薛美婷，閆麗萍，韓國(guó)偉，盧 庭，謝保弟

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

電針不同腧穴對(duì)急慢性結(jié)腸炎大鼠髓過(guò)氧化物酶（MPO）含量的影響

薛美婷，閆麗萍，韓國(guó)偉，盧 庭，謝保弟

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

●“實(shí)驗(yàn)”雖然是現(xiàn)代科學(xué)研究常用的方法，然在我國(guó)卻自古有之。古代學(xué)者王沖說(shuō)“等類(lèi)眾多，行事比肩，略舉較著，以定實(shí)驗(yàn)也”，顏之推說(shuō)“昔在江南，不信有千 人帳，及來(lái)河北，不信有二萬(wàn)斛船，皆實(shí)驗(yàn)也”，大凡此義均與現(xiàn)代科學(xué)意義上的experiment相通。照此，傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)并非只是經(jīng)驗(yàn)之學(xué)，而更充滿實(shí)驗(yàn)的思想和方法。實(shí)驗(yàn)中醫(yī)藥學(xué)，將現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)科學(xué)的方法和傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法融合起來(lái)，開(kāi)拓現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥物科學(xué)的新領(lǐng)域。

目的：觀察電針不同腧穴對(duì)急、慢性結(jié)腸炎模型大鼠結(jié)腸組織中髓過(guò)氧化物酶（MPO）含量的影響。方法：急性實(shí)驗(yàn)取60只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、大腸俞組、天樞組、足三里組、上巨虛組，每組10只，雌雄各半，用6%冰醋酸灌腸造模，造模后治療3 d，麻醉取病變結(jié)腸組織，用ELISA法測(cè)定MPO含量。慢性實(shí)驗(yàn)SD大鼠分組同急性實(shí)驗(yàn)，用免疫學(xué)加局部刺激法造模，治療3 d后各組處死一半檢測(cè)MPO含量，其余繼續(xù)治療7 d后取材測(cè)定MPO含量。結(jié)果：急性實(shí)驗(yàn)中，與空白組比較，模型組MPO含量升高（P＜0.01）；與模型組比較，腧穴組MPO含量均下降（P＜0.01）；天樞組較其他腧穴組MPO含量下降（P＜0.05）。慢性實(shí)驗(yàn)治療3 d后，天樞和上巨虛兩組較大腸俞和足三里兩組MPO含量下降（P＜0.05）；治療10 d后，天樞組較其他腧穴組MPO含量下降（P＜0.01）。結(jié)論：電針大腸俞、天樞、足三里、上巨虛均可降低急慢性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中MPO含量，其中天樞組效果較佳。

結(jié)腸炎；大鼠；髓過(guò)氧化物酶；MPO

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 急性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)：清潔級(jí)SD大鼠60只，體質(zhì)量（190±10）g，雌雄各半，許可證號(hào)：SCXK-（京）2014-0013。慢性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)：清潔級(jí)SD大鼠120只，體質(zhì)量（190±10）g，雌雄各半，許可證號(hào)：SCXK-（軍）2012-0004。均購(gòu)自北京海淀興旺實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)。

1.1.2 試劑與儀器 冰乙酸（天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）、髓過(guò)氧化物酶ELISA檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所），完全弗氏佐劑（美國(guó)sigma公司）；一次性使用無(wú)菌針灸針、華佗牌SDZ-Ⅱ電針治療儀（蘇州醫(yī)療用品有限公司）、低速冷凍離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）、勻漿機(jī)（型號(hào)：02-0510，美國(guó)）、超低溫冰箱（中科美菱低溫科技有限責(zé)任公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 電針不同腧穴對(duì)急性結(jié)腸炎模型大鼠髓過(guò)氧化物酶（MPO）的影響 60只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分為空白組、模型組、大腸俞組、天樞組、足三里組、上巨虛組，每組10只。參考文獻(xiàn)［1］用6%冰醋酸灌腸造模，造模前24 h大鼠禁食不禁水，用直徑為2 mm的聚氯乙烯管插入大鼠肛門(mén)內(nèi)8 cm，除空白組注入生理鹽水1 mL外，其他組均注入6%冰醋酸1 mL，準(zhǔn)確定時(shí)15 s后，用5 mL生理鹽水沖洗。

