斷面E*ab值存在差異（P<0.05），表明兩者的斷面顏色有區(qū)別。其中，野生甘草L*值小于栽培甘草（P<0.01）、b*值大于栽培甘草（P<0.05），綜合這2個(gè)顏色參數(shù)表明野生甘草的斷面顏色更黃。

由圖2可知，野生與栽培甘草根皮的2439，2694 2個(gè)色號(hào)的差異具有一定趨勢(shì)（P<0.1），其他色號(hào)無(wú)差異。但這2個(gè)色號(hào)所占比例在野生與栽培甘草中的大小趨勢(shì)相反，這可能是導(dǎo)致色差儀測(cè)定的野生與栽培甘草根皮顏色沒(méi)有區(qū)別的原因。野生甘草斷面色號(hào)3784（moderate yellow，R232+G200+B136）所占的比例大于栽培甘草（P<0.05），差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3785（R232+G200+B152）所占的比例有大于栽培甘草的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.1），其他色號(hào)無(wú)差異。野生甘草斷面色號(hào)4075（pale yellow，R248+G232+B184）所占的比例小于栽培甘草（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；4058（R248+G216+B168），4074（R248+G232+B168）所占的比例有小于栽培甘草的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)色號(hào)的RGB值可知，4075，4058，4074 3個(gè)色號(hào)明度高于3784，3785 2個(gè)色號(hào)。綜合2組色號(hào)的結(jié)果表明野生甘草的斷面顏色更黃，與精密色差儀測(cè)定結(jié)果一致，并篩選出了存在差異的色號(hào)。

3.2 含量測(cè)定

由圖4可知，野生甘草中甘草苷、異甘草苷、異甘草素含量顯著高于栽培甘草（P<0.05），甘草酸銨、甘草次酸含量極顯著高于栽培甘草（P<0.01）。由圖5可知，光甘草定在內(nèi)蒙古、新疆和寧夏甘草中檢測(cè)出，在內(nèi)蒙古和寧夏樣品中僅存在于栽培甘草中，在新疆野生和栽培甘草中都檢測(cè)出，分析可能這3個(gè)產(chǎn)地的栽培甘草存在雜交現(xiàn)象，在甘肅采集的樣本中未檢出光甘草定。野生甘草中，甘肅甘草苷，甘草酸銨，異甘草苷含量較高，新疆甘草苷，異甘草苷，甘草次酸含量較低；栽培甘草中，甘肅甘草苷，異甘草苷，甘草次酸含量較高，新疆甘草苷，異甘草苷含量較低。

3.3 色澤與有效成分含量的相關(guān)性分析

3.3.1 精密色差儀與化學(xué)測(cè)定結(jié)果相關(guān)性

甘草根皮顏色L*值與有效成分含量具有極顯著相關(guān)性（P<0.01），與光甘草定、甘草查爾酮A含量呈正相關(guān)，與甘草次酸、甘草苷、異甘草苷、甘草酸銨、甘草素、異甘草素含量呈負(fù)相關(guān)，見(jiàn)表4。根皮的a*與有效成分含量的相關(guān)性不具有統(tǒng)計(jì)意義。根皮的b*與有效成分含量具有顯著相關(guān)性（P<0.05），與異甘草素、甘草素、光甘草定、甘草查爾酮A含量呈正相關(guān)，與甘草次酸、異甘草苷、甘草酸銨、甘草苷含量呈負(fù)相關(guān)，表明根皮顏色越黃，甘草次酸、異甘草苷、甘草酸銨、甘草苷含量越低。綜合根皮L*，a*與有效成分的相關(guān)性結(jié)果認(rèn)為，甘草根皮紅色越深，甘草次酸、甘草苷、異甘草苷、甘草酸銨、甘草素、異甘草素含量越高。

甘草斷面顏色L*，a*，b*與有效成分含量具有極顯著相關(guān)性（P<0.01）。其中，斷面L*與光甘草定、甘草查爾酮A含量呈正相關(guān)，與甘草次酸、甘草素、異甘草素、甘草酸銨、異甘草苷、甘草苷含量呈負(fù)相關(guān)；斷面b*與甘草查爾酮A、甘草酸銨、甘草苷、異甘草苷、甘草素含量呈正相關(guān)，與甘草次酸、光甘草定、異甘草素含量呈負(fù)相關(guān)。綜合斷面L*值，b*值與有效成分的相關(guān)性結(jié)果表明，甘草斷面越黃，則甘草酸銨、甘草查爾酮A、甘草苷、異甘草苷、甘草素的含量越高。

3.3.2 視覺(jué)分析儀與化學(xué)測(cè)定結(jié)果相關(guān)性

甘草根皮顏色2438，2439 2個(gè)色號(hào)與有效成分含量具有顯著相關(guān)性（P<0.05）。其中，2438與甘草酸銨、甘草素含量呈正相關(guān)，與異甘草素、甘草查爾酮A、甘草苷、甘草次酸、異甘草苷、光甘草定含量呈負(fù)相關(guān)；2439與甘草苷、光甘草定、異甘草苷、異甘草素含量呈正相關(guān)，與甘草次酸、甘草素、甘草查爾酮A、甘草酸銨的含量呈負(fù)相關(guān)；其他色號(hào)與有效成分含量的相關(guān)性不具有統(tǒng)計(jì)意義。上述結(jié)果表明，與2438，2439 2個(gè)色號(hào)相關(guān)的多數(shù)成分，其正負(fù)相關(guān)性相反，這可能是導(dǎo)致精密色差儀測(cè)定的甘草根皮a*值與有效成分含量的相關(guān)性不顯著的原因，見(jiàn)表5。

