張朝清，劉麗，吳定濱，付春利，許錦文，潘永康，李麗暉

(開(kāi)平市中心醫(yī)院病理科1、康復(fù)科2、胸外科3、檢驗(yàn)科4，廣東開(kāi)平529300)

VEGF及微血管密度在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及VEGF與臨床病理特征的關(guān)系

張朝清1，劉麗2，吳定濱1，付春利3，許錦文1，潘永康4，李麗暉1

(開(kāi)平市中心醫(yī)院病理科1、康復(fù)科2、胸外科3、檢驗(yàn)科4，廣東開(kāi)平529300)

目的探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及微血管密度(MVD)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)及VEGF與臨床病理特征的關(guān)系。方法選擇2015年1月至2016年12月期間開(kāi)平市中心醫(yī)院胸外科收治的60例NSCLC患者的癌組織及癌旁組織進(jìn)行研究，同時(shí)選擇50例肺良性病變組織標(biāo)本(術(shù)后病理證實(shí))納入對(duì)照組。比較不同組織的VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率及MVD表達(dá)情況，并且對(duì)VEGF陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果肺癌組織VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為73.33%，明顯高于癌旁組織的45.00%，且高于對(duì)照組的14.00%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；肺癌組織MVD明顯高于癌旁組織，且高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；VEGF陽(yáng)性表達(dá)率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、TNM分期為Ⅲ期者、中低分化者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期者、分化程度高者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；VEGF表達(dá)與性別、年齡、是否吸煙、病理分型、腫瘤大小無(wú)關(guān)(P＞0.05)。結(jié)論VEGF及MVD在NSCLC組織中均高表達(dá)，其在NSCLC的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；微血管密度；非小細(xì)胞肺癌；臨床病理特征；轉(zhuǎn)移

近年來(lái)，肺癌成為嚴(yán)重危害人類(lèi)健康和生命的最常見(jiàn)惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在我國(guó)也呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)[1]。雖然很多學(xué)者針對(duì)肺癌發(fā)病機(jī)制已經(jīng)進(jìn)行了深入研究，并且采用了以手術(shù)及放化療的綜合治療方案，但患者的預(yù)后仍然不盡人意，其5年生存率僅為11%[2]。目前認(rèn)為患者預(yù)后較差的主要原因是肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移，其中生成的新生血管不僅為腫瘤的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)也向宿主輸出大量的腫瘤細(xì)胞，因而是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)[3]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)具有特異性誘導(dǎo)腫瘤新生血管生成的作用，微血管密度(MVD)則反映了組織中單位密度的微血管數(shù)量。本研究旨在探討VEGF及MVD在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)及VEGF與臨床病理特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年1月至2016年12月期間開(kāi)平市中心醫(yī)院胸外科收治的60例NSCLC患者，其中男性35例，女性25例；年齡38～73歲，平均(57.8±11.4)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合NSCLC診斷標(biāo)準(zhǔn)；②未接受過(guò)手術(shù)和化療治療；排除合并急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、肝腎功能不全以及合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者。選擇同期手術(shù)的肺良性病變組織標(biāo)本(術(shù)后病理證實(shí))50例納入對(duì)照組，其中男性28例，女性22例；年齡31～75歲，平均(54.7±12.9)歲。兩組患者的年齡、性別比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法對(duì)手術(shù)切除的標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)方法處理，甲醛溶固定后采用石蠟包埋、并切片(厚度5μm)，然后脫蠟、水化，使用過(guò)氧化氫(濃度為3%)以阻斷組織內(nèi)的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；并且應(yīng)用枸櫞酸緩沖液(0.01 mol/L)進(jìn)行抗原熱修復(fù)，然后分別將非免疫性動(dòng)物血清(1：10)、VEGF(1：200)、生物素化羊抗鼠抗體(1：200)、SP復(fù)合物(1：200)加入，各步驟均經(jīng)恒溫箱孵育(37℃)、磷酸鹽緩沖液(PBS)洗脫、DAB顯色，以及蘇木素復(fù)染、脫水固定等處理，使用中性樹(shù)脂封片?？瞻讓?duì)照組均運(yùn)用PBS代替一抗。其中主要試劑包括鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠兔免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒分別購(gòu)于美國(guó)Snatacruz公司、廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司、中杉金橋公司。