空白組不作干預(yù)；模型組除不針刺外，余處理同其他各腧穴組；其余各組造模后即刻捆綁固定，電針雙側(cè)對(duì)應(yīng)穴位。穴位定位參照文獻(xiàn)［2］，大腸俞：腰部第4腰椎棘突下，旁開(kāi)5 mm；天樞：臍中旁開(kāi)5 mm［3］；足三里：膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，在腓骨小頭下5 mm；上巨虛：足三里向下5 mm。電針選用疏密波，以電針局部微微顫動(dòng)為度，1次/d，30 min/次，共3次。大鼠于第3次電針治療后24 h腹腔注入10%水合氯醛溶液麻醉，低溫取病變結(jié)腸組織，冰生理鹽水沖洗后濾紙吸干，液氮罐中放一段時(shí)間后取出，保存于-80℃超低溫冰箱備用。用ELISA試劑盒檢測(cè)MPO的含量。

1.2.2 電針不同腧穴對(duì)慢性結(jié)腸炎模型大鼠髓過(guò)氧化物酶（MPO）的影響 分組同1.2.1。造模采用免疫學(xué)加局部刺激制備慢性結(jié)腸炎大鼠模型，參照徐叔云等主編的《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》［4］及文獻(xiàn)［5-6］。取家兔新鮮結(jié)腸黏膜層，加適量生理鹽水制成黏膜勻漿，冷凍24 h，溶凍后以3 000 r/min離心30 min，取上清液測(cè)定蛋白質(zhì)含量，使用時(shí)與完全弗氏佐劑等量混勻。首次于足跖內(nèi)注射抗原3 mg，并于第10天、第17天、第24天、第31天分別在足跖、背部、腹股溝、腹腔內(nèi)注射抗原6 mg（末次注射不加完全弗氏佐劑）。禁食24 h，用10%的水合氯醛麻醉后，用1%福爾馬林1.5 mL灌腸，留置1 h后用生理鹽水沖洗。再用抗原液8 mg灌腸，留置2 h后生理鹽水沖洗。治療次數(shù)由3次改為10次，余同1.2.1。大鼠治療3 d后各組處死一半，剩余大鼠繼續(xù)治療7 d后處死，余同1.2.1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

急性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)中：與空白組比較，模型組MPO含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，腧穴組MPO含量均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；天樞組較其他腧穴組MPO含量下降（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 急性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織MPO含量比較 （±s）

表1 急性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織MPO含量比較 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與天樞組比較，3）P＜0.05

組別 n MPO（U/g）空白組 10 3.34±0.15模型組 10 6.36±0.201）大腸俞組 10 5.42±0.262）3）天樞組 10 5.19±0.152）足三里組 10 5.55±0.282）3）上巨虛組 10 5.40±0.152）3）

慢性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)中：治療3 d后，與空白組比較，模型組MPO含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，腧穴組MPO含量均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；天樞組較大腸俞、足三里兩組MPO含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；上巨虛組較大腸俞、足三里兩組MPO含量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 慢性結(jié)腸炎大鼠治療3 d結(jié)腸組織MPO含量比較 （±s）

表2 慢性結(jié)腸炎大鼠治療3 d結(jié)腸組織MPO含量比較 （±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.05；與天樞組比較，3）P＜0.05；與上巨虛組比較，4）P＜0.05

組別 n MPO（U/g）空白組 10 2.78±0.17模型組 10 5.21±0.191）大腸俞組 10 4.56±0.122）3）4）天樞組 10 4.34±0.142）足三里組 10 4.57±0.172）3）4）上巨虛組 10 4.38±0.072）

