王益華，來麗麗

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州310053）

托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽的HPLC法測定研究

王益華，來麗麗

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州310053）

目的：建立托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽限度的測定方法，以有效控制藥品的質(zhì)量。方法：采用高效液相色譜法測定托吡酯原料中氨基磺酸鹽和硫酸鹽，Hamilton PRP-X100 Column色譜柱（250 mm×2.1 mm，5 μm），以4-羥基苯甲酸緩沖液-甲醇（80∶20）為流動(dòng)相等度洗脫，流速0.2 mL/min。結(jié)果：氨基磺酸鹽濃度在5.1～50.7 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，硫酸鹽濃度在5.0～50.3 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，主藥與氨基磺酸鹽和硫酸鹽能達(dá)到較好的基線分離。結(jié)論：本方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，可用于藥品質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；托吡酯；氨基磺酸鹽；硫酸鹽

托吡酯化學(xué)名為2，3：4，5-雙-0-（1-甲基亞乙基）-β-D吡喃果糖氨基磺酸酯，分子式為C12H21NO8S，為廣譜抗癲癇新藥原料，對各類癲癇發(fā)作均有效。其中原發(fā)性利繼發(fā)性全身強(qiáng)直-陣攣發(fā)作及單純或復(fù)雜部分發(fā)作效果尤其明顯，對肌陣攣、嬰兒痙攣也有效。本文采用高效液相色譜法測定托吡酯原料中的氨基磺酸鹽和硫酸鹽，方法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，為質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

1 儀器與試劑

Waters2695-432高效液相色譜儀（電導(dǎo)檢測器），托吡酯對照品（批號A64008003），氨基磺酸對照品（批號T20071019），硫酸鹽對照品（批號20080103），托吡酯原料（批號20121106）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［1-2］

Hamilton PRP-X100 Column色譜柱（250 mm× 2.1 mm，5 μm），4-羥基苯甲酸緩沖液∶甲醇=80∶20為流動(dòng)相等度洗脫，電導(dǎo)檢測器溫度40℃，流速0.2 mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量20 μL。

2.2 系統(tǒng)適用性

標(biāo)準(zhǔn)溶液（Std）：準(zhǔn)確稱取20.5 mg氨基磺酸和36.5 mg硫酸鉀到200 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解和稀釋到刻度，混勻，即得標(biāo)準(zhǔn)儲備液。精密移取5.0 mL上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液至20 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解和稀釋到刻度，混勻（氨基磺酸鹽和硫酸鹽濃度同為0.025 mg/mL）。樣品溶液（Spl）：稱量約200 mg托吡酯API至20 mL容量瓶中，精密稱定，加入約15 mL流動(dòng)相，超聲溶解，用流動(dòng)相稀釋溶解至刻度，混勻。Spike溶液：精密移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0 mL至10 mL容量瓶中，用樣品溶液稀釋定容至刻度，混勻。

按上述色譜條件進(jìn)樣20 μL測定，結(jié)果見圖1、圖2。標(biāo)準(zhǔn)溶液中，理論板數(shù)按氨基磺酸鹽和硫酸鹽峰計(jì)不低于1 000，拖尾因子（T）不大于2.0，符合要求。

圖1 樣品溶液HPLC圖

圖2 標(biāo)準(zhǔn)溶液HPLC圖

2.3 線性關(guān)系考察［3］

線性儲備溶液：稱量20.5 mg氨基磺酸和36.5 mg硫酸鉀到200 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解稀釋至刻度，混勻（氨基磺酸鹽和硫酸鹽濃度同為0.1 mg/mL）。

按照下表用流動(dòng)相進(jìn)一步稀釋線性儲備溶液，得到線性測試溶液，每份線性測試溶液各進(jìn)樣1次。結(jié)果見圖3。

圖3 線性溶液HPLC圖

以峰面積（Y）對濃度（X）作線性回歸。線性方程分別為：Y氨基磺酸=54 479X-76.513（r=0.999 8），Y硫酸鹽=300 000X-91 659（r=1.0）。線性范圍分別為氨基磺酸鹽5.1～50.7 μg/mL，硫酸鹽5.0～50.3 μg/mL。

2.4 定量限

取線性項(xiàng)下的最低濃度作為定量限，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄峰面積，氨基磺酸鹽、硫酸鹽的RSD分別為7.3%、6.1%。