1.3 結(jié)果判讀VEGF主要在細(xì)胞膜、細(xì)胞漿上定位表達(dá)，顯示棕黃色顆粒者則為陽(yáng)性。將切片在100倍鏡下進(jìn)行觀(guān)察，選擇10個(gè)視野，每個(gè)視野各100個(gè)腫瘤細(xì)胞，共1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞，每張切片上VEGF陽(yáng)性率≥10%則判斷為VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)。MVD判定標(biāo)準(zhǔn)：與相鄰的腫瘤細(xì)胞、微血管和其他結(jié)締組織不相連，分界清楚的棕黃色免疫組化染色細(xì)胞群即為一條獨(dú)立的微血管，每個(gè)標(biāo)本在100倍鏡下選出3個(gè)微血管密度最強(qiáng)區(qū)，然后在200倍鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)最強(qiáng)區(qū)MVD的平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，計(jì)量資料兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)的比較采用方差分析；采用百分?jǐn)?shù)表示計(jì)數(shù)資料，兩樣本率的比較采用χ2檢驗(yàn)，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組受檢者的VEGF陽(yáng)性表達(dá)和MVD比較60例NSCLC患者中，肺癌組織VEGF陽(yáng)性表達(dá)率及MVD明顯高于癌旁組織及對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。肺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)及對(duì)照組VEGF的陰性表達(dá)分別見(jiàn)圖1和圖2。

表1 各組受檢者的VEGF陽(yáng)性表達(dá)和MVD比較

表1 各組受檢者的VEGF陽(yáng)性表達(dá)和MVD比較

注：與肺癌組織比較，aP＜0.05；與癌旁組織比較，bP＜0.05。

組別例數(shù)VEGF陽(yáng)性[例(%)]MVD(x-±s，根/mm3)肺癌組織癌旁組織對(duì)照組F值/χ2值P值60 60 50 44(73.33) 27(45.00)a7(14.00)ab9.968＜0.05 30.34±12.42 15.78±4.39a4.25±1.54ab93.540＜0.05

圖1 肺癌組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)(×200)

圖2 對(duì)照組VEGF陰性表達(dá)(×200)

2.2 NSCLC組織中VEGF的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系單因素分析顯示，VEGF陽(yáng)性表達(dá)率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、TNM分期為Ⅲ期者、中低分化者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期者、分化程度高者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；VEGF表達(dá)與性別、年齡、是否吸煙、病理分型、腫瘤大小無(wú)關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表2。

表2NSCLC組織中VEGF的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

3 討論

肺癌是目前人類(lèi)發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，其中NSCLC約占80%[4]，嚴(yán)重影響患者的身體健康及生活質(zhì)量。對(duì)于早期無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的NSCLC患者而言，外科手術(shù)是公認(rèn)的首選治療手段，但是患者的五年生存率仍然較低，肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致治療失敗的主要原因[5]。新生血管是指機(jī)體內(nèi)皮細(xì)胞在某些因素的刺激下分化成為一些新血管，目前研究證明所有的實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移均依賴(lài)于不斷生產(chǎn)的新生血管，以滿(mǎn)足其營(yíng)養(yǎng)代謝和擴(kuò)增的需要；腫瘤細(xì)胞的增殖率大于其凋亡率時(shí)，可出現(xiàn)腫瘤的快速發(fā)展階段以及腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[6]。MVD可以直接檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)單位面積的血管數(shù)量，是評(píng)估腫瘤血管生成的重要指標(biāo)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是一種廣泛分布于腎臟、腦垂體、腎上腺等體內(nèi)各組織的、分子量在34～45 kD之間的糖蛋白。VEGF通過(guò)與其受體結(jié)合，引起一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及釋放多種細(xì)胞因子，起到特異性調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、水解基膜、遷移和血管構(gòu)建等過(guò)程，是已知的作用最強(qiáng)的促進(jìn)血管生成作用的調(diào)節(jié)因子[7]。研究表明，VEGF往往在病理情況下，尤其是惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)出過(guò)量表達(dá)[8]。本研究中，NSCLC組織中VEGF陽(yáng)性表達(dá)率及MVD明顯高于癌旁組織，且明顯高于良性病變組織，說(shuō)明NSCLC的發(fā)生與VEGF和MVD關(guān)系密切。

