陳雯青

(上海必諾檢測技術(shù)服務(wù)有限公司，上海 200436)

油料作物及其油脂制品中草除靈殘留量的檢測

陳雯青

(上海必諾檢測技術(shù)服務(wù)有限公司，上海 200436)

為建立一種氣相色譜法測定油料作物及其油脂制品中草除靈殘留量的檢測方法,以正己烷飽和的乙腈為提取試劑，用乙腈飽和的正己烷進(jìn)行脫脂，再用弗羅里硅土小柱進(jìn)行凈化，采用具電子捕獲檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行測定。結(jié)果表明：草除靈的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)可達(dá)0.999，樣品加標(biāo)回收率為91.2%～122.7%、變異系數(shù)為2.23%～8.16%、方法檢出限為0.005 mg/kg。該方法的前處理技術(shù)適用于油料作物及其油脂制品，能夠準(zhǔn)確、靈敏、簡便、快速地測定草除靈殘留量。

草除靈；氣相色譜儀；油料作物；油脂制品

草除靈(benazolin ethyl)，化學(xué)名稱為4-氯-2-氧化苯并噻唑-3-基乙酸乙酯(C11H10ClNO3S)，相對分子質(zhì)量為271.7，別名有好實(shí)多、高特克、Cornox、Cwk、Ley Cornox 等，無色結(jié)晶，熔點(diǎn)79.2 ℃，20 ℃時(shí)在水中的溶解度為0.047%，在酸性和中性環(huán)境下穩(wěn)定，在堿性條件下易分解，熱穩(wěn)定性好[1]。草除靈是一種選擇性芽后有機(jī)環(huán)類除草劑，屬中等毒性，具有內(nèi)吸、傳導(dǎo)作用[2]，施藥后植物通過葉片吸收輸導(dǎo)到整個(gè)植物體，作用方式同2-甲-4-氯丙酸，相比藥效發(fā)揮緩慢。其特點(diǎn)不僅在于對闊葉雜草有效，更重要的是對油菜有較高安全性。它在中國油菜田區(qū)被長期使用，在歐洲、南美洲等油菜產(chǎn)區(qū)也被廣泛使用。

草除靈在長期使用過程中，在植株、土壤和水體中有一定的沉積，對環(huán)境造成污染，且污染物成分復(fù)雜、毒性大[3]。草除靈對人畜低毒，大鼠急性口服LD50>3 000 mg/kg，兔急性經(jīng)皮LD50>2 000 mg/kg。GB 2763—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中對草除靈的最大殘留限量作出了規(guī)定：油菜籽中<0.2 mg/kg，但沒有規(guī)定相應(yīng)的檢測標(biāo)準(zhǔn)，目前中國也沒有檢測草除靈殘留量的標(biāo)準(zhǔn)。近年來，雖有文獻(xiàn)[4-6]報(bào)道草除靈的液相、氣相檢測方法，但未見適用于油料作物及其油脂制品中草除靈殘留量分析的報(bào)道。就食品檢測而言，樣品前處理技術(shù)是非常重要的環(huán)節(jié)，需要根據(jù)被檢樣品的狀態(tài)、樣品中雜質(zhì)的理化性質(zhì)、目標(biāo)化合物的化學(xué)性質(zhì)、目標(biāo)化合物在樣品中的存在形式、檢測分析儀器方法等多種因素來考量，同時(shí)還要考慮該方法的準(zhǔn)確度、靈敏度、精確度等方法學(xué)參數(shù)。

為探尋一種適用于油料作物及其油脂制品中草除靈殘留量的測定方法，本研究擬用液液分配及吸附劑凈化的前處理手段，結(jié)合具電子捕獲檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行測定，通過考察提取試劑、吸附劑等條件對樣品加標(biāo)回收率的影響，以期為測定油料作物及其油脂制品中草除靈殘留量提供一種快速、準(zhǔn)確的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

