李 穎，尹良偉，劉基巍，劉 鵬

(1. 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 腫瘤一科, 遼寧 大連 116011；2. 大連醫(yī)科大學(xué)附屬大連市中心醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科三病房, 遼寧 大連 116021)

論 著

多西他賽對(duì)乳腺癌細(xì)胞中Cav-1表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響

李 穎1，尹良偉2，劉基巍1，劉 鵬2

(1. 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 腫瘤一科, 遼寧 大連 116011；2. 大連醫(yī)科大學(xué)附屬大連市中心醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科三病房, 遼寧 大連 116021)

目的 研究多西他賽對(duì)乳腺癌細(xì)胞中Cav-1(Cav-1)表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響。方法 通過(guò)Real-time PCR和Western-blot檢測(cè)不同濃度多西他賽作用下乳腺癌細(xì)胞MCF-7中Cav-1的表達(dá)情況；野生型MCF-7細(xì)胞株為對(duì)照組,通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)建立Cav-1 過(guò)表達(dá)的MCF-7細(xì)胞株(轉(zhuǎn)染組)及空載體的MCF-7細(xì)胞株(空載體組)，利用CCK-8比色法分析多西他賽對(duì)各組細(xì)胞增殖的影響。通過(guò)Western-blot分別檢測(cè)多西他賽作用下各組細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2的表達(dá)情況以及PI3K/AKT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化情況。結(jié)果 在5～40 μg/mL濃度范圍內(nèi)，隨著多西他賽作用濃度的增大，MCF-7細(xì)胞中Cav-1的蛋白表達(dá)量逐漸增加。不同濃度多西他賽對(duì)MCF-7細(xì)胞的增殖均有明顯的抑制作用；在同一濃度多西他賽作用下，轉(zhuǎn)染Cav-1組細(xì)胞的增殖抑制率明顯高于對(duì)照組和空載體組(P<0.01)。與對(duì)照組和空載體組相比，20 μg/mL多西他賽作用后轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中Bax的表達(dá)升高(P<0.01)，而B(niǎo)cl-2的表達(dá)降低(P<0.01)，并且磷酸化AKT (p-AKT)蛋白的表達(dá)水平下降(P<0.01)，而對(duì)照組和空載體組之間Bax、Bcl-2以及p-AKT蛋白的表達(dá)則無(wú)明顯差異(P>0.05)。結(jié)論 多西他賽可以通過(guò)促進(jìn)Cav-1的表達(dá)影響PI3K/AKT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進(jìn)而調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)抑制MCF-7 細(xì)胞的增殖。

Cav-1；多西他賽；乳腺癌細(xì)胞；細(xì)胞增殖；基因治療

多西他賽(Docetaxel)作為新一代人工半合成的紫杉類抗腫瘤藥物，目前已廣泛用于一線和二線局部晚期以及復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移乳腺癌的治療，明顯改善了乳腺癌的治療效果[1]。研究顯示，多西他賽作為有絲分裂抑制劑，還可以通過(guò)激活凋亡相關(guān)蛋白和通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而起到抑制腫瘤的作用，但具體機(jī)制尚不清楚。

窩蛋白-1(Cav-1)是胞膜窖(Caveolae)的主要結(jié)構(gòu)成分和標(biāo)志性結(jié)構(gòu)蛋白，不但在細(xì)胞膜組裝、細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)和囊泡運(yùn)輸?shù)确矫嫫鹬匾纳碜饔?，而且與腫瘤細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)化、侵襲轉(zhuǎn)移、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及多藥耐藥等密切有關(guān)[2-3]。近年來(lái)研究表明，Cav-1可作為抑癌因子負(fù)性調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移等相關(guān)信號(hào)通路的激活，是進(jìn)行乳腺癌基因治療理想的靶點(diǎn)之一。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究多西他賽對(duì)乳腺癌細(xì)胞中Cav-1表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討，旨在了解基因治療與化療聯(lián)合應(yīng)用的特性以及臨床應(yīng)用的可能性，進(jìn)而為乳腺癌個(gè)體化治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材 料