治療10 d后，與空白組比較，模型組MPO含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，腧穴組MPO含量均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；天樞組較其他腧穴組MPO含量顯著下降（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 慢性結(jié)腸炎大鼠治療10 d結(jié)腸組織中MPO含量比較（±s）

表3 慢性結(jié)腸炎大鼠治療10 d結(jié)腸組織中MPO含量比較（±s）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與天樞組比較，3）P＜0.01

組別 n MPO（U/g）空白組 10 2.83±0.24模型組 10 5.27±0.261）大腸俞組 10 4.47±0.152）3）天樞組 10 3.94±0.222）足三里組 10 4.44±0.132）3）上巨虛組 10 4.27±0.132）3）

3 討 論

結(jié)腸炎屬于腸道炎癥病變，從中醫(yī)學(xué)角度辨證，多責(zé)于大腸、脾胃的功能失常。大量臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明，針刺穴位能有效改善結(jié)腸炎的腸黏膜損傷。本實(shí)驗(yàn)電針大腸俞、天樞、足三里、上巨虛4個(gè)穴位治療結(jié)腸炎，大腸俞是大腸經(jīng)的背俞穴，早期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)俞募配穴、合募配穴對(duì)大腸腑病均有一定治療作用，其中以合募配穴效應(yīng)較佳［7］。天樞是大腸經(jīng)的募穴，實(shí)驗(yàn)表明艾灸天樞和足三里均能改善大鼠潰瘍性結(jié)腸炎損傷，天樞治療效果更好［8］。足三里為胃經(jīng)合穴，也是其下合穴，是胃經(jīng)經(jīng)氣合于臟腑的部位，針刺足三里等穴位能夠很好地改善潰瘍性結(jié)腸炎病變［9］。上巨虛是大腸經(jīng)下合穴，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，電針消化系統(tǒng)的下合穴能降低潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠結(jié)腸黏膜潰瘍及炎癥評(píng)分，電針上巨虛在此方面的療效較足三里等穴位佳，且存在一定的特異性［10］。結(jié)腸炎大多屬于氣滯血瘀，血敗肉腐，產(chǎn)生潰瘍。氣行血自行，血行膿自化，大腸俞是大腸經(jīng)的背俞穴，天樞穴是大腸經(jīng)的募穴，都有調(diào)暢氣血的作用。足三里和上巨虛分別是胃經(jīng)、大腸經(jīng)下合穴，下合治內(nèi)腑，通過(guò)針刺足三里或者上巨虛能夠刺激胃腸蠕動(dòng)，調(diào)節(jié)腸道微循環(huán)，改善結(jié)腸炎癥損傷。

MPO是主要存在于中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒中的一種酶，是判定中性粒細(xì)胞在組織中浸潤(rùn)程度的一種可靠指標(biāo)，也是常用的評(píng)價(jià)腸道炎癥程度的指標(biāo)［11］。測(cè)定MPO含量可有效地評(píng)價(jià)結(jié)腸炎的病理改變情況和炎癥嚴(yán)重程度。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在急性結(jié)腸炎和慢性結(jié)腸炎模型大鼠結(jié)腸組織中MPO含量均明顯升高。電針4個(gè)不同穴位治療，MPO含量均有降低，表明針刺大腸俞、天樞、足三里、上巨虛均可有效改善結(jié)腸炎癥。在急慢性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)中，與其他治療組比較，天樞組的治療效果更佳，可能與穴位的相對(duì)特異性有關(guān)。

［1］祁超，閆麗萍，燕平，等.電針腧穴“腸病方”對(duì)UC模型大鼠IL-6及NF-кВp65的影響［J］.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，14（4）：2-4.

［2］李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)［M］.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2003：425-430.

［3］王海軍，冀來(lái)喜.關(guān)于大鼠神闕穴的定位［J］.針刺研究，2007，32（4）：312.

［4］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：1 335.

