汪洪盛，李 壯，曹玉杰，周海玲，田 煜

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

SRC-3、MMP-9在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義①

汪洪盛，李 壯，曹玉杰，周海玲，田 煜

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：觀察乳腺癌組織中類固醇受體輔助活化因子3(SRC-3)及基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達(dá)情況，探討并分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系及其意義。方法：選取手術(shù)切除乳腺癌標(biāo)本45例作為陽性實驗組；選擇45例乳腺癌旁正常組織作為對照組。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測SRC-3、MMP-9在實驗組和對照組中的表達(dá)情況。結(jié)果：SRC-3在實驗組和對照組中的切片陽性染色率各為62.2%，17.8%。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。且與乳腺癌組織分化程度、臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體、孕激素受體及人類表皮生長因子有關(guān)(P<0.05)。與年齡大小、月經(jīng)狀況及腫塊大小無關(guān)(P>0.05)；MMP-9在實驗組和對照組中的切片陽性染色率各為66.7%，28.9%。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同時與乳腺癌組織分化程度、臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體、孕激素受體及人類表皮生長因子有關(guān)(P<0.05)。與年齡、是否絕經(jīng)及腫塊大小無關(guān)(P>0.05)。SRC-3與MMP-9二者為正相關(guān)關(guān)系(r=0.324)。結(jié)論：高表達(dá)SRC-3及高表達(dá)MMP-9可能與乳腺癌的發(fā)生、進(jìn)展緊密關(guān)聯(lián)，并且SRC-3可能促進(jìn)MMP-9降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，最終導(dǎo)致乳腺癌的浸潤及轉(zhuǎn)移。

乳腺癌;SRC-3;MMP-9;免疫組織化學(xué)(SP)

目前在我國乳腺癌發(fā)病率逐年升高[1]。對惡性腫瘤來講，會經(jīng)歷從腫瘤形成到逐步發(fā)展再到轉(zhuǎn)移這三個階段。在其整個過程中，至少有兩個以上基因發(fā)生變化。它們所具功能存在差異，因此發(fā)揮的作用也不同，但從三維的角度來看，它們彼此又能夠相互協(xié)調(diào)。倘若我們盡早發(fā)現(xiàn)、盡早治療必然能使患者的存活率提高。因此，醫(yī)學(xué)界致力于尋找與乳腺癌相關(guān)的影響因子。類固醇受體輔助活化因子3(SRC-3)作為新的原癌基因，在眾多腫瘤進(jìn)展過程中其蛋白高表達(dá)，其在許多生物學(xué)功能方面具有重要作用[2]。在所有基質(zhì)金屬蛋白酶類(MMPs)當(dāng)中，基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是分子量最大的一種，也叫W型膠原酶，是癌基因中的一種。新近研究報告，該膠原酶蛋白是調(diào)控多數(shù)癌細(xì)胞增長繁殖的關(guān)鍵因素。本次實驗通過采用免疫組化(SP)研究，來檢測SRC-3與MMP-9兩因子在乳腺癌組織和正常乳腺組織中的表達(dá)情況，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科2015-03～2016-08乳腺癌45例，包括乳腺癌組織、癌旁正常組織以及手術(shù)切除的淋巴結(jié)。所選標(biāo)本來源都是女性，年齡29～72歲。絕經(jīng)情況、組織學(xué)分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(見表2)。根據(jù)2015年NCCN乳腺癌臨床實踐指南TNM分期法，對所選標(biāo)本分期(見表2)?；颊咝g(shù)前都未經(jīng)過任何治療。對照組選取癌旁正常組織45例(距癌組織超過5cm，病理確認(rèn))。所有實驗資料都經(jīng)過兩位病理科資深醫(yī)師多次核對。

1.2 主要試劑

即用型鼠抗MMP-9(56-2A4)抗體3mL(無需修復(fù))。兔抗人SRC-3多克隆抗體，配合使用福州邁新SP試劑盒，DAB顯色劑，PBS緩沖液。

1.3 免疫組化SP法

采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法，所有步驟都服從SP試劑盒操作申明執(zhí)行，陰性對照選取磷酸鹽緩沖液作為一抗。選擇已知乳腺癌中SRC-3，MMP-9切片深染作為陽性對比。

