李鑫 季玲 季宇凡 余倩

核酸檢測(cè)技術(shù)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)在血液篩檢中的初步應(yīng)用比較分析

李鑫 季玲 季宇凡 余倩

目的對(duì)比核酸檢測(cè)技術(shù)與酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)在血液篩檢中的初步應(yīng)用。方法收集10 000份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本作為測(cè)試對(duì)象，制作成三管標(biāo)本，均在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行離心處理，實(shí)施酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)和核酸檢測(cè)技術(shù)。結(jié)果10 000份血液標(biāo)本中，NAT（＋）為61份，NAT（-）為9 939份，EIA（＋）為57份，EIA（-）為9 943份，其中5份為EIA（-）NAT（＋），且均HBV DNA定量檢測(cè)，可發(fā)現(xiàn)大部分結(jié)果＜3．0×104拷貝/ml，且經(jīng)NAT試劑再次檢測(cè)后，仍為陽性。結(jié)論核酸檢測(cè)技術(shù)在血液篩檢中診斷價(jià)值性更高，能夠提高HBV檢測(cè)靈敏度。

核酸檢測(cè)技術(shù)；酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)；血液

血液傳染病是采血機(jī)構(gòu)重點(diǎn)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，也是血液安全的最后一道防線。早期在檢測(cè)血液標(biāo)本時(shí)，常使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，其能夠降低輸血途徑傳播病毒風(fēng)險(xiǎn)，但近年來，隨著診斷技術(shù)的改進(jìn)，核酸檢測(cè)技術(shù)也開始廣泛用于臨床，其能夠縮短血液感染病毒檢測(cè)的“窗口期”，但目前尚未統(tǒng)一具體檢測(cè)方式，且不同學(xué)者存在較大爭(zhēng)議[1-2]。為了促使血液篩查工作的順利實(shí)施，本文對(duì)比了不同技術(shù)在血液篩檢中的臨床意義，具體見下文。

作者單位：張家港市紅十字血站血液檢驗(yàn)科，江蘇 張家港 215600

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月12日—2016年1月12日收集的10 000份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。每個(gè)獻(xiàn)血者共收集三管標(biāo)本，1管為EDTA-K2抗凝的PPT真空采血管，用于核酸檢測(cè)；2管為分離膠促凝真空采血管用于EIA檢測(cè)與谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)：3管為EDTA-K2抗凝真空采血管用于血型檢查。在收集血液樣本后，均在4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行離心處理。

1.2 方法

方法和結(jié)果判定：使用全自動(dòng)酶免后處理儀對(duì)獻(xiàn)血者實(shí)施HbsAg、HCV、HIV、TP的ELISA檢測(cè)，再進(jìn)行樣本的核酸檢測(cè)，核酸檢測(cè)主要有以下幾個(gè)步驟：（1）使用Hamilton MICROLAB STAR混樣儀對(duì)樣本進(jìn)行混樣以及分裝質(zhì)控品；（2）利用核酸提取儀CAP實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)提取樣本核酸和預(yù)備PCR反應(yīng)體系；（3）利用核酸擴(kuò)增儀CTM實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)核酸擴(kuò)增和PCR產(chǎn)物的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和鑒別。結(jié)果可以通過羅氏核酸檢測(cè)系統(tǒng)的軟件直接進(jìn)行讀取。

核酸試劑（NAT）陽性樣本拆分：由于核酸標(biāo)本的檢測(cè)是采用混樣檢測(cè)模式，為了找到真正的陽性血液樣本，就必須進(jìn)行混合樣本拆分。拆分設(shè)計(jì)方法為：將混樣陽性原始管所包含的6個(gè)樣本挑出（羅氏核酸檢測(cè)采用6樣本混樣），然后采用次級(jí)混樣通過Hamilton MICROLAB STAR混樣儀進(jìn)行拆分，次級(jí)混樣后每個(gè)混樣中僅包含一個(gè)樣本。以此方式找出反應(yīng)性的單個(gè)樣本。

試劑質(zhì)量控制：（1）每批試驗(yàn)都包含一個(gè)陰性質(zhì)控（MPX（-）C，v2.0）以及三個(gè)陽性質(zhì)控（MPX M（+）C，v2.0，MPX O（+）C，v2.0和MPX 2（+）C，v2.0）。

（2）如果該批試驗(yàn)質(zhì)控有效，則指認(rèn)其該批試驗(yàn)“完整，有效”。如果某批試驗(yàn)中任一質(zhì)控品無效，則整批次試驗(yàn)均無效，且必須重做。核酸檢測(cè)系統(tǒng)的軟件會(huì)根據(jù)質(zhì)控失敗自動(dòng)認(rèn)定結(jié)果為無效。

（3）樣本設(shè)有內(nèi)參（IC）：①對(duì)非反應(yīng)性的樣本，其內(nèi)參必須有效，否則此樣本的試驗(yàn)結(jié)果無效。②對(duì)反應(yīng)性的樣本，其內(nèi)參可以有效也可無效。該樣本需按相關(guān)要求處理。

2 結(jié)果

2.1 分析EIA和HbsAg NAT檢測(cè)結(jié)果

10 000份血液標(biāo)本中，5份為EIA（-）NAT（＋）。如表1所示。

2.2 5份樣本核酸定量檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)NAT試劑再次檢測(cè)后，仍為陽性，且通過HBV DNA定量檢測(cè)結(jié)果＜3.0×104拷貝/ml。如表2所示。

