瓦增成,杜婷

(青海紅十字醫(yī)院,西寧 810001)

宮內(nèi)缺氧胎兒臍血流超聲參數(shù)與母體、胎兒氧化應激損傷的關(guān)系

瓦增成,杜婷

(青海紅十字醫(yī)院,西寧 810001)

目的 探究宮內(nèi)缺氧胎兒臍血流超聲參數(shù)與母體、胎兒氧化應激損傷的相關(guān)性。方法 分娩的產(chǎn)婦200例，根據(jù)新生兒Apgar評分分為正常組與缺氧組。孕齡24～30周、31～36周、37～41周時分別記錄孕產(chǎn)婦彩超檢測的臍血流超聲參數(shù)，檢測臍帶血中氧化應激產(chǎn)物、胎盤組織中氧化應激產(chǎn)物與相關(guān)細胞凋亡分子的水平，并分析其與超聲參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果 不同孕周缺氧組臍血流超聲參數(shù)阻力指數(shù)(RI)、搏動指數(shù)(PI)、收縮期最大血流速度/舒張末期血流速度(S/D)均高于正常組(P均<0.05)；與正常組比較，缺氧組臍帶血與胎盤組織中氧化應激產(chǎn)物丙二醛(MDA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、8-異前列腺素(8-ios)、熱休克蛋白70(HSP-70)，胎盤組織中脂肪酸合成酶(Fas)、脂肪酸合成酶配體(FasL)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)水平高(P均<0.05)，胎盤組織中B細胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)水平低(P均<0.05)。RI、PI、S/D分別與臍帶血和胎盤組織中MDA、ox-LDL、8-ios、HSP-70及胎盤組織中Fas、FasL、Bax水平呈正相關(guān)(P均<0.05)，與胎盤組織中Bcl-2、XIAP呈負相關(guān)(P均<0.05)。結(jié)論 宮內(nèi)缺氧胎兒臍血流超聲參數(shù)出現(xiàn)明顯異常，其與母體、胎兒氧化應激損傷程度有相關(guān)性。

宮內(nèi)缺氧；超聲參數(shù)；氧化應激產(chǎn)物；凋亡產(chǎn)物；臍帶血流

胎兒宮內(nèi)缺氧是臍帶血管因某種疾病導致血流量異常，胎兒在子宮內(nèi)發(fā)生缺氧缺血，嚴重損害胎兒生命，這種現(xiàn)象又稱胎兒窘迫[1]。胎兒宮內(nèi)缺氧多發(fā)生于剖宮產(chǎn)臨產(chǎn)時，也可發(fā)生在妊娠后期[2]。主要癥狀是胎盤功能不全、高危妊娠如高血壓、腎炎、心臟病、重度貧血、難產(chǎn)等[3]。宮內(nèi)缺氧是因血管病變導致臍血流量減少、無法正常給胎兒供氧，胎兒與胎盤發(fā)生氧化應激反應，產(chǎn)生的相關(guān)凋亡因子會導致胎兒生長遲緩，胎動減少，嚴重者導致死亡。宮內(nèi)缺氧狀態(tài)下存活的新生兒因缺氧損傷神經(jīng)系統(tǒng)，造成智力發(fā)育不全或不可逆后遺癥；影響心臟基因表達，心肌程序性細胞過早死亡,抑制胎兒心臟發(fā)育，造成不可逆損傷。因此宮內(nèi)缺氧造成的損傷是不可逆的，嚴重影響胎兒的生長發(fā)育[4]。目前臨床判斷宮內(nèi)缺氧主要檢測胎心與胎動，暫無明確的宮內(nèi)缺氧檢測項目。超聲檢測可通過檢測臍動脈的相關(guān)參數(shù)判斷臍血流變化，進而可判斷是否出現(xiàn)宮內(nèi)缺氧。本文評估了臍血流與母體和胎兒氧化應激產(chǎn)物、細胞凋亡分子之間的關(guān)系，有助推斷缺氧給胎兒帶來的損傷，對臨床預防與治療具有積極意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年1月～2017年1月在青海紅十字醫(yī)院分娩的產(chǎn)婦200例。納入標準：胎心監(jiān)護頻繁現(xiàn)晚期減速，重度變異減速，羊水糞染Ⅲ度，胎盤異常。排除標準：有染色體遺傳史的產(chǎn)婦，患有其他器質(zhì)性病變者，畸形兒。將產(chǎn)婦根據(jù)新生兒Apgar評分分為缺氧組(Apgar評分≤7分)110例，年齡23～33(27.65±4.31)歲，初產(chǎn)婦76例、經(jīng)產(chǎn)婦34例，孕周33～35(34.25±0.33)周，輕度窒息74例、重度窒息36例，新生兒體質(zhì)量1.4～4.8(2.5±1.8)kg；正常組(Apgar評分>7分)90例，年齡23～33(27.65±4.31)歲，初產(chǎn)婦77例、經(jīng)產(chǎn)婦13例，孕周33～36(33.54±0.42)周，新生兒體質(zhì)量1.5～4.9(2.5±1.9)kg。兩組基線資料有可比性。此次研究獲得倫理委員會批準，且與研究對象簽署自愿同意書。

