陳國(guó)艷楊偉毅胡曉輝鄒慧莉雷革勝宿長(zhǎng)軍

·論 著·

甘丙肽系統(tǒng)在雌性焦慮抑郁樣小鼠海馬中的表達(dá)和作用☆

陳國(guó)艷*楊偉毅*胡曉輝*鄒慧莉*雷革勝*宿長(zhǎng)軍*

目的研究在雌性焦慮抑郁樣行為小鼠海馬中甘丙肽及其受體的表達(dá)和所起的作用。方法制備甘丙肽及甘丙肽受體-1（galanin receptor subtybe 1，GalR1）、受體-2（GalR2）、受體-3（GalR3）探針，運(yùn)用原位雜交技術(shù)觀察甘丙肽及其受體GalR1、GalR2、GalR3在雌性C57BL/6J小鼠海馬中分布情況。另取雌性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（15只）與對(duì)照組（15只），實(shí)驗(yàn)組給予慢性溫和型不可預(yù)見(jiàn)性刺激（chronic unpredictability mild stress，CUMS）4周，對(duì)照組不給予任何刺激。4周后分別行糖水偏好實(shí)驗(yàn)、新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)及懸尾實(shí)驗(yàn)以評(píng)估小鼠的焦慮抑郁樣行為水平及工作記憶情況；行為實(shí)驗(yàn)后，每組8只小鼠提取海馬RNA行qPCR以檢測(cè)海馬甘丙肽及其受體表達(dá)情況，其余小鼠取腦行免疫熒光染色檢測(cè)海馬C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果原位雜交結(jié)果顯示甘丙肽及其受體GalR1、GalR2在腹側(cè)海馬Hilus區(qū)有表達(dá)，GalR3未見(jiàn)陽(yáng)性信號(hào)。糖水偏好實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組糖水飲用量減少（P＜0.05）；新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組探索新物體時(shí)間百分比短（P＜0.05）；曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組小鼠較對(duì)照組中間停留時(shí)間縮短（P＜0.05）；懸尾實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組累計(jì)靜止時(shí)間延長(zhǎng)（P＜0.05）。qPCR結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬甘丙肽及GalR1表達(dá)較對(duì)照組增高（P＜0.05）。免疫組化結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬齒狀回C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞較對(duì)照組增多（P＜0.05）。結(jié)論甘丙肽、GalR1及GalR2主要分布在小鼠海馬的腹側(cè)Hillus區(qū)；在雌性C57BL/6J小鼠中，海馬甘丙肽及GalR1的增加可能與焦慮抑郁樣行為有關(guān)，與海馬齒狀回C-Fos細(xì)胞增加也有關(guān)。

甘丙肽 甘丙肽受體 慢性溫和型不可預(yù)見(jiàn)性刺激 原位雜交

神經(jīng)肽可能參與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程[1]。甘丙肽（Galanin）作為一種壓力誘導(dǎo)相關(guān)的神經(jīng)肽，與其受體廣泛分布于哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，參與焦慮抑郁樣行為及認(rèn)知行為的調(diào)節(jié)[2-4]。同時(shí)，也有研究顯示壓力相關(guān)的精神性疾病，如焦慮抑郁樣精神障礙存在明顯的性別差異，女性的患病率是男性的2倍[5-6]。盡管該類(lèi)疾病在女性中更多見(jiàn)，然而以往關(guān)于甘丙肽及其受體參與焦慮抑郁樣情緒調(diào)節(jié)的相關(guān)研究多以雄性大鼠或小鼠為研究對(duì)象，缺少對(duì)雌性小鼠的研究，故本研究選擇雌性C57BL/6J小鼠為研究對(duì)象，旨在更好地反映在壓力誘導(dǎo)焦慮抑郁樣疾病中甘丙肽及甘丙肽受體-1（galanin receptor subtybe 1，GalR1）、受體-2（GalR2）、受體-3（GalR3）在小鼠海馬中的表達(dá)情況。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究動(dòng)物鑒于小鼠出生后海馬已完成發(fā)育，原位雜交實(shí)驗(yàn)選擇標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中飼養(yǎng)的1月齡雌性C57BL/6J小鼠1只。另取3月齡雌性C57BL/6J小鼠30只，體質(zhì)量18～23 g。飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)組小鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，獨(dú)籠飼養(yǎng)，每天隨機(jī)給予一種刺激，包括禁水24 h、禁食24 h、潮濕籠子24 h、束縛3 h、傾斜籠子45°12 h、光剝奪24 h、13℃冷水游泳8 min、37℃溫水游泳8 min，連續(xù)刺激4周。對(duì)照組小鼠5只/籠，環(huán)境溫度（23±2）℃，光照/黑夜時(shí)間12 h/12 h（7:00～19: 00），作息規(guī)律，每周更換水、食物和墊料。

