李軍偉 李小偉 秦磊

1.平頂山市疾病預(yù)防控制中心 河南 平頂山 467000；2.平頂山市中醫(yī)院 河南 平頂山 467000；3.鄭州安圖生物工程股份有限公司 河南 鄭州 450000)

兩種顯色平板在耐藥菌篩查方面的性能對(duì)比研究

李軍偉1李小偉2秦磊3

1.平頂山市疾病預(yù)防控制中心 河南 平頂山 467000；2.平頂山市中醫(yī)院 河南 平頂山 467000；3.鄭州安圖生物工程股份有限公司 河南 鄭州 450000)

目的對(duì)比分析兩種顯色平板在耐藥菌篩查方面的性能。方法將MRSA、VRE和KPC的標(biāo)準(zhǔn)菌株及MSSA、萬(wàn)古霉素敏感的腸球、不產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶的腸桿菌科細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株和583例痰、尿臨床樣本分別接種至兩種顯色平板及血平板，觀察對(duì)比其生長(zhǎng)、顯色、檢測(cè)結(jié)果及標(biāo)準(zhǔn)方法。結(jié)果接種標(biāo)準(zhǔn)菌株時(shí)，兩種平板相當(dāng)；583例臨床樣本檢測(cè)，兩廠(chǎng)家MRSA培養(yǎng)基檢出20例MRSA，其中4例假陽(yáng)性；安圖VRE培養(yǎng)基檢出VRE3例，科馬嘉檢出4例，其中2例真陽(yáng)性；兩種KPC培養(yǎng)基檢出22例KPC，結(jié)果一致。結(jié)論兩種耐藥菌篩查顯色培養(yǎng)基靈敏度高，快速、簡(jiǎn)便易行，其中安圖VRE培養(yǎng)基在VRE篩查陽(yáng)性預(yù)期值高，其聯(lián)檢的產(chǎn)品形式可降低成本、提高效率，值得廣大醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用?！?/p>

】 顯色培養(yǎng)基；MRSA；VRE；KPC；篩查

抗生素的不合理使用及細(xì)菌耐藥性是全球共同關(guān)注的社會(huì)公共衛(wèi)生問(wèn)題。近年來(lái)，耐藥菌檢出率不斷增加，增加臨床治療難度。2015年中國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)的數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)MRSA的耐藥率已達(dá)到35.8%，全國(guó)糞腸球菌萬(wàn)古霉素耐藥率達(dá)0.9%，屎腸球菌萬(wàn)古霉素耐藥率為2.9%，肺炎克雷伯菌亞胺培南耐藥檢出率為6.8%，較2014年的4.8%有明顯增加[1]。本研究旨在對(duì)比分析兩種顯色平板在耐藥菌篩查方面的性能，具體如下。

1 材料與方法

1.1菌株與樣本金黃色葡球菌(ATCC43300)、糞腸球菌(ATCC51299)、肺炎克雷伯菌(ATCCBAA-1705)、金黃色葡萄球菌(ATCC29213)、糞腸球菌(ATCC29212)、大腸埃希氏菌(ATCC25922)和白色念珠菌(ATCC10231)等標(biāo)準(zhǔn)菌株來(lái)自河南省疾病控制預(yù)防中心，痰、尿液樣本來(lái)自平頂山市中醫(yī)院。

1.2試劑與儀器法國(guó)科馬嘉MRSA顯色培養(yǎng)基(批號(hào)：P000278)、VRE顯色培養(yǎng)基(批號(hào)：P000396)和KPC顯色培養(yǎng)基(批號(hào)：P000369)購(gòu)自上海欣中科技有限公司，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求配置，國(guó)產(chǎn)MRSA-VRE-KPC顯色平板、血瓊脂平板、MH平板、E-Test藥敏條購(gòu)自鄭州安圖綠科生物制品有限公司，全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀Vitek2購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃，雙人雙面凈化工作臺(tái)SW-CJ-2F購(gòu)自蘇州凈化設(shè)備有限公司。