1.2 臍血流超聲參數(shù)的檢測 孕齡24～30周、31～36周、37～41周時分別記錄臍血流超聲參數(shù)。采用彩色多普勒超聲儀(生產(chǎn)廠商:美國 GE公司E8)進行檢測，探頭頻率設為2～6 MHz，記錄胎兒雙頂徑、胎盤、臍帶生長發(fā)育情況，后移探頭觀測臍動脈血液流動、選取5個連續(xù)的舒張期檢測其阻力指數(shù)(RI)、搏動指數(shù)(PI)、收縮期最大血流速度/舒張末期血流速度(S/D)。胎兒出生后立即進行Apgar評分，4～7分為輕度宮內(nèi)缺氧，0～3分為重度宮內(nèi)缺氧。

1.3 臍帶血和胎盤組織中氧化應激產(chǎn)物與細胞凋亡分子的檢測 分娩后30 min內(nèi)采集實驗用量的胎盤母體面中央部位組織與臍帶血5 mL分別標記，生理鹽水清洗血液后液氮速凍，加入RIPA裂解液充分研磨，去懸濁液放入4 ℃離心機中分離，轉(zhuǎn)速12 000 r/min，離心20 min后取上層澄清液體2 mL；用ELISA法檢測熱休克蛋白70(HSP-70)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、脂肪酸合成酶(Fas)、脂肪酸合成酶配體(FasL)、B細胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)的水平；采用放射免疫法檢測8-異前列腺素(8-iso)、丙二醛(MDA)水平。

2 結(jié)果

2.1 兩組不同孕期臍血流超聲參數(shù)比較 不同孕期缺氧組RI、PI、S/D高于正常組(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組不同孕期臍血流超聲參數(shù)比較±s)

注：與正常組同時期相比，*P<0.05。

2.2 兩組臍帶血和胎盤組織中氧化應激產(chǎn)物水平比較 缺氧組臍帶血和胎盤組織中MDA、oxLDL、8-ios及HSP-70水平高于正常組(P均<0.05)。見表2。

表2 兩組臍帶血、胎盤組織中氧化應激產(chǎn)物水平比較±s)

注：與正常組同部位相比，#P<0.05。

2.3 兩組胎盤組織中細胞凋亡分子水平比較 與正常組比較，缺氧組胎盤組織中Fas、FasL、Bax水平高，Bcl-2、XIAP水平低(P均<0.05)。見表3。

表3 兩組胎盤組織中細胞凋亡分子水平比較±s)

注：與正常組比較，*P<0.05。

2.4 相關(guān)性分析 RI、PI、S/D分別與臍帶血及胎盤組織中的MDA、oxLDL、8-ios、HSP-70呈正相關(guān)(臍帶血：RI:r分別為0.707、0.695、0.713、0.738，P均<0.05)；PI:r分別為0.721、0.715、0.728、0.719，P均<0.05； S/D：:r分別為0.689、0.697、0.735、0.727，P均<0.05；胎盤組織：RI:r分別為0.657、0.631、0.598、0.586,P均<0.05;PI：r分別為0.586、0.647、0.659、0.568,P均<0.05;S/D：r分別為0.623、0.712、0.681、0.569，P均<0.05)，與胎盤組織中Fas、FasL、Bax呈正相關(guān)(RI :r分別為0.698、0.715、0.703，P均<0.05；PI:r分別為0.722、0.717、0.719，P均<0.05： S/D：r分別為0.683、0.731、0.729，P均<0.05)，與胎盤組織中Bcl-2、XIAP呈負相關(guān)(RI :r分別為-0.711、-0.716，P均<0.05；PI:r分別為-0.709、-0.699，P均<0.05：S/D：r分別為-0.708、-0.734，P均<0.05)。