1.2 研究方法

1.2.1 原位雜交實(shí)驗(yàn) 設(shè)計(jì)并合成甘丙肽及其引物，制備地高辛標(biāo)記探針，探針引物設(shè)計(jì)來(lái)源于Allenbrain（由上海英俊公司合成）。引物序列：甘丙肽上游引物ATCCT GCACTGACCAGCC，下游引物TTGGCTTGAGGAG TTGGC；GalR1上游引物TCGATCCAACTACATTCCACAG， 下 游 引 物AGTGTCTTGCTTTGTTTCCCTC；GalR2上游引物GAAATGGGAGAGGCCTAGAAAT， 下 游 引 物ATCGTCCAGGGTATAGATGGTG；GalR3上游引物CCCTACCTAAGCTACTACGGCA， 下 游 引 物GGCGGACAGGGTTAGTCTAGT。上述引物 以C57BL/6J小鼠腦DNA為模版，經(jīng)PCR擴(kuò)增、割膠回收、T-vector連接、轉(zhuǎn)化、搖菌、抽質(zhì)粒，將DNA轉(zhuǎn)錄為地高辛標(biāo)記的mRNA，放入預(yù)雜交液中備用。原位雜交過(guò)程共3 d，第1 d全程需無(wú)RNA酶操作，將預(yù)先準(zhǔn)備好的30 μm腦片55℃烘干2 h，10 μg/mL PK消化蛋白20 min，腦片在雜交液中60℃水浴過(guò)夜。第2 d，取出腦片，先后經(jīng)2×SSC、0.2×SSC、PBT洗后，室溫孵育地高辛抗體（1:2000）1h后4℃冰箱過(guò)夜。第3d，顯色，固定，并甘油封片。

1.2.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)中小鼠獨(dú)籠飼養(yǎng)，并禁水、禁食12 h，之后同時(shí)給予1%糖水和水持續(xù)12 h。6 h更換一次糖水和水位置，避免位置偏好引起的糖耗量差異，12 h后計(jì)算糖水飲用量的百分比[飲糖水量/（飲糖水+水總量）×100%]，比較兩組小鼠糖水消耗情況。

1.2.3 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)在隔音箱中進(jìn)行，箱內(nèi)有25 cm×25 cm×25 cm有機(jī)玻璃無(wú)底盒子，小鼠的行為可以被箱子中內(nèi)置的攝像頭記錄下來(lái)。該實(shí)驗(yàn)過(guò)程包括3部分：適應(yīng)期、學(xué)習(xí)訓(xùn)練期和測(cè)試期。適應(yīng)期階段每只小鼠先放在空箱子中適應(yīng)10 min，取出小鼠，放回籠內(nèi)。在學(xué)習(xí)訓(xùn)練期，分別在盒子底部對(duì)角線的2個(gè)三等分點(diǎn)上放2個(gè)形狀相同的物體，單只小鼠背對(duì)物體放入箱中，自由探索10 min后取出小鼠放回飼養(yǎng)籠，該階段計(jì)算小鼠對(duì)其中一個(gè)物體的探索時(shí)間占總探索時(shí)間的百分比，來(lái)判斷小鼠是否具有位置偏好。測(cè)試期，將箱子里其中1個(gè)物體換成1個(gè)小鼠從未見(jiàn)過(guò)的、顏色和形狀與原來(lái)物體不同的新物體，1 h后，小鼠重新回到箱子中探索新舊2個(gè)不同的物體5 min，在該階段需計(jì)算小鼠對(duì)新物體的探索時(shí)間占總探索時(shí)間的百分比，用于判斷小鼠的工作記憶。

1.2.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 用于檢測(cè)小鼠的焦慮樣行為水平，小鼠在開(kāi)放場(chǎng)中間靜息時(shí)間越短說(shuō)明焦慮水平越高。將小鼠放在開(kāi)放場(chǎng)大小為27 cm×27 cm× 20 cm盒子的左下角，實(shí)驗(yàn)儀器自動(dòng)記錄小鼠在開(kāi)放場(chǎng)中30 min的自主運(yùn)動(dòng)情況，導(dǎo)出小鼠運(yùn)動(dòng)的總距離及在中心區(qū)域停留時(shí)間。