1.4 結(jié)果處理

SRC-3主要是細(xì)胞核染色在高倍鏡下可觀察到顏色呈深棕黃色。MMP-9則主要是細(xì)胞質(zhì)深染。在高倍鏡下進(jìn)行觀察癌細(xì)胞數(shù)量，所得染色數(shù)量占的比例，可計為不超過5%為0分；6%～25%為1分；26%～50%為2分；超過51%為3分。再觀察染色深淺：幾乎不染色為0分；淺染為1分；中強(qiáng)染為2分；深棕染3分。綜合上述兩項分?jǐn)?shù)得出不超過3分當(dāng)作陰性(-)，超過4分當(dāng)作陽性(+)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS18.0軟件進(jìn)行所得實驗結(jié)果進(jìn)行處理。計數(shù)資料均采取卡方檢驗。相關(guān)性分析通過采用Spearman等級相關(guān)分析法,檢驗標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 SRC-3、MMP-9在實驗組和對照組中的表達(dá)

SRC-3主要在細(xì)胞核上表達(dá)陽性(少數(shù)胞漿出現(xiàn)較淺染色)，其在實驗組和對照組的切片陽性染色率各為62.2%、17.8%。組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.529,P<0.05)。MMP-9主要在細(xì)胞質(zhì)上表達(dá)陽性(少數(shù)胞核較淺染色)，其在實驗組和對照組陽性率分各為66.7%、28.9%。組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=12.870，P<0.05)。見表1。

表1 乳腺癌組織及癌旁組織中SRC-3 及MMP-9的表達(dá)

*χ2=18.529，P<0.001；**χ2=12.870，P=0.001。

2.2 SRC-3、MMP-9表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的聯(lián)系

根據(jù)表2所示，在乳腺癌組織中SRC-3的表達(dá)與組織分化程度、臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體、孕激素受體及人類表皮生長因子2有關(guān)(P<0.05)，其中與乳腺癌的分化程度、雌激素受體及孕激素受體成負(fù)相關(guān)(r分別為-0.633、-0.337、-0.362)。但與年齡、腫塊直徑、是否絕經(jīng)無關(guān)(P>0.05)。同樣在乳腺癌組織中MMP-9的表達(dá)與分化程度、臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體、孕激素受體及人類表皮生長因子2有關(guān)(P<0.05)，其中與乳腺癌的分化程度、雌激素及孕激素受體也成負(fù)相關(guān)(r分別為-0.630、-0.402、-0.329)。但與患者年齡，是否絕經(jīng)，腫物直徑無關(guān)(P>0.05)。見表2。

2.3 乳腺癌組織中SRC-3及MMP-9的表達(dá)相關(guān)性運(yùn)用Spearman方法計算，分析SRC-3、MMP-9 二者在乳腺癌中的表達(dá)的相關(guān)性，兩者均在乳腺癌組織中切片陽性染色率高，但在對照組中染色率低。結(jié)果顯示SRC-3與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.421)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 乳腺癌組織中SRC-3及MMP-9的表達(dá)相關(guān)性

3 討論

類固醇受體輔助活化因子-3是P160類固醇受體共激活因子(SRC)家族的成員，又名AIB1、ACTR、TRAM1、NCoA3、RAC-3,以及P/CIP。其同類成員為SRC-1、SRC-2(TIF2或GRIP1)。輔活化因子3與核激素受體如雌激素和孕激素受體和其他轉(zhuǎn)錄因子如PEA3，E2F1，和AP-1作為轉(zhuǎn)錄共激活因子。在正常細(xì)胞中，通常存在限制濃度。它的激活還包括磷酸化、泛素化、甲基化修飾調(diào)控，和異構(gòu)化等方式。這些修飾是受類固醇激素，生長因子和細(xì)胞因子調(diào)控同時也與細(xì)胞周期的進(jìn)展相聯(lián)系。Haugan等[3]研究AIB1 mRNA在乳腺癌中過度表達(dá)，而在正常乳腺組織是低表達(dá)，兩者比較相差明顯。本次試驗數(shù)據(jù)分析也說明輔活化因子3在乳腺癌一組當(dāng)中的切片陽性染色率為62.2%，而癌旁組織當(dāng)中這一數(shù)據(jù)僅為17.8%，顯然前者高于后者，這意味著SRC-3可能參與了乳腺上皮的惡變。結(jié)合研究數(shù)據(jù)分析，患者中輔活化因子3表達(dá)高的存在組織學(xué)分級低、臨床分期高，發(fā)生較多淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，意味著在乳腺癌當(dāng)中輔活化因子3的過表達(dá)在很大程度上影響甚至形成惡性生物學(xué)行為，還可能有不良的預(yù)后。再者在HER-2陽性一組中SRC-3為高表達(dá)，它和HER-2的表達(dá)是正相關(guān)關(guān)系(r=0.527)，已有研究得出結(jié)論，在乳腺腫瘤細(xì)胞中如果人類表皮生長因子2出現(xiàn)過表達(dá)，腫瘤細(xì)胞就會活躍增殖，那么就更容易導(dǎo)致細(xì)胞的轉(zhuǎn)移浸潤。因此，對于腫瘤的惡性程度以及預(yù)后的好差，SRC-3可以當(dāng)作一種標(biāo)準(zhǔn)。