人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7購(gòu)自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司。RPMI 1640培養(yǎng)基、胰酶和胎牛血清購(gòu)自Gibco公司，G418購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。多西他賽為江蘇恒瑞制藥公司惠贈(zèng)。Lipofectamin 2000和TRIzol試劑為Invitrogen 公司產(chǎn)品，PrimeScript RT reagent Kit和SYBR Premix Ex Taq II購(gòu)自大連TaKaRa生物有限公司。兔抗人Cav-1、p-AKT 和 AKT 多克隆抗體購(gòu)自美國(guó) Abcam 公司，兔抗人Bcl-2和Bax多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，兔抗人GAPDH多克隆抗體購(gòu)自Bioworld公司，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔 IgG購(gòu)自北京中杉金橋生物公司，RIPA 強(qiáng)蛋白裂解液購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司，ECL發(fā)光試劑盒購(gòu)自美國(guó) Pierce公司。CCK-8法細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司。真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-Cav-1及空載體pcDNA3.1由遼寧師范大學(xué)鄒偉教授惠贈(zèng)。

1.2 方 法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

MCF-7細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中。取2×105個(gè)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7細(xì)胞懸于2 mL完全培養(yǎng)液中，接種于6 孔板內(nèi)，待細(xì)胞長(zhǎng)至90%匯合時(shí)按照Lipofectamine 2000 說(shuō)明書(shū)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將質(zhì)粒pcDNA3.1-Cav-1及其空載體pcDNA3.1轉(zhuǎn)染入MCF-7細(xì)胞后，經(jīng)800 μg/mL G418篩選4周，形成穩(wěn)定的細(xì)胞克隆，經(jīng)有限稀釋法獲取單克隆，然后進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，利用Western-blot 檢測(cè)不同組細(xì)胞Cav-1的表達(dá)情況，得到穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Cav-1以及空載體的MCF-7細(xì)胞株。野生型MCF-7細(xì)胞株為對(duì)照組,通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)建立Cav-1過(guò)表達(dá)的MCF-7細(xì)胞株(轉(zhuǎn)染組)及空載體的MCF-7細(xì)胞株(空載體組)。

1.2.2 Real-time PCR

利用TRIzol試劑和PrimeScript RT reagent試劑盒提取細(xì)胞總RNA，并將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA，在SYBR Premix Ex Taq II聚合酶的催化下進(jìn)行PCR反應(yīng)。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。Cav-1上游引物：5'-TGGTTTTACCGCTTGCTGTCT-3'，下游引物：5'-GACACGGCTGATGCACTGAA-3'；內(nèi)參照GAPDH上游引物：5'- AGAAGTATGACAACAGCCTCAAGATC - 3'，下游引物：5'- CAGTCTTCTGGGTGGCAGTGA-3'。反應(yīng)條件為： 95 ℃ 3 min；95 ℃ 30 s， 60 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min ，共40 個(gè)循環(huán)。每組細(xì)胞設(shè)計(jì)3個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)擴(kuò)增目的及內(nèi)參照基因。采用 2-ΔΔct法計(jì)算基因表達(dá)的相對(duì)變化。

1.2.3 CCK-8分析

將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞按1×105/mL的密度接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h后加入多西他賽至終濃度分別為5、10、20、40 μg/mL，每一濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，另設(shè)陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后更換100 μL新鮮培養(yǎng)基并加入CCK-8試劑10 μL，37 ℃孵育2 h后，全自動(dòng)酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔光密度值(OD值)，最后計(jì)算不同濃度多西他賽作用下各組細(xì)胞的增殖抑制率，繪制生長(zhǎng)抑制曲線。細(xì)胞抑制率(%)=[1-(處理組平均OD值-空白對(duì)照組OD值)/(陰性對(duì)照組平均OD值-空白對(duì)照組OD值)]×100%。