1.2.5 懸尾實(shí)驗(yàn) 用膠帶粘住距小鼠尾巴末端1 cm處，小鼠倒掛在距地面40 cm的掛鉤上，用攝像頭記錄6 min，統(tǒng)計(jì)最后4 min小鼠累計(jì)靜止的時(shí)間，靜止時(shí)間越長(zhǎng)，小鼠抑郁水平越高。

1.2.6 qPCR 兩組小鼠（各8只）斷頸取腦，分離出海馬組織，用Trizol法提取RNA，檢測(cè)RNA濃度，并按Takara試劑盒說(shuō)明將RNA轉(zhuǎn)cDNA。PCR引物（上海英俊公司合成）序列如下：β-actin上游引物GGCTGTATTCCCCTCCATCG，下游引物CCAGT TGGTAACAATGCCATGT；甘丙肽上游引物TAGG CTGGCTCCTGTTGGTT，下游引物GGTTGTCAATG GCATGTGGG；GalR1上游引物GAACTGGCTATGG TGAACCTC，下游引物CCAAACACTACCAGCGTA ATGA；GalR2上游引物GCGGTCCTCGTACCCCTA TT，下游引物：CACAGGATGAAACACAGGTCG；GalR3上游引物CGCTCTACGCACTCTGCTGGG，下游引物GTGGCGGGAGGCAAGGGAATA。按Takara SYBR Green試劑盒要求配制10 μL體系PCR反應(yīng)液，使用ABI 7500儀器行PCR檢測(cè)，反應(yīng)過(guò)程：95℃預(yù)變性10 min，95℃變性15 s，60℃延伸1 min，40個(gè)循環(huán)。qPCR結(jié)果以2-ΔΔCt值表示。

1.2.7 免疫熒光染色 兩組小鼠（各7只）經(jīng)心臟左室灌注20 mL生理鹽水，4%多聚甲醛內(nèi)固定，然后取腦放在4%多聚甲醛里外固定12 h，30%蔗糖脫水16 h。之后經(jīng)OCT包埋，冰凍后切片，腦片厚度30 μm。在孵育一抗前，腦片用pH 7.5的檸檬酸鈉95℃水浴修復(fù)8 min，后用1×PBS洗去多余的檸檬酸鈉，室溫孵育一抗C-Fos（rabbit）（1:1000）1 h后再4℃冰箱繼續(xù)孵育過(guò)夜。次日用1×PBS洗滌多余一抗，上二抗bio-GAR（1:500），室溫避光孵育3 h后，用1×PBS洗滌多余二抗，三步化Avidin-cy3（1:1000）及Hoechst（1:2000）室溫孵育1 h。1×PBS洗3次，每次5 min，描片、70%甘油封片，熒光顯微鏡下觀察并記錄兩組小鼠海馬CFos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18進(jìn)行分析，兩組采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)ɑ=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 原位雜交結(jié)果甘丙肽及 GalR1、GalR2的mRNA在海馬有分布，主要在腹側(cè)海馬的 Hilus區(qū)，GalR3未見(jiàn)陽(yáng)性信號(hào)。見(jiàn)圖1。

2.2 行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果糖水偏好實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組小鼠飲用糖水百分比較對(duì)照組少 （t＝2.911，P=0.010）。新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)的訓(xùn)練階段中兩組小鼠位置性偏好百分比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝0.6864，P=0.500），測(cè)試階段中實(shí)驗(yàn)小鼠對(duì)新物體探索時(shí)間百分比較對(duì)照組時(shí)間短（t＝2.332，P=0.031）。見(jiàn)表1。

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中總運(yùn)動(dòng)距離比較，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t＝1.699，P=0.104）；兩組小鼠中間停留時(shí)間，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組短 （t＝3.699，P= 0.001）。懸尾實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組靜止不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)（t＝2.857，P=0.011）。見(jiàn)表1。

2.3 qPCR結(jié)果實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬的甘丙肽mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組高（t＝4.080，P=0.007），實(shí)驗(yàn)組GalR1 mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組增高（t＝2.378，P= 0.039），GalR2 mRNA（t＝0.465，P=0.652）及GalR3 mRNA（t＝2.315，P=0.060）表達(dá)水平與對(duì)照組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

圖1 原位雜交實(shí)驗(yàn)中甘丙肽、Gal R1及Gal R2在C57BL/6J小鼠海馬的分布。圖A1、B1、C1分別表示甘丙肽、Gal R1、Gal R2在背側(cè)海馬未見(jiàn)明顯陽(yáng)性信號(hào)；圖A2、B2、C2分別表示甘丙肽、Gal R1、Gal R2在腹側(cè)海馬的分布情況。三角箭頭所指為陽(yáng)性信號(hào)，標(biāo)尺為100 μm