3 討論

胎兒宮內(nèi)缺氧主要原因是臍帶異常，臍帶血流受阻導致胎盤缺氧缺血進而影響胎兒發(fā)育[5]；而胎盤前置、早剝或胎兒先天性血管因素都會影響臍帶血流異常，檢測臍帶血流對評估胎兒是否健康生長具有重要意義[6]。臍動脈是胎兒與胎盤相連的主要血管，其血流動力變化受心臟收縮力和血管終末阻力的影響[7]。血管終末阻力增大時，舒張期的血流量減少或消失，甚至出現(xiàn)負性血流；當阻力減小，舒張期血流量增大[8]。臍帶血的血流動力學的變化與胎盤、胎兒和母體的生理學變化相關(guān)。健康孕婦的臍帶血流會呈現(xiàn)高流速低阻力，到妊娠后期絨毛間隙逐漸增大、血管阻力減小、血流量增多[9]，疾病可導致臍動脈或胎盤絨毛血管痙攣壞死，都能導致血管狹窄、阻力增大、血流量減少，從而使胎盤供血不足，出現(xiàn)功能性障礙[10]。臍帶血可通過超聲觀測其流速，得出臍動脈相關(guān)參數(shù)。超聲檢查中RI、PI、S/D是代表血流量的重要參數(shù)，血管阻力越高，血流量越少，RI、PI、S/D越大。

在宮內(nèi)缺氧持續(xù)發(fā)展過程中，胎盤組織因血流的低灌注而導致細胞凋亡進程加快，滋養(yǎng)細胞、內(nèi)皮細胞的凋亡會嚴重阻礙母胎間的物質(zhì)交換[11]。細胞凋亡過程主要有死亡受體凋亡通路與線粒體凋亡通路共同調(diào)解[12]，其中死亡受體凋亡通路有Fas、FasL因子參與調(diào)解、線粒體凋亡通路需要Bax、Bcl-2因子調(diào)解。Fas是腫瘤壞死因子，可與FasL結(jié)合后刺激多種有Caspase參與誘發(fā)的凋亡反應，最終刺激Caspase-3因子增多、導致細胞凋亡[13]。Bax、Bcl-2主要作用為調(diào)節(jié)線粒體膜通透性及細胞色素C的釋放。Bax可增加細胞色素C的釋放量，Bcl-2可對Bax增加細胞色素C的釋放量過程起到拮抗作用，抑制細胞色素C的釋放；XIAP是抗細胞凋亡分子，可拮抗多種Caspase介導的凋亡反應。胎兒在宮內(nèi)缺氧環(huán)境下會出現(xiàn)氧化應激反應，產(chǎn)生自由基，造成氧化性損傷[14]。自由基產(chǎn)生過程中會導致胎兒體內(nèi)各組織發(fā)生氧化反應，其中脂質(zhì)的氧化產(chǎn)物為MDA與ox-LDL[15]，花生四烯酸氧化產(chǎn)物有8-ios，因此MDA、ox-LDL、8-ios的產(chǎn)生均與自由基生成量有著密切聯(lián)系[16]。HSP-70則是細胞中的伴生分子。細胞發(fā)生氧化損傷時，機體出現(xiàn)代償性反應[17]，而HSP-70在代償性反應時具有高表達特征。從MDA、ox-LDL、8-ios、HSP-70等反應產(chǎn)物的含量能推測出胎兒與母體的損傷程度，當臍血流量減少時，氧化反應加劇，MDA、ox-LDL、8-ios、HSP-70含量增加。

本試驗結(jié)果顯示，缺氧組不同孕期RI、PI、S/D高于正常組，說明缺氧組血流量減少，血管終末阻力增大。缺氧組臍帶血和胎盤組織中測得的氧化應激產(chǎn)物MDA、oxLDL、8-ios、HSP-70高于正常組，且RI、PI、S/D分別與MDA、oxLDL、8-ios、HSP-70呈正相關(guān)，說明宮內(nèi)缺氧過程中氧化反應加劇，細胞凋亡進程加快，相關(guān)氧化應激產(chǎn)物增加。缺氧組胎盤組織中細胞凋亡分子Fas、FasL、Bax水平高于正常組；Bcl-2、XIAP低于正常組。超聲參數(shù)RI、PI、S/D與Fas、FasL、Bax呈正相關(guān)，與Bcl-2、XIAP呈負相關(guān)，說明因氧化反應加劇，促進細胞凋亡的Fas、FasL、Bax含量增加，具有拮抗作用的Bcl-2、XIA會相應減少。因此，檢測宮內(nèi)缺氧胎兒臍血流超聲參數(shù)可以有效預測胎兒缺氧情況，避免減少因缺氧導致的氧化損傷，提早指導臨床診斷及干預。

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青海省衛(wèi)生計生指導性科研課題(2016-wjqn-84)。

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2017-04-26)