1.3培養(yǎng)方法標(biāo)準(zhǔn)菌株以1 ml生理鹽水溶解后，經(jīng)接種血平板活化后，挑取單菌落，分別三區(qū)劃線(xiàn)接種至兩廠(chǎng)家顯色平板，置于35～37 ℃溫箱培養(yǎng)18～24 h，觀察對(duì)比細(xì)菌生長(zhǎng)情況；兩種類(lèi)型樣本按照傳統(tǒng)方法接種至顯色平板及血平板，培養(yǎng)后記錄兩廠(chǎng)家顯色平板上耐藥菌生長(zhǎng)情況。標(biāo)準(zhǔn)方法是將樣本、菌株接種于血平板，將分離到的單菌落進(jìn)行菌株鑒定及MIC值測(cè)定。對(duì)比所有耐藥結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，定性資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MRSA、VRE和KPC在兩廠(chǎng)家平板上的顯色情況：MRSA在安圖和科馬嘉MRSA顯色平板上顯色色系一致，均為紅色；產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌與大腸埃希氏菌在安圖、科馬嘉KPC顯色平板上顯色色系一致，分別為藍(lán)色和紅色；VRE在安圖VRE顯色培養(yǎng)基上呈綠色，而在科馬嘉VRE培養(yǎng)基上呈紅色。白色念珠菌在兩廠(chǎng)家的3種培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)。不產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶的大腸埃希氏菌在安圖的3種顯色培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)，但在科馬嘉的MRSA培養(yǎng)基上有1區(qū)抑制性生長(zhǎng)。金黃色葡萄球菌ATCC29213在科馬嘉3種培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)，但在安圖的MRSA培養(yǎng)基上有1區(qū)呈抑制性生長(zhǎng)。萬(wàn)古霉素敏感的糞腸球菌在兩廠(chǎng)家的MRSA和VRE培養(yǎng)基上均呈抑制性生長(zhǎng)，不產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌在兩廠(chǎng)家的KPC培養(yǎng)基上呈抑制性生長(zhǎng)，結(jié)果一致。

288份痰液樣本中，MRSA顯色培養(yǎng)基安圖與科馬嘉均檢出16例MRSA，而傳統(tǒng)培養(yǎng)加青霉素E-test藥敏條法檢出MRSA 14例，安圖和科馬嘉兩廠(chǎng)家產(chǎn)品MRSA培養(yǎng)基和KPC培養(yǎng)基性能一致；VRE培養(yǎng)基：安圖檢出2例VRE，科馬嘉檢出3例VRE，經(jīng)確認(rèn)其中1例為真陽(yáng)性，其余均為假陽(yáng)性；KPC培養(yǎng)基：安圖和科馬嘉均檢出14例產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶的大腸埃希氏菌及肺炎克雷伯菌，與傳統(tǒng)培養(yǎng)加改良Hodge試驗(yàn)結(jié)果一致。295份尿液樣本中，MRSA顯色培養(yǎng)基安圖與科馬嘉均檢出4例MRSA，而血平板培養(yǎng)加鑒定方法檢出MRSA 3例，兩廠(chǎng)家產(chǎn)品性能一致；VRE培養(yǎng)基：安圖和科馬嘉均檢出同1例VRE，與參比方法一致；KPC培養(yǎng)基：安圖和科馬嘉均檢出8例產(chǎn)KPC型碳青霉烯酶的大腸埃希氏菌及肺炎克雷伯菌，與傳統(tǒng)培養(yǎng)加改良Hodge試驗(yàn)結(jié)果一致。安圖VRE特異性99.8%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值66.7%，科馬嘉VRE培養(yǎng)基特異性99.7%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為50%。兩廠(chǎng)家VRE培養(yǎng)基性能比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.015，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩種培養(yǎng)基上檢出MRSA-VRE-KPC情況比較(n)

3 討論

中國(guó)《多重耐藥菌醫(yī)院感染預(yù)防與控制技術(shù)指南(試行)》提及，主動(dòng)篩查可及時(shí)發(fā)現(xiàn)、早期診斷耐藥菌的定植或感染[2]，可將防控關(guān)卡前移，對(duì)預(yù)防和控制多重耐藥菌在院內(nèi)的傳播具有重要意義。在荷蘭，嚴(yán)格的篩查及隔離措施使金葡菌的耐藥率控制在1.3%左右[3]；2008年美國(guó)CDC指南建議MRSA的快速篩查應(yīng)用于爆發(fā)和MRSA高流行地區(qū)的感染控制。

