李 樂，張 敏，耿春銀，金英海

（延邊大學(xué)，吉林延吉 133000）

不同添加量的富硒乳酸菌對蛋雞免疫和抗氧化性能的影響

李 樂，張 敏，耿春銀，金英海*

（延邊大學(xué)，吉林延吉 133000）

為研究日糧中添加不同水平的富硒乳酸菌制劑對蛋雞免疫和抗氧化性能的影響，本試驗選用480只28周齡的海蘭褐蛋雞，隨機分成4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞。A組為對照組，飼喂蛋雞基礎(chǔ)日糧，B、C、D組分別在基礎(chǔ)日糧中添加不同劑量的富硒乳酸菌制劑，添加劑中以有機硒的含量計算，B、C、D組中有機硒的含量分別為0.3、0.6、0.9mg/kg，預(yù)飼期1周，試驗期為42 d。結(jié)果表明：（1）與對照A組相比，B、C、D組血清內(nèi)的超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性均顯著提高（P ＜ 0.05），丙二醛（MDA）的含量顯著下降（P ＜ 0.05）。 （2）在肝臟內(nèi) B、C、D組谷胱甘肽過氧化物酶的活性與對照A組相比差異極顯著（P＜0.01）。肝臟內(nèi)各試驗組超氧化物歧化酶的活性與對照A組之間有顯著性差異（P＜0.05）。C、D組肝臟內(nèi)丙二醛含量低于A組和B組（P＜0.05）。（3）在蛋黃內(nèi)D組谷胱甘肽過氧化物酶比其他各組有顯著提高（P＜0.05）。（4）與對照A組相比，添加富硒乳酸菌制劑對血清內(nèi)的IgM有顯著的影響（P＜0.05）。由此可見，添加富硒乳酸菌制劑可提高蛋雞的抗氧化及免疫水平，對蛋雞保持健康狀況和延長產(chǎn)蛋期有十分積極的影響。

乳酸菌；有機硒；免疫機能；抗氧化性能

硒是動物體內(nèi)的必需微量元素之一，是谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px）活性中心的組成部分。Duntas等（2015）發(fā)現(xiàn)，硒可參與調(diào)節(jié)體內(nèi)絕大部分的抗氧化防御機制，并且可通過調(diào)節(jié)體內(nèi)的氧化還原狀態(tài)和內(nèi)分泌系統(tǒng)，提高免疫力，改善其健康狀況。隨著對硒元素在體內(nèi)作用機制研究的逐步深入，越來越多的含硒蛋白質(zhì)和含硒抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)，并且這些物質(zhì)在減慢和防止機體的氧化損傷方面發(fā)揮著極其重要的作用（LI等，2014）。缺硒會導(dǎo)致家禽出現(xiàn)滲出性素質(zhì)、白肌病等（才利春等，2016），所以在日糧中添加一定量的硒十分必要。目前日糧中使用的硒源主要是亞硒酸鈉，但是其存在吸收效率低、毒性大、安全范圍窄和潛在的環(huán)境污染等問題，所以安全高效的有機硒源的開發(fā)與利用成為當(dāng)今研究的熱點之一。目前，有很多關(guān)于利用植物和微生物進(jìn)行硒的生物有機化的研究和應(yīng)用，并且發(fā)現(xiàn)微生物富硒能力強轉(zhuǎn)化率高，同時兼具微生物的生物特性，有利于改善機體的免疫和健康狀況，具有很好的研究和應(yīng)用前景。乳酸菌是近年來得到普遍認(rèn)可的一種益生菌，其可調(diào)節(jié)腸道菌群、增強機體免疫能力、促進(jìn)動物生長發(fā)育，在畜禽生產(chǎn)中已經(jīng)廣泛使用（Lehloenya等，2008）。本試驗所使用的添加劑是以有機米糠為發(fā)酵底物，利用乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵充分利用米糠中的營養(yǎng)，同時以乳酸菌為載體使無機硒通過微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化為有機硒 （李艷嬌等，2016）。近幾年，有很多關(guān)于有機硒在畜禽方面的研究報道，但是鮮見關(guān)于富硒乳酸菌在蛋雞方面的研究報道。富硒乳酸菌在開發(fā)利用農(nóng)副產(chǎn)品資源的同時發(fā)揮了有機硒和乳酸菌的雙重作用。本試驗旨在研究添加不同水平的富硒乳酸菌對蛋雞免疫機能和抗氧化性能的影響，為其在蛋雞生產(chǎn)中的使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試驗設(shè)計 本試驗選用480只28周齡體況相近的海蘭褐蛋雞，采用單因子隨機試驗設(shè)計，將其隨機分成4組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞。A組為對照組，飼喂蛋雞基礎(chǔ)日糧，B、C、D組分別在基礎(chǔ)日糧中添加不同劑量的富硒乳酸菌制劑，制劑中以有機硒的含量計算，B、C、D 組中有機硒的含量分別為 0.3、0.6、0.9 mg/kg（見表1），預(yù)飼期1周，試驗期為42 d。

