翟金曉，崔文，朱軍

（濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，山東濟(jì)寧272067）

咖啡因的中毒、檢測(cè)及其應(yīng)用研究進(jìn)展

翟金曉，崔文，朱軍

（濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，山東濟(jì)寧272067）

咖啡因是茶葉、咖啡豆等天然植物中常見的一種黃嘌呤類生物堿化合物，是世界上使用最為廣泛的精神活性藥物。其在生活中普遍存在，與生命健康關(guān)系緊密，但咖啡因具有成癮性，一旦停用會(huì)出現(xiàn)渾身困乏疲軟、精神萎頓等各種戒斷癥狀，因此被列入國家管制的精神藥品范圍。綜述了近年來關(guān)于咖啡因及其代謝物的研究，總結(jié)了咖啡因的體內(nèi)代謝、毒理作用、檢測(cè)方法及其應(yīng)用等方面內(nèi)容，以期為法醫(yī)毒物及臨床工作者提供參考。

咖啡因；代謝產(chǎn)物；中毒；檢測(cè)；LC-MS/MS；細(xì)胞色素P450酶1A2；肝功能

Abstract:Caffeine is a psychoactive stimulatory alkaloid that naturally exists in plants such as coffee beans，cocoa beans，tea leaves，and cola nuts.Caffeine is the world's most widely used psychoactive substance.It is widespread in people's life and is closely related to life and health.But caffeine is addictive，once stop using it，the objects may have withdrawal symptoms such as faint and weak and spirit withering.Therefore，it is included in the state control of psychotropic drugs. Cases of caffeine poisoning were reported occasionally.In addition，caffeine is the most classic and common probe drugs for studying the activity of CYP1A2 enzyme.Foreign countries have made caffeine as the iconic compound in the study of liver function.Thispaperreviewsthestudiesofcaffeineanditsmetabolites’chemicalcomposition，toxicology，pharmacokinetics，analyzing methods and application in recent years，providing reference for forensic toxicology and clinical peers.

Keywords:caffeine;metabolite;poisoning;analysis;LC-MS/MS;CYPlA2;liver function

咖啡因是茶葉、咖啡豆等天然植物中常見的一種黃嘌呤類生物堿化合物，主要分布于植物的幼嫩組織部位，化學(xué)式為C8H10N4O2，化學(xué)名為l，3，7-三甲基黃嘌呤（137X）[1]?？Х纫蚣兤窞閺?qiáng)烈苦味的白色粉狀物，常用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復(fù)蘇，是世界上使用最為廣泛的精神活性藥物，若長期或大劑量攝入咖啡因會(huì)對(duì)人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成損害，引發(fā)心臟病和高血壓，且咖啡因具有成癮性，一旦停用會(huì)出現(xiàn)渾身困乏疲軟、精神萎頓等各種戒斷癥狀，因此被列入國家管制的精神藥品范圍。此外，咖啡因也是國際奧委會(huì)禁用物質(zhì)中受管制藥物之一。目前，咖啡因類制劑的使用越來越廣泛，常用的咖啡因制劑有感冒靈膠囊、復(fù)方氨酚烷胺片、氨基比林咖啡因片等。含咖啡因的飲料已經(jīng)成為人們?nèi)粘Ｉ钪醒a(bǔ)充能量和抵抗疲勞的主要產(chǎn)品，大多數(shù)功能性飲料中均含有咖啡因。成年人口服咖啡因后，吸收快而完全，生物利用度近100%，大量飲用很可能成癮甚至中毒死亡。近些年，由于攝入過量咖啡因造成的急診搶救、死亡案例日益增多。國內(nèi)外有關(guān)咖啡因的中毒案件也有零星報(bào)道[2-3]。飲入過多能量飲料會(huì)導(dǎo)致失眠、精神緊張、頭痛、焦慮、血壓升高、心跳加快、癲癇發(fā)作，當(dāng)與乙醇混用時(shí)后果更為嚴(yán)重[4]?？Х纫虻闹卸炯皺z測(cè)一直備受人們關(guān)注，在食品安全研究以及法醫(yī)鑒定中均具有重要的意義。本文就咖啡因的體內(nèi)代謝、毒理作用、檢測(cè)方法及其應(yīng)用方面進(jìn)行綜述，以期為咖啡因中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定和臨床診治提供參考。