甘草斷面顏色3784，3785，4057，4058，4074共5個(gè)色號(hào)與有效成分含量具有顯著相關(guān)性（P<0.05）。其中，3784與異甘草苷、甘草酸銨、甘草次酸、甘草苷、異甘草素、甘草素含量呈正相關(guān)，與光甘草定、甘草查爾酮A含量呈負(fù)相關(guān)；3785與甘草酸銨、異甘草素、光甘草定、甘草次酸、甘草素含量呈正相關(guān)，與甘草查爾酮A、甘草苷、異甘草苷含量呈負(fù)相關(guān)；4057與甘草查爾酮A、甘草次酸、甘草苷、異甘草苷、甘草素、甘草酸銨含量呈正相關(guān)，與光甘草定、異甘草素含量呈負(fù)相關(guān)；4058與甘草查爾酮A含量呈正相關(guān)，與甘草酸銨、甘草苷、異甘草苷、甘草次酸、異甘草素、甘草素、光甘草定含量呈負(fù)相關(guān)；4074與甘草素、異甘草素、光甘草定、甘草苷、異甘草苷含量呈正相關(guān)，與甘草次酸、甘草酸銨、甘草查爾酮A含量呈負(fù)相關(guān)。

3784，3785屬于中黃色色號(hào)，4058，4074屬于淺黃色色號(hào)，結(jié)合正負(fù)相關(guān)性及標(biāo)準(zhǔn)化系數(shù)大小可看出，中黃色色號(hào)主要與甘草酸銨、甘草苷、異甘草苷含量呈顯著正相關(guān)，而淡黃色色號(hào)整體與這3種有效成分呈顯著負(fù)相關(guān)。甘草斷面越黃，則中黃色色號(hào)所占比例越大，淡黃色色號(hào)所占比例越小，即可推測(cè)出甘草酸銨、甘草苷、異甘草苷含量越高，與精密色差儀測(cè)定斷面顏色與有效成分的相關(guān)性結(jié)論相符，并篩選出了與有效成分含量具有相關(guān)性的色號(hào)。

3.3.3 相關(guān)性驗(yàn)證

由表6可知，根皮L*越小，甘草苷、異甘草苷、甘草酸銨含量越高，甘草素、異甘草素、甘草次酸含量有升高趨勢(shì)；根皮b*越小，甘草苷、異甘草苷、甘草酸銨含量越高，與上述結(jié)論一致。斷面L*值越小、b*值越大（斷面越黃），甘草苷、異甘草苷、甘草酸銨越高，其它成分趨勢(shì)不明顯，與上述結(jié)論可吻合。本研究的結(jié)論可作為評(píng)價(jià)甘草質(zhì)量的參考。

4 結(jié)論

傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別是長(zhǎng)期以來(lái)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，依據(jù)藥材本身所表現(xiàn)出來(lái)的色彩、質(zhì)地、氣味等特征來(lái)判斷藥材是否優(yōu)質(zhì)，采收加工是否適宜，以此來(lái)判斷藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，從而闡明其本質(zhì)，即“辨狀論質(zhì)”^[17]。中藥色澤作為傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別的重要特征之一，是受內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)和外界環(huán)境因子等多種因素影響而呈現(xiàn)出來(lái)的，能夠反映藥材中化學(xué)成分的含量，避免化學(xué)成分測(cè)定受限以及單一成分無(wú)法表征藥材整體質(zhì)量的問(wèn)題。自古以來(lái)人們就依靠實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出了根據(jù)顏色來(lái)鑒別中藥質(zhì)量的方法，即“辨色論質(zhì)”^[18]。

本研究采用2種測(cè)色儀器測(cè)定甘草根皮和斷面顏色后，主要采用了精密色差儀測(cè)定所得的結(jié)論，利用視覺(jué)分析儀對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，并篩選出了野生甘草和栽培甘草具有差異的色號(hào)。這兩種儀器基于不同的理論對(duì)顏色進(jìn)行表征，所得數(shù)據(jù)有不同的應(yīng)用意義，且各具優(yōu)勢(shì)。精密色差儀得到的是樣品的整體顏色信息，參數(shù)少便于分析，但缺點(diǎn)是表述顏色的數(shù)據(jù)不夠精細(xì)和可視化；而視覺(jué)分析儀可將樣品的顏色分解為具體色號(hào)并得到該色號(hào)比例，每種色號(hào)對(duì)應(yīng)一組RGB值，通過(guò)這3個(gè)值可合成具體顏色，使結(jié)果更加直觀(guān)。試驗(yàn)結(jié)果表明，應(yīng)用這2種儀器測(cè)定甘草顏色除了可對(duì)化學(xué)成分含量的高低進(jìn)行預(yù)測(cè)外，還建立了2種測(cè)色儀的數(shù)據(jù)相關(guān)分析的方法，發(fā)現(xiàn)兩者的結(jié)論可相互驗(yàn)證，說(shuō)明了建立的方法是可行的。本文研究結(jié)果與傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別對(duì)甘草質(zhì)量評(píng)價(jià)相一致，為傳統(tǒng)顏色鑒別作為甘草質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)，為建立甘草外觀(guān)顏色從主觀(guān)經(jīng)驗(yàn)轉(zhuǎn)向客觀(guān)量化的評(píng)價(jià)模式奠定基礎(chǔ)。

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[責(zé)任編輯 丁廣治]