1.2.4 Western-blot

用RIPA 強(qiáng)細(xì)胞裂解液提取細(xì)胞總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度，經(jīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)化后取 50 μg總蛋白，經(jīng)12 %聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)至PVDF膜上。5%脫脂奶粉室溫封閉 1 h，孵育一抗Cav-1(1∶1000)、p-AKT(1∶1000)、AKT(1∶1000)、Bcl-2(1∶500)、Bax(1∶ 500)、GAPDH(1∶1000)，4 ℃過(guò)夜。 TBST洗膜后，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(1∶5000)室溫孵育 1 h。使用ECL化學(xué)發(fā)光試劑作用1～5 min后，放入AlphaEase FC凝膠成像系統(tǒng)內(nèi)，曝光顯影，進(jìn)行圖片掃描與條帶灰度分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 不同濃度多西他賽對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7中Cav-1表達(dá)的影響

濃度為5、10、20、40 μg/mL多西他賽作用后的MCF-7細(xì)胞中Cav-1 mRNA的表達(dá)量分別是不加藥對(duì)照組的2.90±0.26，4.80±0.40，9.83±0.45和13.50±1.25倍。0、5、10、20、40 μg/mL多西他賽作用后的MCF-7細(xì)胞中Cav-1蛋白條帶的灰度值分別為：18.52×103±2.38×103，42.46×103±4.31×103，60.69×103±8.45×103，88.24×103±6.76×103，120.16×103± 9.25×103。在5～40 μg/mL濃度范圍內(nèi)，隨著多西他賽作用濃度的增大，MCF-7細(xì)胞中Cav-1蛋白的表達(dá)量逐漸增加。見(jiàn)圖1。

**與不加藥對(duì)照組比較，P<0.01圖1 多西他賽對(duì)MCF-7細(xì)胞中Cav-1表達(dá)的影響Fig 1 Effect of Docetaxel on Cav-1 expression in MCF-7 cells

2.2 多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞增殖的影響

CCK-8法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞的增殖均有明顯的抑制作用，轉(zhuǎn)染組作用最明顯(圖2)。在同一藥物濃度下，轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組和空載體組相比，細(xì)胞增殖抑制率明顯增高(圖2,表1，P<0.01)，而空載體組和對(duì)照組相比，抑制率則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖2,表1，P>0.05)。

表1 CCK-8法檢測(cè)不同濃度多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞的抑制率

組別多西他賽(μg/mL) 5 10 20 40對(duì)照組6.37±0.5712.22±1.0027.17±1.6744.65±1.90轉(zhuǎn)染組12.32±1.591)22.25±1.911)46.76±1.911)65.04±2.551)空載體組6.89±0.8313.22±1.4429.2±1.7246.69±1.80

1)與對(duì)照組和空載體組比較，P<0.01

Control: 對(duì)照組; pcDNA3.1-cav-1:轉(zhuǎn)染組;Vector:空載體組。**與對(duì)照組和空載體組比較，P<0.01圖2 多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞增殖的影響Fig 2 Effect of Docetaxel on MCF-7 cells proliferation in different groups

2.3 多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞中Bax和Bcl-2表達(dá)的影響

用20 μg/mL多西他賽作用MCF-7細(xì)胞24 h后，利用Western-blot法檢測(cè)不同組MCF-7細(xì)胞中Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。Bax蛋白條帶的灰度值分別為：不加藥對(duì)照組10.15×103±1.23×103，對(duì)照組+Docetaxel 42.53×103±4.61×103，轉(zhuǎn)染組+Docetaxel 82.58×103±6.76×103，空載體組+Docetaxel 48.76×103±8.60×103；Bcl-2蛋白條帶的灰度值分別為：不加藥對(duì)照組47.64×103±5.25×103，對(duì)照組+Docetaxel 21.76×103±3.22×103，轉(zhuǎn)染組+Docetaxel 6.52×103±0.41×103，空載體組+Docetaxel 18.93×103±5.38×103。與不加藥對(duì)照組相比，多西他賽作用后各組MCF-7細(xì)胞中Bax蛋白的表達(dá)增加，而B(niǎo)cl-2蛋白的表達(dá)降低。多西他賽作用后轉(zhuǎn)染Cav-1的MCF-7細(xì)胞中Bax的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組和空載體組(P<0.01)，而B(niǎo)cl-2蛋白的表達(dá)水平則明顯低于對(duì)照組和空載體組(P<0.01)。對(duì)照組和空載體組之間Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)則無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)圖3。