1 藥理及毒理作用

1.1 藥理作用

咖啡因具有較強(qiáng)的中樞興奮作用，臨床主要用作中樞興奮藥，在機(jī)體的多個(gè)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用[5]。其中對(duì)心血管具有正性作用，小劑量便能產(chǎn)生心率增快、血壓升高等作用[6-7]，還能引起促腎上腺皮質(zhì)激素和皮質(zhì)醇合成的增加。在消化系統(tǒng)方面，可通過興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)的迷走中樞，刺激迷走神經(jīng)胃支，從而引起胃泌酸增加和胃腺分泌亢進(jìn)，也會(huì)刺激胃肥大細(xì)胞釋放組胺，進(jìn)而造成胃壁細(xì)胞泌酸增加[8]。在神經(jīng)系統(tǒng)方面，咖啡因是中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮藥，小劑量就能興奮大腦皮質(zhì)，改善思維活動(dòng)，提高對(duì)外界的感應(yīng)性。大劑量則會(huì)興奮延髓的呼吸中樞和血管運(yùn)動(dòng)中樞，增加呼吸頻率和深度。

1.2 毒理作用

咖啡因大劑量或長期使用會(huì)引起成癮性，可致失眠、激動(dòng)不安、心悸、頭痛；劑量過大可引起驚厥，一旦停用會(huì)出現(xiàn)精神萎頓、渾身乏力等戒斷癥狀。當(dāng)其耐受性增強(qiáng)導(dǎo)致用藥量不斷增加時(shí)，咖啡因還會(huì)引起陣發(fā)性驚厥和骨骼震顫，損害肝、胃、腎等內(nèi)臟器官，誘發(fā)呼吸道炎癥等疾病。孕前和孕期使用咖啡因可致小鼠受孕延遲，胎鼠吸收胎、死胎、FGR發(fā)生率升高[9]。此外，咖啡因會(huì)給胎兒的新陳代謝系統(tǒng)增加負(fù)擔(dān)，同時(shí)還可能減少胎盤血流量，對(duì)胎兒造成傷害?？Х纫虻捏w內(nèi)代謝半衰期較長，又具有成癮性，體內(nèi)容易產(chǎn)生蓄積，若連續(xù)飲用，則易引起蓄積中毒?？Х纫蛟隗w內(nèi)代謝會(huì)產(chǎn)生茶堿，而茶堿類藥物的治療劑量與中毒劑量相當(dāng)接近，其安全范圍窄，極易引起中毒[4]。研究表明，咖啡因與老年人認(rèn)知功能、蛋白質(zhì)病變也有一定關(guān)聯(lián)[10]。

2 咖啡因的體內(nèi)代謝

咖啡因及其相關(guān)制劑口服后主要經(jīng)胃腸道吸收，約15～60 min達(dá)到峰值濃度，此峰值可持續(xù)2 h，由于個(gè)體差異偶有胃排空延遲導(dǎo)致峰值會(huì)有所改變[11-16]?？Х纫蚴紫仁怯尚∧c進(jìn)入門脈循環(huán)，經(jīng)首過消除效應(yīng)，主要由細(xì)胞色素P450酶作用，隨之進(jìn)入全身大循環(huán)。由于咖啡因的首過消除效應(yīng)較弱，所以經(jīng)吸收后能完全地進(jìn)入全身組織并且自由通過血、腦、胎盤、血-睪屏障。人體攝入的咖啡因幾乎都是經(jīng)肝臟代謝，一般咖啡因隔夜就會(huì)被肝臟代謝清除，其中只有不足5%的咖啡因以原形通過腎臟排泄?？Х纫蛟隗w內(nèi)主要是3位脫甲基生成1，7-二甲基黃嘌呤（17X），17X再經(jīng)C8-氧化生成1，7-二甲基尿酸（17U）。其次為7位脫甲基生成1，3-二甲基黃嘌呤（13X），最終生成1，3-二甲基尿酸（13U）。這兩條途徑使得咖啡因排在尿液中的代謝產(chǎn)物多達(dá)十幾種[17]?？诜Х纫蚝?，經(jīng)3-N脫甲基化生成的17X（副黃嘌呤）為主要代謝產(chǎn)物，約占80%，這一步反應(yīng)由藥物代謝酶CYP1A2催化（部分由CYP2E1代謝）。此外，通過1-N脫甲基和7-N脫甲基分別生成的37X（可可堿12%）和13X（膽茶堿7%）分別由藥物代謝酶CYP1A2和CYP2E1催化完成；進(jìn)一步經(jīng)3-N脫甲基化生成1X（1-甲基嘌呤）；17X和1X進(jìn)一步經(jīng)C8羥基化分別生成17U和1U，這兩步反應(yīng)分別由CYP2A6和黃嘌呤氧化酶催化完成[18]。37X為咖啡因的主要活性代謝產(chǎn)物，13X結(jié)構(gòu)與咖啡因相近，但毒性作用卻強(qiáng)于咖啡因，毒性作用時(shí)間也較長?？Х纫虻拇x途徑及其與代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)詳見圖1[19]。

圖1 咖啡因的代謝途徑及其與代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)