表1 試驗設(shè)計mg/kg

1.2 試驗日糧與飼養(yǎng)管理 本試驗從2016年7月1日至2016年8月18日在延吉市仁和禽業(yè)有限公司進(jìn)行，試驗基礎(chǔ)日糧采用玉米 —豆粕型（表2），營養(yǎng)成分參考NY/T 33-2004《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》。試驗所用的富硒乳酸菌制劑由延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)實驗室研制，其中乳酸菌的生物量為9.94 g/L，有機硒生產(chǎn)水平為7.46 mg/L（李艷嬌等，2016）。試驗采用三層階梯式籠養(yǎng)，料槽喂料自由采食，乳頭式飲水器自由飲水，每天早、中、晚各喂料一次，早、晚各清糞一次，自然通風(fēng)，每天光照17 h，溫度控制在28～29℃，定期按照雞場常規(guī)程序進(jìn)行防疫和免疫。

表2 試驗基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 樣品的采集與測定

1.3.1 樣品的采集及處理 血清的采集與處理：飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，于清晨未進(jìn)食前，隨機從每個重復(fù)組中選3只雞，用一次性采血管在翅靜脈采血10 mL。將采血管固定使血樣靜置30 min，然后將上層淡黃色液體轉(zhuǎn)移到離心管中，3000 r/min離心15 min制備血清，分裝，－20℃貯存。

肝臟的采集與處理：飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，于清晨未進(jìn)食前，隨機從每個重復(fù)組中選2只雞屠宰取肝臟樣，用自封袋分裝編號，放入液氮內(nèi)迅速降溫，隨后取出放入－80℃冰箱內(nèi)保存。

雞蛋的采集與保存：飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，隨機從每個重復(fù)組中取5枚雞蛋，編號后放入冰箱內(nèi)4℃恒溫保存。

1.3.2 抗氧化指標(biāo)的測定 肝臟組織和血清中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：黃嘌呤氧化酶法測定肝臟中SOD活性，硫代巴比妥酸法測定MDA含量，比色法測定肝臟內(nèi)GSH-Px活性，使用試劑盒進(jìn)行具體含量的測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，按照產(chǎn)品說明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。

蛋黃內(nèi)GSH-Px、SOD的測定：同肝臟組織內(nèi)GSH-Px、SOD 的測定。

蛋黃內(nèi)MDA的測定:準(zhǔn)確量取新鮮蛋黃5 g，按1∶4比例加入無水乙醇，漩渦震蕩3 min，充分混勻，3500 r/min離心10 min，取上清待測。用試劑盒檢測MDA的含量，同上肝臟中MDA的測定。