C: 對(duì)照組;C+D:對(duì)照組+Docetaxel; Cav-1+D:轉(zhuǎn)染組+Docetaxel; V+D:空載體組+Docetaxel圖3 多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞中Bax和Bcl-2表達(dá)的影響Fig 3 Effect of Docetaxel on Bax and Bcl-2 expression in three groups

2.4 多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞中p-AKT表達(dá)的影響

利用Western-blot法檢測(cè)20 μg/mL多西他賽作用24 h后，不同組MCF-7細(xì)胞中PI3K/AKT 信號(hào)通路的活化情況。p-AKT蛋白條帶的灰度值分別為：對(duì)照組72.13×103±6.82×103，對(duì)照組+Docetaxel 32.15×103±3.63×103，轉(zhuǎn)染組+Docetaxel 8.32×103±1.76×103，空載體組+Docetaxel 36.42×103±7.16×103。與不加藥對(duì)照組相比，多西他賽作用后各組MCF-7細(xì)胞中p-AKT表達(dá)降低。多西他賽作用后轉(zhuǎn)染Cav-1的MCF-7細(xì)胞中p-AKT的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組和空載體組(P<0.01)，對(duì)照組和空載體組p-AKT蛋白的表達(dá)則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。而各組細(xì)胞間總AKT蛋白的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)圖4。

C: 對(duì)照組;C+D:對(duì)照組+Docetaxel;Cav-1+D:轉(zhuǎn)染組+Docetaxel; V+D:空載體組+Docetaxel圖4 多西他賽對(duì)不同組MCF-7細(xì)胞中磷酸化AKT表達(dá)的影響Fig 4 Effect of Docetaxel on p-AKT expression in three groups

3 討 論

化療在乳腺癌的綜合治療中占有重要的地位，然而化學(xué)藥物對(duì)機(jī)體的毒副作用往往限制了其劑量的使用，無(wú)法到達(dá)預(yù)期效果[4-5]。傳統(tǒng)策略是將化療藥物和其他非抗癌藥物聯(lián)用，以緩解藥物毒副作用，但這種做法并不能從根本上解決化療毒副作用對(duì)療效的影響。近年來(lái)腫瘤的生物治療越來(lái)越受到重視，基因治療作為腫瘤生物治療的重要手段之一，不僅可以協(xié)同化療實(shí)現(xiàn)化療增敏以及防止化療藥物產(chǎn)生耐藥性，還可以調(diào)控一系列腫瘤發(fā)生相關(guān)的信號(hào)通路達(dá)到靶向治療效果，已日漸成為腫瘤治療的一個(gè)重要途徑[6-7]。

多西他賽屬于紫杉醇類藥物，可以通過(guò)促進(jìn)微管蛋白異常聚合并保持其穩(wěn)定，從而抑制細(xì)胞有絲分裂時(shí)紡錘體形成以及微管的其他功能；并能抑制微管蛋白解聚，破壞細(xì)胞的有絲分裂，使細(xì)胞阻滯在分裂期[8]。目前在臨床已廣泛應(yīng)用于乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌等多種惡性實(shí)體腫瘤治療，取得顯著療效[9-11]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，多西他賽可以誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡[12]，其主要機(jī)制可能與下調(diào)抑制凋亡蛋白Bcl -2的表達(dá)，上調(diào)促凋亡蛋白Bax 的表達(dá)有關(guān)，但多西他賽是否還可以通過(guò)作用于其他基因誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡及其機(jī)制如何，目前尚不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)，多西他賽可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF-7中Cav-1基因和蛋白的表達(dá)，并呈劑量依賴性，提示Cav-1可能在多西他賽誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡中起重要作用。