兩廠(chǎng)家的MRSA和KPC顯色培養(yǎng)基性能一致，具有靈敏度高的特點(diǎn)，但在兩廠(chǎng)家VRE培養(yǎng)基檢出的假陽(yáng)性均為耐萬(wàn)古霉素的革蘭陰性桿菌，該菌具有檢測(cè)腸球菌的某同種酶活性，因而顯色平板上和腸球菌呈現(xiàn)同樣的顏色，但是菌落較腸球菌大且濕潤(rùn)。從樣本中分離3例假陽(yáng)性在兩廠(chǎng)家顯色平板上均顯紅色的菌，均為耐甲氧西林葡萄球菌屬細(xì)菌，但鑒定為非金葡菌。

目前，PCR技術(shù)檢測(cè)耐藥基因的方法快速較準(zhǔn)確，如meca基因?yàn)闄z測(cè)MRSA的金標(biāo)準(zhǔn)方法，甚至可以從樣本中直接檢測(cè)到MRSA，但該基因是否表達(dá)，表達(dá)水平的高低未知，并非所有的耐藥機(jī)制都和基因相關(guān)，且在醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展PCR的成本高[4-5]?；趥鹘y(tǒng)培養(yǎng)方法進(jìn)行耐藥菌的檢測(cè)方法，受分離培養(yǎng)鑒定藥敏的流程所限，耗時(shí)長(zhǎng)達(dá)48～72 h，漏檢率高，且不利于耐藥菌引發(fā)院內(nèi)感染的有效預(yù)防和控制管理。雖某些自動(dòng)化鑒定藥敏分析儀在細(xì)菌鑒定藥敏的同時(shí)，可報(bào)告測(cè)試菌的耐藥機(jī)制，比CLSI推薦的MRSA、VRE等篩查及確認(rèn)試驗(yàn)快速，但在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，其并不能發(fā)現(xiàn)低水平耐藥[6]。使用顯色平板，靈敏度高，尤其對(duì)常見(jiàn)多重耐藥菌的聯(lián)合檢測(cè)，可快速發(fā)現(xiàn)待測(cè)樣本中耐藥菌的存在，18～24 h即可出結(jié)果，較傳統(tǒng)方法快24～48 h；提供流行病學(xué)數(shù)據(jù)并制定合理的干預(yù)措施，有效控制耐藥菌院內(nèi)感染的爆發(fā)。而國(guó)產(chǎn)的耐藥菌篩查平板性能與進(jìn)口的培養(yǎng)基相當(dāng)，安圖VRE培養(yǎng)基的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較好，且聯(lián)檢的產(chǎn)品形式利于不同種類(lèi)多重耐藥菌的快速發(fā)現(xiàn)，可降低成本、提高工作效率，臨床應(yīng)用價(jià)值高。

綜上所述，兩種耐藥菌篩查顯色培養(yǎng)基靈敏度高，快速、簡(jiǎn)便易行，其中安圖VRE培養(yǎng)基在VRE篩查陽(yáng)性預(yù)期值高，其聯(lián)檢的產(chǎn)品形式可降低成本、提高效率，值得廣大醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用。

[1] 國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委合理用藥專(zhuān)家委員會(huì),全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng).2015年全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)報(bào)告[J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師,2016,(3):3-8.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.多重耐藥菌醫(yī)院感染預(yù)防與控制技術(shù)指南(試行)[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué),2011,23(2):65.

[3] Ravensbergen S J, Berends M, Stienstra Y, et al. High prevalence of MRSA and ESBL among asylum seekers in the Netherlands[J].Plos One,2017,12(4):e0176481.

[4] Palavecino E L. Rapid methods for detection of MRSA in clinical specimens[J].Methods Mol Biol,2014,1085:71-83.

[5] 姚杰,徐元宏.耐萬(wàn)古霉素腸球菌的耐藥機(jī)制及耐藥基因調(diào)控的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè)),2010,31(1):24-28.

[6] 楊傳松,肖金,陳玲,等.新生兒重癥監(jiān)護(hù)室耐藥菌篩查及臨床意義[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,32(1):79.

R 446.5doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2017.18.112

2016-12-15)