1.3.3 免疫指標(biāo)的測定 采用散射速率比濁法測定血清中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG的含量，使用購自南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理 所有試驗數(shù)據(jù)使用Excel 2010進(jìn)行整理，應(yīng)用SPSS17.0對數(shù)據(jù)做方差分析，并采用Duncan’s檢驗法比較各組間差異顯著性，試驗數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 富硒乳酸菌制劑對蛋雞血清抗氧化性能的影響 由表3可知，添加不同劑量富硒乳酸菌制劑的B、C、D組與飼喂基礎(chǔ)日糧的對照 A組相比，富硒乳酸菌制劑可明顯提高蛋雞血清內(nèi)SOD和 GSH-Px的含量（P ＜ 0.05）。B、C、D 組 SOD 的含量比A組分別提高了16.44%、14.28%和13.65%，但各試驗組間無明顯差異（P＞0.05）。血清內(nèi)GSH-Px的活性隨富硒乳酸菌制劑添加量的升高有升高的趨勢，B、C、D組比對照A組分別提高了6.53%、10.18%和12.17%。添加富硒乳酸菌制劑的各組MDA含量明顯低于對照A組（P＜0.05），C組MDA含量最低，顯著低于 B組和D組（P＜0.05），但B組和D組之間無顯著差異（P ＞ 0.05）。

表3 富硒乳酸菌制劑對血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.2 富硒乳酸菌制劑對蛋雞肝臟抗氧化性能的影響 由表4可知，與對照A組相比，添加富硒乳酸菌制劑的各組肝臟內(nèi)GSH-Px活性極顯著增強（P＜0.01），比對照 A組分別提高了 24.92%、27.59%和27.97%，但是各添加水平之間無明顯差異（P＞0.05）。B、C、D組與A組相比SOD活性有所提高（P＜0.05），并且B、C組和D組之間也存在差異 （P＜0.05），B、C組肝臟內(nèi)SOD活性高于D組。C、D組肝臟內(nèi)MDA含量低于A、B組（P＜0.05）。

表4 富硒乳酸菌制劑對肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

2.3 富硒乳酸菌制劑對蛋雞蛋黃抗氧化性能的影響 由表5可知，在蛋黃內(nèi)各組之間SOD活性無顯著性差異（P＞0.05），但C組SOD活性最高，比對照A組提高了11.32%。C組蛋黃內(nèi)MDA含量明顯低于其他各組（P＜0.05），比對照A組降低了27.78%。B組與對照A組相比，GSH-Px活性沒有差異（P ＞ 0.05），但 C、D 組與A組比較有顯著性差異（P＜0.05），分別提高了5.08%和5.26%。

表5 富硒乳酸菌制劑對蛋黃抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 富硒乳酸菌制劑對蛋雞血清免疫性能的影響 由表6可看出，在血清中IgA的含量各組間無顯著性差異（P＞0.05），但C組高于其他各組，比對照A組提高了7.02%。B、C組和D組與對照A組相比較，血清中IgM的含量明顯升高 （P＜0.05），其中C組IgM的含量最高，較A組升高了7.74%。C組與A、B組相比，血清中IgG的含量存在差異（P＜0.05），C組與D組之間IgG含量無差異（P ＞ 0.05）。