乙腈、正己烷、丙酮：色譜純，美國西格瑪公司；

試驗(yàn)用水：去離子水；

弗羅里硅土固相萃取小柱：1 g/6 mL，美國安捷倫科技公司；

草除靈標(biāo)準(zhǔn)對照品：純度99.5%，德國Dr. Ehrenstorfer公司；

草除靈標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 mg/mL)：精確稱取草除靈標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，用乙腈溶解并定容到25 mL容量瓶中，搖勻后，在0 ℃以下避光保存6個(gè)月；

標(biāo)準(zhǔn)工作液：移取1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)中間液，在0 ℃以下避光保存3個(gè)月，準(zhǔn)確移適量取標(biāo)準(zhǔn)中間液，用乙腈配制成不同濃度系列的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(用時(shí)現(xiàn)配)。

1.2 儀器和設(shè)備

氣相色譜儀：Agilent7890型，配電子捕獲檢測器，美國安捷倫科技公司；

高速冷凍離心機(jī)：Sorvall ST16R型，美國熱電公司；

勻漿機(jī)：JJ-2型，金壇市城西崢嶸實(shí)驗(yàn)儀器廠；

漩渦振蕩器：Basic Vortex Mixer型，美國Talboys公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：IKA RV 10 digital型，德國艾卡集團(tuán)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理 稱取4 g油料作物的粉碎樣品，樣品中加入20 mL正己烷飽和的乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min，加入10 mL乙腈飽和的正己烷，劇烈振蕩1 min，5 000 r/min離心5 min，棄去正己烷層。再加入10 mL乙腈飽和的正己烷，重復(fù)2次。準(zhǔn)確吸取10 mL乙腈層，50 ℃水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入2.5 mL正己烷，蓋上鋁箔，待凈化。

稱取2 g油脂制品，加入10 mL乙腈飽和的正己烷，在漩渦振蕩器上快速混勻以充分溶解油樣，加入10 mL正己烷飽和的乙腈，于漩渦振蕩器上混勻2 min，5 000 r/min離心5 min；用膠頭吸管將乙腈層轉(zhuǎn)入另一離心管；再用20 mL正己烷飽和的乙腈分別提取2次，合并乙腈層；加入10 mL乙腈飽和的正己烷，劇烈振蕩1 min，棄去正己烷層。乙腈層50 ℃水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入2.5 mL正己烷，蓋上鋁箔，待凈化。

將弗羅里硅土小柱依次用5.0 mL丙酮+正己烷(體積比為1∶9)、5.0 mL正己烷預(yù)淋洗，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入上述待凈化溶液，用15 mL刻度離心管接收洗脫液，用3 mL丙酮+正己烷(體積比為1∶9)沖洗燒瓶后淋洗弗羅里硅土小柱，并重復(fù)2次。將盛有淋洗液的離心管置于氮吹儀上，在水浴溫度50 ℃條件下，氮吹蒸發(fā)至小于2 mL，用正己烷定容至2.0 mL，在漩渦振蕩器上混勻，移入自動進(jìn)樣器樣品瓶中，制得待測液。

1.3.2 氣相色譜分析條件 色譜柱：DB-5毛細(xì)管色譜柱(長度30 m×內(nèi)徑0.25 mm，膜厚0.25 μm)；載氣：高純氮，純度>99.99%；載氣流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣器溫度：220 ℃；檢測器溫度：300 ℃；柱溫箱溫度： 初始溫度100 ℃，以10 ℃/min 升溫至200 ℃保持5 min,以15 ℃/min 升溫至270 ℃保持20 min。

1.3.3 結(jié)果計(jì)算 試樣中草除靈的含量按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