［5］陳治水，張志清，聶志偉，等.潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型與健脾靈復(fù)健作用的研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1990，10（8）：488-490.

［6］劉萬(wàn)里，沈洪，單兆偉，等.腸安膠囊修復(fù)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸損傷研究［J］.天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，22（4）：7-9.

［7］陳楚淘，嚴(yán)杰，田浩梅，等.電針天樞配大腸俞、天樞配上巨虛對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠血清NO、MDA影響的比較研究［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，14（12）：1-3.

［8］葛維.艾灸天樞和足三里對(duì)UC大鼠結(jié)腸組織中MMP-1和TIMP-1表達(dá)的影響［D］.沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2014.

［9］孫東.針灸治療潰瘍性結(jié)腸炎療效觀察［J］.中外醫(yī)療，2012（31）：114-115.

［10］易細(xì)芹.電針大腸下合穴上巨虛等對(duì)UC模型大鼠TNF-α及NF-κB的影響［D］.長(zhǎng)沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

［11］雙源，閆麗萍，燕平，等.電針腧穴“腸病方”對(duì)腸黏膜損傷大鼠MPO和IL-10表達(dá)的影響［J］.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，14（3）：4-6.

（編輯：梁葆朱）

Effect of electroacupuncture at different acupoints on the content of myeloperoxidase（MPO）of acute and chronic colitis model rats

Xue Meiting，Yan Liping，Han Guowei，Lu Ting，Xie Baodi （Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To observe the effects of electroacupuncture at different acupoints on MPO content in colon tissue of rats of acute and chronic colitis.Methods：Acute experiment：60 SD rats were randomly divided into blank group，model group，Dachangshu group，Tianshu group，Zusanli group and Shangjuxu group，and there were 5 males and 5 females in each group.Models were prepared by 6%acetic acid enema.3 days after treatment，colon tissue was taken and MPO activity was measured by ELISA.Chronic experiment：rat grouping method was same with acute experiment.Models were prepared by immunology plus local stimulation.3 days after treatment，half of rats in each group were executed and their MPO contents were detected.10 days after treatment，the rest of the rats were executed and their MPO contents were detected.Results：In the acute experiment，compared with blank group，MPO content in model group was increased（P＜0.01）；compared with model group，MPO content in all acupoint treatment groups was decreased（P＜0.01）；compared with other groups，MPO content in Tianshu group was decreased（P＜0.05）.In chronic experiment，3 day after treatment，MPO content in Tianshu and Shangjuxu groups was lower than that in Dachangshu and Zusanli groups（P＜0.05）；10 days after treatment，MPO content in Tianshu group was decreased compared with all other groups（P＜0.01）.Conclusions：Electroacupuncturing at Dachangshu，Tianshu，Zusanli and Shangjuxu can reduce MPO content in colon tissue of acute and chronic colitis rats，in which the effect of Tianshu group is best.

colitis；rat；myeloperoxidase；MPO

R285.5

A

1671-0258（2017）02-0015-03

山西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2014011044-5）

薛美婷，在讀碩士，E-mail：897842268@qq.com

閆麗萍，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：15034400862@163.com同特定穴，觀察電針不同特定穴對(duì)急慢性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織MPO的影響，進(jìn)而初步探討針刺治療結(jié)腸炎的機(jī)理，為臨床治療不同類(lèi)型結(jié)腸炎提供一定的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

結(jié)腸炎臨床多表現(xiàn)為腹痛、腹瀉，發(fā)病率在我國(guó)呈上升趨勢(shì)。結(jié)腸炎有急性與慢性兩種類(lèi)型，無(wú)論是急性還是慢性結(jié)腸炎，多與脾胃、大腸功能失調(diào)有關(guān)。大量文獻(xiàn)表明針灸對(duì)于腸道炎癥有很好的療效，本文以急性與慢性結(jié)腸炎模型大鼠為研究對(duì)象，電針大腸俞、天樞、足三里、上巨虛4個(gè)不