3 咖啡因及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法

關(guān)于咖啡因及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)，國內(nèi)外一直有著相關(guān)的研究報(bào)道。一部分研究主要關(guān)注的是咖啡因和幾個(gè)甲基嘌呤代謝產(chǎn)物的檢測(cè)，而另一部分的研究則主要關(guān)注黃嘌呤和尿酸代謝產(chǎn)物的檢測(cè)。目前咖啡因及其代謝物的主要檢測(cè)方法主要有液相色譜法（HPLC）[16，18，20-22]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[23-24]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS）[25-26]，液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法（LC-MS/MS）[27-28]、核磁共振法（NMR）[29]等（表1）。在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中研究多集中在血液、尿液和組織等生物檢材中咖啡因及其代謝物的檢測(cè)[20，30-31]。LC-MS/MS檢測(cè)器靈敏度高，離子篩選能力強(qiáng)，選擇特異性高，可以極好地滿足咖啡因及其代謝產(chǎn)物的同時(shí)檢測(cè)及定量要求，因此越來越多的人采用此技術(shù)來進(jìn)行相關(guān)的研究。對(duì)于生物檢材中痕量咖啡因及其代謝物的同時(shí)檢測(cè)方法是國內(nèi)外研究中沒有突破的一個(gè)問題，目前的檢測(cè)方法沒有全面滿足體內(nèi)檢材的痕量、快速的分析，對(duì)于分析結(jié)果的評(píng)價(jià)和推斷也仍存在缺陷。因此建立LCMS/MS對(duì)人體內(nèi)的咖啡因及其主要代謝產(chǎn)物的定性定量方法實(shí)屬必要。已有研究表明血液與唾液中咖啡因含量呈線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.943（p<0.001）[32]，因此，也可考慮根據(jù)唾液咖啡因濃度的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行血藥濃度的推斷，更有利于在實(shí)際工作中的現(xiàn)場檢測(cè)和法醫(yī)學(xué)鑒定。

表1 咖啡因及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法

4 咖啡因檢測(cè)相關(guān)應(yīng)用

4.1 在肝功能評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

N-乙?；D(zhuǎn)移酶（N-acetyltransferase，NAT2）、細(xì)胞色素P450酶1A2（Cytochrome P4501A2，CYPlA2）和黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）在藥物代謝以及前致癌物激活的過程中均起著重要的作用，這些酶的活性與很多藥物的療效或毒性以及某些腫瘤的易感性密切相關(guān)，它們的不同活性狀態(tài)的存在對(duì)于化學(xué)物質(zhì)的體內(nèi)轉(zhuǎn)化必定產(chǎn)生一定的影響。因此，對(duì)上述藥物代謝酶活性的測(cè)定有助于藥物療效的預(yù)測(cè)、藥物毒副反應(yīng)的預(yù)防以及臨床個(gè)體化的合理用藥[22]。其中，CYP450酶是藥物在人體內(nèi)氧化代謝過程中最主要的酶，其活性檢測(cè)在肝功能評(píng)估中的作用受到越來越多的重視，CYP1A2酶是CYP家族主要成員之一，約占肝臟總CYP酶的13%，并且CYP1A2酶只在肝臟內(nèi)表達(dá)。CYP1A2酶活性與肝臟代謝功能緊密相關(guān)，其活性的大小在一定程度上可直接反映肝臟的儲(chǔ)備功能。目前評(píng)估CYP1A2酶的活性主要依靠藥物探針法，因此選擇一種合適、有效的探針?biāo)幬镏陵P(guān)重要。常用的探針?biāo)幬镏饕ǚ悄俏鞫?、咖啡因、茶堿等，其中咖啡因的體內(nèi)攝入幾乎均由肝臟代謝，約90%的咖啡因是由CYPlA2酶轉(zhuǎn)化代謝的[33]，且咖啡因還能夠增加其活性，因此常常通過檢測(cè)咖啡因的代謝產(chǎn)物或計(jì)算咖啡因的代謝率來判斷CYP1A2酶活性水平。另外，由于咖啡因是人類生活中廣泛接觸的外源物質(zhì)且咖啡因的安全性高，也常被用作測(cè)定XO和NAT2活性的探針?biāo)幬?。?yīng)用咖啡因來分析NAT2是近年來發(fā)展起來的新方法，與其他探針?biāo)幬锵啾瓤Х纫驔]有不良反應(yīng)，受試者易于接受。因此，咖啡因是目前研究CYP1A2酶活性最經(jīng)典、最常用的探針?biāo)幬铩，F(xiàn)已有通過對(duì)人體內(nèi)的咖啡因及其主要代謝產(chǎn)物的定性定量分析來判斷CYPlA2等代謝酶活性評(píng)估的報(bào)道[16，21]，從而對(duì)其肝功能進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，為臨床診斷及法醫(yī)鑒定提供指導(dǎo)意義。用咖啡因代謝指數(shù)評(píng)估體內(nèi)藥物代謝酶活性一般采用尿液中的咖啡因代謝產(chǎn)物的比率（CMRs）來評(píng)估藥物代謝酶活性，包括CYPlA2、CYP2A6、NAT2、XO[16]。也可測(cè)定咖啡因5種主要代謝產(chǎn)物，采取不同的代謝物比率及組合來反映NAT2、CYPlA2和XO這三種酶在體內(nèi)的活性水平[22]。