X——草除靈含量，mg/kg；

c——草除靈的濃度，μg/mL；

V——最終定容體積，mL；

m——試樣質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法選擇

2.1.1 提取方法的選擇 油料作物及其油脂制品的很多基質(zhì)成分都和農(nóng)藥有相似的性質(zhì)，傳統(tǒng)溶劑無法將分析物和基質(zhì)分開[7]。選用甲醇、二氯甲烷、乙醇、石油醚、乙腈5種傳統(tǒng)溶劑及正己烷飽和的乙腈對油菜籽和菜籽油中的草除靈進(jìn)行提取試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：采用甲醇、二氯甲烷提取，提取液雜質(zhì)較多，干擾草除靈的測定；采用乙醇提取，回收率稍差(70%～80%)；采用石油醚提取，石油醚和油樣互溶無法提取；采用乙腈提取，乙腈本身與油脂不相溶，無法與油脂充分接觸，不能完全提取樣品中的草除靈；采用正己烷飽和的乙腈作為提取試劑，正己烷既能很好地溶解脂肪，又能溶解脂肪中的草除靈，再結(jié)合乙腈不溶脂肪的特點(diǎn)，利用相似相溶的原理，能很好地將正己烷中的草除靈提取到乙腈中，并且可以有效消除大部分的脂質(zhì)效應(yīng)。同時(shí)，采用乙腈飽和的正己烷進(jìn)行多次液液分配，以去除樣品提取液中微量的脂類雜質(zhì)。

2.1.2 凈化方法的選擇 弗羅里硅土作為氧化鎂復(fù)合的極佳硅膠吸附劑(硅鎂吸附劑)，適用于從非極性基質(zhì)中吸附極性化合物，具有高吸附容量、高靈敏度、方便耐用和穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)[8]。本試驗(yàn)采用弗羅里硅土固相萃取小柱進(jìn)行樣品的凈化，可以有效去除油菜籽等樣品中37.5%～46.3%油脂，24.6%～32.4%蛋白質(zhì)之外的1.0%左右的磷脂，以及芥酸等雜質(zhì)。這些極性雜質(zhì)在氣相色譜法測定時(shí)容易產(chǎn)生較大的基質(zhì)效應(yīng)，有效的凈化才能保證準(zhǔn)確的分析數(shù)據(jù)。試驗(yàn)中選擇丙酮+正己烷、丙酮+石油醚、乙酸乙酯+正己烷、乙酸乙酯+石油醚4種洗脫試劑，以不同配比混合后進(jìn)行比較，結(jié)果見圖1。由圖1可知：相同配比下采用丙酮+正己烷洗脫效果最佳，而不同體積比的丙酮+正己烷中，體積比1∶9時(shí)洗脫效果最佳。

圖1 洗脫試劑對洗脫效果的影響

2.2 儀器條件選擇

本試驗(yàn)采用具電子捕獲檢測器的氣相色譜儀分析草除靈殘留量。電子捕獲檢測器利用一個(gè)放射源轟擊物質(zhì)組分，使物質(zhì)離子逃逸之后再被檢測，因此它僅對那些能俘獲電子，具有電負(fù)性的化合物有信號，并且樣品電負(fù)性越強(qiáng)，給出的信號越大[9]。草除靈的結(jié)構(gòu)式為C11H10ClNO3S，在具電子捕獲檢測器的氣相色譜儀上有很高的響應(yīng)。分別采用恒溫色譜分析和程序升溫色譜分析進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用恒溫色譜分析得到的峰形扁平，不利于定量分析，而采用程序升溫色譜分析能得到較好的峰形。比較幾種不同升溫程序發(fā)現(xiàn)，采用初始溫度100 ℃，以10 ℃/min升溫至200 ℃保持5 min，以15 ℃/min 升溫至270 ℃保持20 min的升溫程序時(shí)，得到峰形最佳。在此儀器條件下，草除靈典型氣相色譜圖見圖2(圖中草除靈標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.05 μg/mL，草除靈-1和草除靈-2分別為草除靈的2個(gè)異構(gòu)體)。

圖2 草除靈典型氣相色譜圖

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 線性范圍考察 將草除靈標(biāo)準(zhǔn)中間溶液制得為0.000，0.005，0.010，0.050，0.100，0.300 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作濃度，并進(jìn)行測定。以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測組分峰面積為縱坐標(biāo)，對照溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖3)，得到線性方程為y=66 864x+28.76，相關(guān)系數(shù)為0.999。