表1 分析EIA和HbsAg NAT檢測(cè)結(jié)果

表2 5份樣本核酸定量檢測(cè)結(jié)果

3 討論

熒光定量PCR技術(shù)能夠提高檢測(cè)特異性，降低污染擴(kuò)增產(chǎn)物機(jī)會(huì)，屬于一種將光化學(xué)、分子雜交、基因擴(kuò)增融為一體的新型技術(shù)，是直接檢測(cè)核酸的方式，能夠更為精準(zhǔn)的測(cè)定擴(kuò)增產(chǎn)物[3-4]。PCR儀的線性范圍較寬，敏感度高，在范圍內(nèi)定位較為準(zhǔn)確，且能夠反映HBV病毒復(fù)制水平，其靈敏度明顯高于斑點(diǎn)雜交法[5-6]。酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法以抗原、抗體為檢測(cè)對(duì)象，有較長(zhǎng)的“窗口期”，特別是以抗體為檢測(cè)對(duì)象的感染標(biāo)志物，從病毒進(jìn)入體內(nèi)刺激產(chǎn)生抗體，到抗體足以被檢出需要更長(zhǎng)的時(shí)間，因此“窗口期”漏檢是目前酶聯(lián)免疫檢測(cè)最重要的漏檢因素[7-8]。而核酸檢測(cè)技術(shù)是檢測(cè)病原體核酸，與現(xiàn)行的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法相比，核酸檢測(cè)平均可將HBV、HCV和HIV的“窗口期”分別縮短40%、89%和50%。

在本次實(shí)驗(yàn)中，可發(fā)現(xiàn)HBV ELISA漏診率為0.05%（5/10 000），經(jīng)隨訪1個(gè)月后，可發(fā)現(xiàn)為ELISA陽性，5份為EIA（-）NAT（＋）中，大部分定量結(jié)果為＜3.0×104拷貝/ml，其可能為隱秘性HBV感染，因此NAT檢測(cè)存在較大意義。同時(shí)本次實(shí)驗(yàn)中，可發(fā)現(xiàn)ELISA和陽性樣本中拆分結(jié)果是一致的，由此說明，此項(xiàng)檢測(cè)方式具有較高的敏感性，而核酸的HBV-DNA檢出可將乙型肝炎的“窗口期”縮短6～15天，正常情況下，酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)HBsAg檢出平均時(shí)間為56天，NAT與ELISA相比，更靈敏，檢測(cè)的“窗口期”更短[9-10]。

綜上所述，酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)和核酸檢測(cè)技術(shù)均具有診斷意義，但在血液篩查中，核酸檢測(cè)技術(shù)能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)血液傳播的病毒，保證輸血安全性。

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讀者 作者 編者

醫(yī)學(xué)綜述的特點(diǎn)

一、綜合性 綜述要“縱橫交錯(cuò)”，既要以某一專題的發(fā)展為縱線，反映當(dāng)前課題的進(jìn)展；又要從本單位、省內(nèi)、國(guó)內(nèi)到國(guó)外，進(jìn)行橫的比較。只有如此，文章才會(huì)占有大量素材，經(jīng)過綜合分析、歸納整理、消化鑒別，使材料更精練、更明確、更有層次和更有邏輯，進(jìn)而把握本專題發(fā)展規(guī)律和預(yù)測(cè)發(fā)展趨勢(shì)。

二、評(píng)述性 是指比較專門地、全面地、 深入地、系統(tǒng)地論述某一方面的問題，對(duì)所綜述的內(nèi)容進(jìn)行綜合、分析、評(píng)價(jià)，反映作者的觀點(diǎn)和見解，并與綜述的內(nèi)容構(gòu)成整體。一般來說，綜述應(yīng)有作者的觀點(diǎn)，否則就不成為綜述。

三、先進(jìn)性 綜述不是寫學(xué)科發(fā)展的歷史，而是要搜集最新資料，獲取最新內(nèi)容，將最新的醫(yī)學(xué)信息和科研動(dòng)向及時(shí)傳遞給讀者。綜述不應(yīng)是材料的羅列，而是對(duì)親自閱讀和收集的材料，加以歸納、總結(jié)，做出評(píng)論和估價(jià)。并由提供的文獻(xiàn)資料引出重要結(jié)論。

Nucleic Acid Detection Technology and Enzyme-linked Immune Detection Technology in the Initial Application of Comparative Analysis of Blood Screening

LI Xin JI Ling JI Yufan YU Qian Hematology Laboratory, Zhangjiagang Red Cross Blood Station, Zhangjiagang Jiangsu 215600, China

ObjectiveTo compare the application of nucleic acid detection technology and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in blood screening.MethodsA total of 10 000 blood samples from blood donors were collected and tested as three test specimens. The samples were collected and centrifuged in 4 hours. Enzyme-linked immunoassay and nucleic acid detection were performed.ResultsThe results of 10 000 blood samples, NAT (+) 61 samples, NAT (-) 9 939 samples, EIA(+) 57 samples, EIA (-) 9 943 samples, of which 5 samples were EIA(-) NAT (+), and HBV DNA quantitative detection, which can be found in most of the results 3.0×104copies/ml. After the NAT reagent test again, it is still positive.ConclusionNucleic acid detection technique is more valuable in blood screening, it can improve the sensitivity of HBV detection.

nucleic acid detection technology; enzyme-linked immunosorbent assay; blood

R446

A

1674-9308（2017）21-0056-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2017．21．027