VEGF在促進(jìn)新生血管的增加作用之外，還可以為內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)。周紅鳳等[9]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌VEGF的表達(dá)水平與組織中微血管密度呈正相關(guān)性，指出VEGF在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及腫瘤轉(zhuǎn)移中具有重要作用。胡金華等[10]研究則指出，VEGF水平與食管癌患者的預(yù)后具有相關(guān)性。本研究顯示VEGF表達(dá)與性別、年齡、是否吸煙、病理分型、腫瘤大小無(wú)關(guān)(P＞0.05)；但是VEGF陽(yáng)性表達(dá)率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、TNM分期為Ⅲ期者、中低分化者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期者、分化程度高者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示VEGF的陽(yáng)性表達(dá)隨著NSCLC的惡性程度及病程進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增強(qiáng)。

綜上所述，VEGF及MVD在NSCLC的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要的作用，這對(duì)于NSCLC的惡性程度判斷和預(yù)后評(píng)估具有重要意義，同時(shí)也為NSCLC臨床治療提供新的思路。

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Expression of VEGF and microvessel density in non-small cell lung cancer and relationship of VEGF with clinicopathological features.

ZHANG Chao-qing1,LIU Li2,WU Ding-bin1,FU Chun-li3,XU Jin-wen1,PAN Yong-kang4,LI Li-hui1.Department of Pathology1,Department of Rehabilitation2,Department of Thoracic Surgery3, Department of Clinical Laboratory4,Kaiping Central Hospital of Guangdong,Kaiping 529300,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)and microvessel density(MVD)in non-small cell lung cancer(NSCLC)and relationship of VEGF with clinicopathological features.MethodsCancer tissue and adjacent tissue samples were collected from sixty patients with NSCLC from January 2015 to December 2016 in the Department of Thoracic Surgery in our hospital,and specimens from 50 cases of benign lung lesions(confirmed pathologically after operation)were selected as the control group.The positive expression rate of VEGF and MVD levels were compared among different tissues,and the relationships of VEGF expression with clinicopathological features were analyzed.ResultsThe positive expression rate of VEGF in lung cancer tissue was 73.33%,significantly higher than 45.00%in the adjacent tissues and 14.00%in the control group(P＜0.05).The MVD level of lung cancer tissue was significantly higher than that in the adjacent tissues and that in the control group(P＜0.05).The positive expression rates of VEGF in patients with lymph node metastasis,TNM stageⅢ,middle and low differentiation were significantly higher than those in patients with no lymph node metastasis,TNM stageⅠ-Ⅱ,high differentiation(P＜0.05).The expression of VEGF was not related with gender,age,smoking,pathological type,tumor size (P＞0.05).ConclusionVEGF and MVD are highly expressed in NSCLC tissues,which play important roles in the development and metastasis of NSCLC.

Vascular endothelial growth factor(VEGF);Microvessel density(MVD);Non-small cell lung cancer(NSCLC);Clinicopathological features;Metastasis

R734.2

A

1003—6350（2017）14—2254—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.14.006

2017-04-26)

廣東省開(kāi)平市科研項(xiàng)目(編號(hào)：16A089)

張朝清。E-mail：zcqaotn@126.com