目前普遍認(rèn)為，在促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和侵襲方面，基質(zhì)金屬蛋白酶類(MMPs)是已知的因素。這些酶類能敲除致密的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)分子從而為腫瘤細(xì)胞運(yùn)動創(chuàng)造空間。與此同時它們并且能產(chǎn)生與ECM或者細(xì)胞表面相關(guān)的某些生長因子。研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中 MMP-9 的陽性率與正?；蛄夹圆∽兘M織對比顯著升高，但其與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系的相關(guān)研究卻不盡相同。這項研究我們數(shù)據(jù)表明，在乳腺癌一組實驗中蛋白酶9切片陽性染色率達(dá)到66.7%，然而在正常組織中卻是28.9%，前后兩者相差較明顯，且與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、雌激素受體、孕激素受體及人類表皮生長因子有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、腫塊直徑及是否絕經(jīng)無關(guān)(P>0.05)。這些結(jié)果表明蛋白酶9在乳腺癌的向外擴(kuò)散過程中是不可或缺的，并且在高表達(dá)的患者中具有差的預(yù)后。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[4]，AIB1和PEA3形成的蛋白復(fù)合物可共激活MMP-2和MMP-9的啟動子，最終發(fā)生癌細(xì)胞的發(fā)生和擴(kuò)散。按照輔活化因子3及蛋白酶9的兩者相關(guān)性分析數(shù)據(jù)說明，癌細(xì)胞中輔活化因子3的表達(dá)與蛋白酶9呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.421，P=0.04)，提示SRC-3可能通過多種渠道幫助MMP-9降解基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞突破基底膜向外侵襲。雖然在調(diào)控乳腺癌轉(zhuǎn)移中確切作用和分子機(jī)制是未知的，但我們據(jù)此可以推測，作為乳腺癌的一個潛在的干預(yù)靶點(diǎn)控制的PEA3 /SRC-3的途徑可抑制MMP-9的表達(dá)，對乳腺腫瘤的轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的預(yù)防都具有重要的現(xiàn)實意義。

[1]王新，范立君.GRP78、GRP94在乳腺癌中的表達(dá)及其意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2014，37(6):89-91

[2]廉奇鑫，蘇俊強(qiáng).FBXW7和SRC-3在乳腺癌中的表達(dá)及其意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2015，38(3):72-74

[3]Haugan Moi LL,Hauglid Flageng M,Gandini S,et al．Effect of low-dose tamoxifen on steroid receptor coactivator 3/amplified in breast cancer 1 in normal and malignant human breast tissue[J].Clin Cancer Res,2010,16(7):2176-2186

[4]Li Q,Lan L,Redmond A,et al.The AIB1 oncogene promotes breast cancer metastasis by activation of PEA3-mediated matrix metalloproteinase 2(MMP2)and MMP9 expression[J].Mol Cell Biol,2008,28(19):5937-5950

汪洪盛(1989～)男,江蘇鹽城人，在讀碩士研究生。

李壯(1963～)男，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，副教授，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:1260349026@ qq.com。

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1008-0104(2017)04-0125-02

2016-12-09)