4.2 在中毒案件中的應(yīng)用

咖啡因成人口服致死量一般為10 g，中毒血濃度為15～60 μg/mL，致死血濃度為80 μg/mL[34]。相關(guān)案例多有報(bào)道，如，某女在出租房被發(fā)現(xiàn)昏迷，劇烈抽搐，多汗，呼吸急促，經(jīng)醫(yī)院搶救無效死亡，現(xiàn)場勘查發(fā)現(xiàn)死者手提包中有一氨基比林咖啡因片（100片）空藥瓶。毒物檢驗(yàn)心血中檢出氨基比林、咖啡因和安乃近，含量分別為788.1、340.4、270.5 μg/mL[2]。另Banerjee P等[35]報(bào)道的咖啡因多例中毒死亡案例，一名57歲男性，心血中檢測(cè)出咖啡因濃度為180μg/mL，一名39歲女性，檢測(cè)出心血中咖啡因濃度為90μg/mL等。案例中死者心血中咖啡因含量均達(dá)到致死量，結(jié)合中毒癥狀及尸體解剖病理特征，可判斷為咖啡因中毒死亡。功能性飲料濫用成癮案例也偶有報(bào)道，如，某男12歲，因大量飲用可樂飲料，并反復(fù)出現(xiàn)戒斷癥狀入院治療。此人約兩年前飲用可樂量開始增大，由開始的每天3瓶（600/mL/瓶），增至平均每天10瓶，最大量每天15瓶。期間伴有記憶力下降、反應(yīng)遲鈍、便秘等癥狀，停飲可樂后，出現(xiàn)頭痛、腹痛、惡心嘔吐、失眠、易激惹等癥狀，再次飲用可樂后，上述不適很快消失[3]，診斷為可樂依賴，中樞性尿崩癥。臨床中發(fā)現(xiàn)，絕大部分濫用止咳藥水的青少年早期有將止咳藥水和可樂合并濫用的現(xiàn)象，即所謂的“搖頭水”濫用，更容易成癮。統(tǒng)計(jì)市售含咖啡因飲品的咖啡因含量數(shù)據(jù)并加以標(biāo)識(shí)，簡便高效地監(jiān)控長期飲用者體內(nèi)咖啡因含量，及時(shí)給予介入治療，可為合理飲用功能飲料提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，為人類健康生活提供指示信息。

5 研究展望

綜上所述，目前咖啡因的體內(nèi)代謝過程及其主要代謝產(chǎn)物的研究已有一些報(bào)道，咖啡因及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)技術(shù)和手段也在不斷地提高和改進(jìn)。建立快捷、準(zhǔn)確、高靈敏度的多種飲品及生物檢材中咖啡因定性定量分析方法，在食品安全研究以及法醫(yī)鑒定中均具有重要的意義，為臨床診斷及法醫(yī)學(xué)鑒定實(shí)踐中咖啡因中毒案件的取材及檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)提供指導(dǎo)信息。

此外，在臨床應(yīng)用及法醫(yī)鑒定工作中，咖啡因作為經(jīng)典的肝功能探針?biāo)幬镆苍诓粩嗟谋粡V泛研究，可通過咖啡因的代謝指數(shù)來評(píng)估CYPlA2、NAT2、CYP2A6和XO等藥物代謝酶活性，從而對(duì)肝功能進(jìn)行診斷評(píng)估，使得咖啡因及其代謝產(chǎn)物在科研中的應(yīng)用也隨著技術(shù)的發(fā)展而得到逐步的開發(fā)推廣。

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（本文編輯：施妍）

Recent Advances on the Study of the Poisoning，Analysis and Application of Caffeine

ZHAI Jin-Xiao，CUI Wen，ZHU Jun
（Institute of Forensic Medicine and Laboratory Medicine，Jining Medical University，Jining 272067，China）

DF795.1

A

10.3969/j.issn.1671-2072.2017.05.005

1671-2072-（2017）05-0030-06

2017-05-18

濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院青年教師科研扶持基金（JY2016KJ036Y）

翟金曉（1989—），女，助教，碩士，主要從事法醫(yī)毒物分析研究。E-mail:zhaijinxiao@126.com。

崔文（1961—），男，教授，主要從事法醫(yī)病理學(xué)與司法鑒定管理工作。E-mail:cuiwenmdd@163.com。