3 討論

3.1 富硒乳酸菌制劑對蛋雞抗氧化性能的影響GSH-Px存在于機體的細(xì)胞質(zhì)和線粒體中，是酶促抗氧化防御體系中十分重要的酶，而硒是其活性中心的重要組成部分，可以催化谷胱甘肽反應(yīng)并且抑制過氧化反應(yīng)，減少過氧化物對細(xì)胞的損傷，清除機體內(nèi)自由基，保護細(xì)胞膜和細(xì)胞器免受自由基的干擾和傷害 （趙玉鑫，2007；Ursini，1999）。SOD也是酶促抗氧化防御體系中的重要組成部分，其能將免疫反應(yīng)中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫，再通過GSH-Px和過氧化氫酶轉(zhuǎn)化為H2O和O2。SOD可以反映出體內(nèi)自由基清除的程度，并且GSH-Px活性升高可減少過氧化物對SOD的影響（龍爍等，2017）。本試驗結(jié)果表明，富硒乳酸菌制劑可有效提高蛋雞血清、肝臟和蛋黃中GSH-Px的活性，在血清和肝臟中SOD的活性也顯著增強。潘翠玲等（2010）在蛋雞日糧中分別添加硒水平為0.2、0.5、1.0 mg/kg的富硒益生菌發(fā)現(xiàn)，蛋雞肝臟、全血、腎臟和心肌中GSH-Px和SOD的活性均得到顯著提高，并且隨著血液中硒含量的增加GSH-Px的活性呈上升趨勢。秦順義等（2015）在雄性AA肉仔雞日糧中加入0.3 mg/kg的富硒乳酸菌發(fā)現(xiàn)，血清內(nèi)GSH-Px和SOD的活力均極顯著高于對照組，這與本試驗的研究結(jié)果一致。原因可能是日糧中添加硒源提高了機體內(nèi)硒水平，從而提高了蛋雞抗氧化酶的活性（Pan等，2007）。本試驗結(jié)果中，MDA的含量在血清、肝臟和蛋黃中均明顯降低。MDA是機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，其含量升高會使機體抗氧化水平降低。何柳青等（2012）研究結(jié)果顯示，以酵母硒形式添加硒0.25mg/kg可極顯著降低血清MDA含量。本試驗的結(jié)果與Jing等（2015）的研究結(jié)果也基本一致。說明富硒乳酸菌制劑可以增強抗氧化酶的活性，并抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而提高機體的抗氧化能力。

3.2 富硒乳酸菌制劑對蛋雞免疫性能的影響硒主要通過三種方式影響機體的免疫功能，包括細(xì)胞免疫、體液免疫及非特異性免疫。硒可通過刺激免疫球蛋白的形成，增強機體體液免疫性能。黃克和等（1990）的試驗結(jié)果表明，硒可顯著提高雛雞血清IgG水平。在本試驗中，添加富硒乳酸菌制劑組血清中IgG的含量提高，并且IgM的含量也得到了顯著提高。

4 結(jié)論

在日糧中添加富硒乳酸菌制劑可增強蛋雞的免疫和抗氧化性能，并且對延長產(chǎn)蛋期和保持健康狀況有十分積極的影響。根據(jù)試驗結(jié)果綜合考慮，在日糧中添加有機硒含量為0.6 mg/kg的富硒乳酸菌制劑，對蛋雞免疫和抗氧化的影響更為理想。

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This study was designed to investigate the effect of selenium-enriched Lactobacillus products on immunity and antioxidant function in layers.A total of 480 28-week old Hy-Line Brown chickens were randomly divided into 4 groups with 6 repetitions of 20 chickens per repetition.Group A （control） was fed basal diets.Group B，C and D were fed basal diet with 0.3，0.6，0.9 mg/kg selenium-enriched Lactobacillus （organic Se was counted）.Preparatory feeding lasted one week and the trial lasted for 42 d.The results showed that： （1）Compared with group A，the activity of serum superoxide dismutase（SOD） and glutathione peroxidase （GSH-Px） increased significantly （P ＜0.05）.The content of malonaldehyde（MDA）decreased significantly（P ＜ 0.05）.（2）The levels of GSH-Px in group B，C and D in liver differed significantly from group A（P ＜0.01）and SOD were higher than group A （P ＜ 0.05）.The content of MDA in liver of group C and D were lower than group A and B.（3）The levels of GSH-Px in yolk of group D increased significantly comparing with other groups（P ＜ 0.05）.（4）IgM in serum of group B，C and D were impacted significantly comparing with control group A （P ＜0.05）.Therefore,adding selenium-enriched products could increase immunity and antioxidant function of layers and has positive effects on keeping health and extending egg producing period.

Lactobacillus；organic selenium；immunity；antioxidant capacity

S816.7

A

1004-3314（2017）19-0021-04

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171905

吉林省科技廳重點項目（20110236）

*通訊作者