Cav-1是細(xì)胞膜主要支架蛋白之一，其表達(dá)異常與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，Cav-1在正常乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中具有較高的表達(dá)，而在乳腺癌組織及細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)。Cav-1表達(dá)下調(diào)會(huì)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖，而Cav-1 過(guò)表達(dá)則可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[13-14]。進(jìn)一步研究表明，Cav-1 可直接與PI3K 結(jié)合或通過(guò)膜雌激素受體與PI3K 的p85 亞基相互作用，從而抑制PI3K/AK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，通過(guò)增加Bax的表達(dá), 降低Bcl-2 的表達(dá)，進(jìn)而抑制乳腺癌細(xì)胞增殖[15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，多西他賽可明顯抑制MCF-7細(xì)胞的增殖，同時(shí)能增加Bax并降低Bcl-2的表達(dá)量，與文獻(xiàn)報(bào)道相一致[12]。其機(jī)制可能與降低AKT的磷酸化水平，進(jìn)而抑制PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。通過(guò)基因轉(zhuǎn)染和篩選建立穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Cav-1的MCF-7細(xì)胞株，我們發(fā)現(xiàn)Cav-1可以顯著增加多西他賽對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用，并且與對(duì)照組和空載體組相比，Cav-1聯(lián)合多西他賽可以使MCF-7細(xì)胞促凋亡蛋白Bax表達(dá)增高和抑制凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低，并具有更低的AKT磷酸化水平，兩者具有協(xié)同作用。由此可見(jiàn)，Cav-1 過(guò)表達(dá)可以通過(guò)抑制AKT磷酸化，阻止PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，增強(qiáng)其對(duì)多西他賽的化療敏感性。

綜上所述，本研究將Cav-1和多西他賽結(jié)合有效地促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞的凋亡及其對(duì)化療藥物的敏感性，為尋找乳腺癌新的藥物靶標(biāo)及為個(gè)體化治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)?；蛎庖咧委焻f(xié)同放化療的治療策略將會(huì)成為腫瘤治療新的熱點(diǎn),具有良好的應(yīng)用前景和新藥開(kāi)發(fā)潛力。

[1] Nabholtz JM, Reese DM, Lindsay MA, et al. Docetaxel in the treatment of breast cancer: an update on recent studies[J].Semin Oncol, 2002, 29 (3 Suppl 12):28-34.

[2] Razani B,Lisanti MP.Caveolin-deficient mice: insights into caveolar function and human disease[J].J Clin Invest,2001,108(11): 1553-1561.

[3] Williams TM, Listanti MP. Caveolin-1 in oncogeic transformation, cancer, and metastasis[J].Physiol cell physiol, 2005, 288(3):C494-506.

[4] Smith AE, Slivicki RA, Hohmann AG, et al.The chemotherapeutic agent paclitaxel selectively impairs learning while sparing source memory and spatial memory[J]. Behav Brain Res, 2016, 320:48-57.[Epub ahead of print]

[5] Farrell C, Brearley SG, Pilling M, et al. The impact of chemotherapy-related nausea on patients' nutritional status, psychological distress and quality of life[J].Support Care Cancer, 2013, 21(1):59-66.

[6] Jeremy P, Braybrooke C, Andrew S, et al. Phase I study of MetXia-P450 gene therapy and oral cyclophosphamide for patients with advanced breast cancer or melanoma[J].Clin Cancer Res, 2005,11(4):1512-1520.

[7] Pirollo KF, Nemunaitis J, Leung PK, et al. Safety and Efficacy in Advanced Solid Tumors of a Targeted Nanocomplex Carrying the p53 Gene Used in Combination with Docetaxel: A Phase 1b Study[J].Mol Ther, 2016,24(9):1697-1706.

[8] 魯曉燕, 孟凡振. 多西他賽的藥理與臨床研究[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2008, 5(11): 22-24.