2.3.2 方法的靈敏度分析 將空白樣品按相同步驟處理后，經(jīng)測定表明空白樣品對所測分析物無干擾。在空白樣品中添加接近于空白值的濃度標(biāo)樣，重復(fù)測定得到平均信號。由基質(zhì)空白所產(chǎn)生的儀器背景信號的3倍值的相應(yīng)量來驗(yàn)證方法的靈敏度，草除靈的最低檢測限(LOD)為0.005 mg/kg。

2.3.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度分析 選取油菜籽、菜籽油兩類樣品，按本研究確定的方法，分別對0.01，0.05，0.10 mg/kg 3個(gè)水平做回收率試驗(yàn)，各水平平行測定6次?？瞻讟悠泛图訕?biāo)樣品的氣相色譜圖見圖4、5。加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見表1，由表1可知，回收率為91.2%～122.7%，變異系數(shù)為2.23%～8.16%，說明該方法準(zhǔn)確度較高、精密度較好。

圖3 草除靈標(biāo)樣濃度與峰面積的線性關(guān)系圖

圖4 空白樣品的氣相色譜圖

圖5 加標(biāo)樣品的氣相色譜圖

樣品添加量/(mg·kg-1)檢出量/(mg·kg-1)回收率/%平均回收率/%變異系數(shù)/%0.010.0098^0.012398.2^122.7111.78.16油菜籽0.050.0489^0.052797.9^105.4101.62.590.100.0986^0.107898.6^107.8103.43.100.010.0097^0.011496.5^114.2105.66.91菜籽油0.050.0456^0.051391.2^102.695.74.580.100.0961^0.102196.1^102.198.42.23

2.4 實(shí)際樣品測定

選取3種不同產(chǎn)地油菜籽、3種不同品牌菜籽油，采用本研究方法進(jìn)行草除靈殘留量的檢測，結(jié)果見表2。由表2可知，草除靈殘留量均低于GB 2763—2016中限量要求，說明測定的6種樣品質(zhì)量較好。

表2 草除靈殘留量試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了一種適用于油料作物及其油脂制品中草除靈殘留量測定的方法，以正己烷飽和的乙腈為提取試劑，用乙腈飽和的正己烷進(jìn)行脫脂，再用弗羅里硅土小柱進(jìn)行凈化，采用具電子捕獲檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行測定，該方法前處理簡單快速、成本低廉、凈化完全，能夠獲得較好的回收率和較低的檢出限，為測定油料作物及其油脂制品中草除靈殘留量提供一種準(zhǔn)確、靈敏、簡便的檢測方法。本試驗(yàn)研究過程中，采集樣品的數(shù)量有限，還需要搜集不同產(chǎn)地的油菜籽和不同品牌的菜籽油作進(jìn)一步的研究。

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Benazolin residues detection in oil-bearing crops and its products

CHENWen-qing

(ShanghaiBinoTestingServiceCo.,Ltd,Shanghai200436,China)

A detection method was developed for benazolin residues in oil-bearing crops and its products. The oil-bearing crops and its products were extracted with acetonitrile saturated by n-hexane, degreased with n-hexane saturated by acetonitrile, and refined with Florisil SPE column in order to prepare test liquids. The test liquids were analyzed by gas chromatography with electron capture detector for getting the benazolin residues in oil-bearing crops and its products.The liner relation of benazolin was good and the correlation coefficient was 0.999.The recovery rates of benazolin were between 91.2%～122.7%. The variation coefficients were between 2.23%～8.16%. The limit of detection (LOD) of benazolin was 0.005 mg/kg. The pretreatment technology of the method is suitable for oil-bearing crops and its products. This method could be accurate, sensitive, simple and rapid determination of operating benazolin residues.

benazolin; gas chromatograph; oil-bearing crops; containing oil products

陳雯青(1983—)，女，上海必諾檢測技術(shù)服務(wù)有限公司工程師，本科。E-mail：bino_cwq@126.com

2017—05—04

10.13652/j.issn.1003-5788.2017.07.015