2.5 精密度試驗(yàn)［4］

稱量約200 mg托吡酯原料藥至20 mL容量瓶中，精密稱定，加入線性儲備液2.0 mL，加入約15 mL流動(dòng)相，超聲溶解，用流動(dòng)相稀釋溶解至刻度，混勻。用0.45 μm的濾膜過濾，棄去2 mL初濾液。將以上經(jīng)過濾膜過濾的溶液作為供試品溶液，精密吸取以上同一份供試品溶液20 μL，平行進(jìn)樣6次，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件下測定峰面積，氨基磺酸鹽峰面積的RSD為3.8%，硫酸鹽峰面積的RSD為1.2%。以上表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

稱量約200 mg托吡酯原料藥至20 mL容量瓶中，精密稱定，加入線性儲備液2.0 mL，加入約15 mL流動(dòng)相，超聲溶解，用流動(dòng)相稀釋溶解至刻度，混勻。用0.45 μm的濾膜過濾，棄去2 mL初濾液。將以上經(jīng)過濾膜過濾的溶液作為供試品溶液，精密吸取以上同一份供試品溶液20 μL，按“2.1”色譜條件分析，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h進(jìn)樣，測定氨基磺酸鹽峰面積的RSD 為2.6%，硫酸鹽峰面積的RSD為1.9%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批托吡酯原料（批號20121106）6份，按照“2.5”供試品溶液制備操作，按“2.1”色譜條件分析，測定，計(jì)算其含量。測定氨基磺酸鹽峰面積的RSD為1.8%，硫酸鹽峰面積的RSD為1.2%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批托吡酯原料（批號20121106）6份，按照“2.5”供試品溶液制備操作，精密加入已知濃度的托吡酯對照品溶液，按“2.1”色譜條件分析，計(jì)算回收率，結(jié)果氨基磺酸鹽回收率為101.5%，氨基磺酸鹽的RSD為1.7%，硫酸鹽回收率為97.8%，硫酸鹽的RSD為1.1%。

3 討 論

經(jīng)分析檢測，氨基磺酸鹽和硫酸鹽主峰峰面積相對濃度的線性方程的決定系數(shù)R2均大于0.999，方法精密度及準(zhǔn)確度項(xiàng)下氨基磺酸鹽和硫酸鹽的平均回收率均在90%~110%范圍內(nèi)，結(jié)果均達(dá)到預(yù)期要求。

本實(shí)驗(yàn)通過對原料進(jìn)行系統(tǒng)適用性、線性、QL（定量限）、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率等項(xiàng)目的評估分析，結(jié)果都能達(dá)到預(yù)期要求，方法穩(wěn)定可靠，可采用HPLC法測定托吡酯原料中的氨基磺酸鹽和硫酸鹽，并用于托吡酯原料質(zhì)量控制。

但基于本方法所用電導(dǎo)檢測器的儀器特性，在常規(guī)分析中，氨基磺酸鹽主峰存在系統(tǒng)基線影響的風(fēng)險(xiǎn)，建議增加Spike溶液進(jìn)樣，對氨基磺酸鹽主峰加以控制。

［1］張鳳妹，王建.HPLC-電噴霧檢測器測定硫酸阿米卡星中卡那霉素和硫酸鹽的含量［J］.中國抗生素雜志，2015，40（5）：354-358.

［2］沈漪，潘穎，陳桂良.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定硫酸阿米卡星［J］.藥物分析雜志，2004，24（6）：633.

［3］王玨，茅小招，莫衛(wèi)民.高效液相色譜分析O-甲基異脲硫酸鹽含量［J］.化工生產(chǎn)與技術(shù)，2011，18（3）：59-61.

［4］陳妙蘭，蔡佳梓，李燕華.高效液相色譜法定量測定環(huán)己基氨基磺酸鈉中氨基磺酸殘留量的方法驗(yàn)證［J］.生命科學(xué)儀器，2013，11（3）：48-50.

（編輯：梁葆朱）

Determination of sulfamate and sulfate in topiramate by HPLC

Wang Yihua，Lai Lili
（Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310053）

Objective：To establish a method of testing limit of sulfamate and sulfate in topiramate raw material so as to control the quality of drugs.Method：Hamilton PRP-X100 column（250 mm×2.1 mm，5 μm）was taken and 4-hydroxybenzoic acid buffer solution-methanol（80∶20）as mobile phase.The flow rate was set at 0.2 mL/min.Resurt：The linear relationship between the concentration of sulfamate and the peak area was good in the range of 5.1～50.7 μg/mL.The linear relationship between the concentration of sulfate and the peak area was good in the range of 5.0～50.3 μg/mL.Conclusion：This method is high sensitivity，strong specificity，accurate and reliable，and can be used for quality control of drug.

HPLC；topiramate；sulfamate；sulfate

R284.2

A

1671-0258（2017）02-0028-03

王益華，研究生，E-mail：425407553@qq.com

來麗麗，碩士，助理研究員，E-mail：lailili85@163.com