表1 兩組小鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

表1 兩組小鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s）

1）與對(duì)照組比較，經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05

組別n 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn) 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)位置性偏好百分比54.3%±2.5% 51.7%±2.8% 15 15實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組糖水偏好實(shí)驗(yàn)飲糖水百分比59.2%±10.3%1)93.1%±1.6%新物體探索時(shí)間百分比62.6%±2.3%1)70.8%±2.7%總運(yùn)動(dòng)距離（cm）6068.0±389.0 5277.0±235.3中間停留時(shí)間（s）53.1±6.51)143.8±24.6懸尾實(shí)驗(yàn)靜止不動(dòng)時(shí)間（s）128.8±13.61)77.0±12.1

表2 兩組小鼠海馬區(qū)甘丙肽、GalR1、GalR2、GalR3 mRNA表達(dá)水平（±s）

表2 兩組小鼠海馬區(qū)甘丙肽、GalR1、GalR2、GalR3 mRNA表達(dá)水平（±s）

1）與對(duì)照組比較，經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05

組別實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組n 8 8甘丙肽mRNA 1.725±0.1781)0.996±0.126 GalR1 mRNA 1.494±0.2021)1.006±0.037 GalR2 mRNA 1.068±0.143 0.999±0.040 GalR3 mRNA 1.380±0.138 1.010±0.080

2.4 免疫熒光結(jié)果C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞在海馬表達(dá)見(jiàn)圖2，實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組增多（t＝5.061，P=0.007），見(jiàn)表3。

3 討論

圖2 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠海馬C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。三角箭頭所指紅色細(xì)胞為C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞，藍(lán)色為H oechst，染細(xì)胞核，標(biāo)尺為100μm

表3 兩組小鼠海馬齒狀回C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（±s）

表3 兩組小鼠海馬齒狀回C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（±s）

1）與對(duì)照組比較，經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05

組別實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組n 7 7 C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)32.9±0.71)22.6±1.8

甘丙肽由29個(gè)氨基酸組成，最初是從豬體內(nèi)分離出來(lái)，從問(wèn)世以來(lái)被證明廣泛分布于人和動(dòng)物的中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)[2-3]。以往的研究顯示甘丙肽主要通過(guò)G蛋白偶聯(lián)其受體GalR1、GalR2、GalR3發(fā)揮生物學(xué)功能。因中樞神經(jīng)系統(tǒng)GalR3含量較GalR1和GalR2少[7]，故在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中GalR1和GalR2起主要作用。在本研究中，采用原位雜交技術(shù)探索甘丙肽及其受體在雌性C57BL/6J小鼠海馬的分布情況，結(jié)果顯示甘丙肽及GalR1和GalR2主要分布在腹側(cè)海馬的Hilus區(qū)，GalR3原位雜交未見(jiàn)陽(yáng)性信號(hào)。原位雜交結(jié)果為接下來(lái)研究甘丙肽系統(tǒng)參與調(diào)節(jié)壓力相關(guān)性精神障礙奠定了基礎(chǔ)。但所選用的小鼠未到成年期，在原位雜交腦片上可能顯示的甘丙肽及其受體mRNA比成年鼠相對(duì)多，鑒于這部分實(shí)驗(yàn)僅用于觀察甘丙肽及其受體在海馬有無(wú)分布及分布范圍，而不做量化比較，故實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響不大。

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，CUMS模型是用于研究壓力相關(guān)性精神障礙疾病的常用且比較成熟的動(dòng)物模型，本研究連續(xù)給予雌性 C57BL/6J成年小鼠 4周CUMS刺激后，糖水偏好實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組小鼠對(duì)糖水的飲用量減少，存在抑郁樣行為。新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組小鼠對(duì)新物體的探索時(shí)間百分比縮短，提示實(shí)驗(yàn)組小鼠存在短時(shí)工作記憶障礙，這與目前焦慮抑郁樣行為小鼠存在學(xué)習(xí)記憶減退的研究結(jié)果相一致[8]。在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組小鼠在中間區(qū)域停留時(shí)間短，表明實(shí)驗(yàn)組小鼠存在焦慮樣行為。懸尾實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組小鼠靜止不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)，存在放棄掙扎的抑郁樣行為。上述行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組小鼠存在焦慮抑郁樣行為，為進(jìn)一步探索甘丙肽系統(tǒng)在焦慮抑郁樣小鼠海馬中表達(dá)情況提供了可靠的動(dòng)物模型。

qPCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬的甘丙肽及GalR1 mRNA表達(dá)量增高，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[6]，表明甘丙肽及GalR1有促進(jìn)焦慮、抑郁樣行為的作用。NARVAEZ等[4]報(bào)道GalR2有抗抑郁作用，而本實(shí)驗(yàn)中GalR2 mRNA在焦慮抑郁樣行為小鼠海馬的表達(dá)量未見(jiàn)改變，推測(cè)GalR2在本實(shí)驗(yàn)所采用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭修卓挂钟糇饔貌幻黠@。GalR3被認(rèn)為與GalR1一樣通過(guò)激活抑制性G蛋白Gi/ Go通路發(fā)揮生物活性作用[9]，在焦慮抑郁樣雌性小鼠中GalR3 mRNA表達(dá)有增高的趨勢(shì)，但與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究顯示C-Fos細(xì)胞是一種壓力相關(guān)的細(xì)胞，其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的改變可受壓力及藥物的調(diào)節(jié)或誘導(dǎo)[10]。同時(shí)，也有研究顯示，在小鼠腦內(nèi)杏仁核區(qū)域定位注射甘丙肽及GalR1激動(dòng)劑，可使該區(qū)域的C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增加[11]。結(jié)合本研究實(shí)驗(yàn)組小鼠海馬的C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯增加，推測(cè)甘丙肽及GalR1表達(dá)增加可能對(duì)海馬齒狀回C-Fos陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的增多有促進(jìn)作用。

本研究初步明確雌性C57BL/6J小鼠海馬中甘丙肽及GalR1增加與焦慮抑郁行為有關(guān)，與海馬C-Fos表達(dá)增多可能也有關(guān)。研究主要不足之處在于缺乏給予甘丙肽或GalR1抑制劑反向驗(yàn)證上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，希望在以后的研究中能夠得以彌補(bǔ)。

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The expression and function of galanin system in the hippocampus of anxiety-and depression-likebehavior female mice.

CHEN Guoyan,YANG Weiyi,HU Xiaohui,ZOU Huili,LEI Gesheng,SU Changjun. Department of neurology,Tangdu hospital,The Fourth Military Medical University,Xian 710038,China.Tel:029-84777643.

ObjectiveTo explore the expression and function of galanin and its receptor in the female mice of anxiety-and depression-like behavior.MethodsIn situ hybridization was used to detect the expression of galanin, GalR1,GalR2 and GalR3 in the hippocampus of C57BL/6J female mice.A total of thirty female mice was divided into two groups:experiment group (n=15)and control group (n=15).The experiment group was subjected to the chronic unpredictable mild stress(CUMS)for four weeks,and the control group was not subjected to any treatment.Four weeks later,a series of tests were performed on those two groups,including the sucrose preference test,the novel object recognition test,the open field test and suspension tail test.After behavior tests,the hippocampus RNA was extracted from eight mice in each group to test the expression of galanin and its receptor through qPCR.The rest part of mice wereused to mark C-Fos immunostaining in the dentate gyms (DG)of hippocampus.ResultsThe result of in situ hybridization showed that galanin,GalR1 and GalR2 distributed in the Hillus of ventral hippocamous,GalR3 had no positive signal.In the sucrose preference test,the experiment group drunk less sucrose when compared with the control group(P＜0.05).In the novel object recognition test,the experiment group contacted shorter time to the novel object when compared with the control group (P＜0.05).In the open field test,the experiment group had shorter in session time when compared with the control group (P＜0.05).In the suspension tail test,the experiment group had longer immobility time when compared with the control group(P＜0.05).The qPCR result showed that the higher expression of galanin and GalR1 in the hippocampus of experiment group (P＜0.05).More C-Fos positive cells in the DG of hippocampus of experiment mice were immunostained (P＜0.05).ConclusionsGalanin,GalR1 and GalR2 mainly distribute in the Hillus of the ventral hippocampus.Galanin may be involved in the anxiety-and depression-like behavior of C57BL/6J through GalR1.

Galanin Galanin receptor Chronic unpredictable mild stress in Situ Hybridization

R749.4

A

2017-02-22）

（責(zé)任編輯：肖雅妮）

10.3969/j.issn.1002-0152.2017.07.003

☆國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：31371094）

* 第四軍醫(yī)大學(xué)附屬唐都醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（西安 710038）