[9] Limentani SA, Brufsky AM, Erban JK, et al.Phase II study of neoadjuvant docetaxel, vinorelbine, and trastuzumab followed by surgery and adjuvant doxorubicin plus cyclophosphamide in women with human epidermal growth factor receptor 2-overexpressing locally advanced breast cancer[J]. J Clin Oncol, 2007, 25(10):1232-1238.

[10] 李軍孝, 谷仲平, 朱以芳, 等. 多西紫杉醇聯(lián)合順鉑治療III ～ IV期NSCLC臨床研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2007, 15 (9) : 1277-1278.

[11] 吳芳. 多西紫杉醇在晚期胃癌的臨床應(yīng)用[J].癌癥進(jìn)展雜志, 2007, 5(3) : 276-281.

[12] 俞喬, 高佳希, 何曉松,等.多西紫杉醇誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].腫瘤防治研究, 2006, 33(6):388-390.

[13] Anwar SL, Wahyono A, Aryandono T, et al.Caveolin-1 in Breast Cancer: Single Molecule Regulation of Multiple Key Signaling Pathways[J].Asian Pac J Cancer Prev, 2015, 16(16):6803-6812.

[14] 封爽,王洋,王曦,等.Caveolin-1基因沉默促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞ERα36介導(dǎo)的PI3K/AKT信號(hào)通路的激活[J].中國(guó)科學(xué) C 輯:生命科學(xué), 2009,39(9):830-838.

[15] Wayne Z, Lillian MS, Amato G. Caveolin-1 mediated regulation of receptor tyrosine kinase-associated phosphatidylinositol 3-kinase activity by ceramide[J].Mol Cell Biol, 2000, 20(5): 1507-1514.

Effect and potential mechanism of Cav-1 in Docetaxel inhibiting breast cancer MCF-7 cell proliferation

LI Ying1,YIN Liangwei2,LIU Jiwei1, LIU Peng2

(1.Department of Oncology, the First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116011, China；2.Department of Oncology, Dalian Municipal Central Hospital Affiliated of Dalian Medical Universty, Dalian 116021, China)

Objective To investigate the effect and potential mechanism of Cav-1 (Cav-1) on the proliferation inhibiting of breast cancer MCF-7 cell by Docetaxel. Methods The transfection group was established by stable transfection of pcDNA3.1-Cav-1 into MCF-7 cells, while the vector group (pcDNA3.1 vector transfected) and control group (non-transfection MCF-7 cells) were used as control. The Cav-1 expression of MCF-7 cells treated by Docetaxel was detected by Real-time PCR and Western-blot. CCK-8 assay was used to analyze the cell proliferation. The expression of Bax and Bcl-2 proteins and the activation of PI3K/AKT signal pathway were examined by Western-blot. Results The expression of Cav-1 in MCF-7 cells was gradually enhanced with the increasing of Docetaxel concentration in the range of 5-40 μg/mL.The inhibitory rate of cell proliferation in Cav-1 transfection group was significantly higher than that of the control groups after Docetaxel treatment (P<0.01). Compared with the control groups, Bax expression increased and Bcl-2 and p-AKT expression decreased in Cav-1 transfection group (P<0.01), while there was no significant difference between the two control groups (P>0.05). Conslusion Docetaxel might inhibit the proliferation of MCF-7 cells by promoting the Cav-1 expression, which can regulate the apoptosis-related protein expression and suppress the activation of PI3K/AKT signaling pathway.

Cav-1; Docetaxel; breast cancer cells;cell proliferation; gene therapy

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81302310)

李 穎(1981-)，女，主治醫(yī)師。E-mail:liying8121@126.com

劉 鵬，主治醫(yī)師。E-mail：liupeng0823@126.com

10.11724/jdmu.2017.04.02

R737.9

A

1671-7295(2017)04-0318-05

李穎，尹良偉，劉基巍，等.多西他賽對(duì)乳腺癌細(xì)胞中Cav-1表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017,39(4)：318-322.

2017-03-20;

2017-05-16)