彭波+劉春龍

摘 要：目的：構(gòu)建限量檢查醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿的薄層色譜法（TLC）。方法：采用TLC方法對(duì)醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿水平進(jìn)行測(cè)定分析，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）作為展開劑，經(jīng)耐用性分析，探討該方法的應(yīng)用效果。結(jié)果：（1）供試品色譜與對(duì)照品色譜相應(yīng)的部位上面未發(fā)現(xiàn)有斑點(diǎn)存在，陰性未存在干擾；（2）采用甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）作為展開劑時(shí)，供試品之間較易分離開來(lái)，烏頭堿斑點(diǎn)十分清楚、規(guī)整，且與其他斑點(diǎn)之間很容易分離，重復(fù)效果理想；（3）供試品色譜之中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的部位所產(chǎn)生的斑點(diǎn)強(qiáng)度以及規(guī)格均小于對(duì)照品斑點(diǎn)，或者無(wú)斑點(diǎn)產(chǎn)生。結(jié)論：薄層色譜法應(yīng)用于醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿含量的測(cè)定之中，操作便捷，重復(fù)性佳，應(yīng)加以推廣及應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：烏頭堿；薄層色譜法；姜紅活血止痛酊

烏頭，屬毛莨科，其有效成分為雙酯型的生物堿，其中有效成分為烏頭堿。臨床藥理學(xué)研究表明：烏頭堿具有鎮(zhèn)痛、麻醉以及降壓等方面的重要功效，但是其毒性非常強(qiáng)，其致死量?jī)H為3-5mg，且致死時(shí)間非常短（接觸到死亡僅需8min-4h）。由于烏頭堿的中毒劑量同治療劑量相當(dāng)，由于各方面的因素的影響可能會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)中毒而死的情況。烏頭堿很容易發(fā)生水解反應(yīng)，對(duì)烏頭堿中毒的醫(yī)學(xué)鑒定造成了極大的困難。對(duì)此，應(yīng)該強(qiáng)化對(duì)醫(yī)學(xué)制劑中烏頭堿的含量進(jìn)行定量測(cè)定分析，本研究主要采用薄層色譜法對(duì)醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿含量進(jìn)行測(cè)定分析，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器及試劑

1.1 儀器

層析缸、微量點(diǎn)樣器、玻璃噴霧器、薄層制版器以及電子天平等儀器。

1.2 試劑

烏頭堿對(duì)照品（鼎瑞化工上海有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20160112號(hào)）、姜紅活血止痛酊（醫(yī)院自主研制，批號(hào)為20161122號(hào)）、姜紅活血止痛酊陰性樣品（醫(yī)院自主研制，批號(hào)為20161203號(hào)）、乙醚（安徽金邦醫(yī)藥化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)927820-24-4）、氯仿（上海市長(zhǎng)達(dá)化工貿(mào)易有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20050802）、硅膠G（南京奧佳化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20121204）、羧甲基纖維素鈉（上海萬(wàn)照精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20101012）。上述試劑均屬于分析純，水屬于超純水。

2 方法及結(jié)果

2.1 溶液的制取

2.1.1 供試品溶液

首先取2.0mL的溶液樣品，將其置于錐形瓶之中，向其中加入5.0mL的濃氨液以及80mL的乙醚溶液，將其進(jìn)行振蕩、搖晃1h，靜置24h，分取乙醚層提取液，將其蒸干，然后再向其中加入污水乙醇溶液稀釋至1mL，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液

取一定量的烏頭堿對(duì)照品溶液，精確稱量，向其中加入無(wú)水乙醇溶液制成每1mL中含有2mg烏頭堿的對(duì)照品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液

根據(jù)姜紅活血止痛酊的制作工藝制備姜紅活血止痛酊的陰性對(duì)照品，以2.1.1中的方法制取陰性對(duì)照溶液。

2.2 限度測(cè)定

根據(jù)薄層色譜法，即TLC法（《中國(guó)藥典》（2010版））中的方法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液以及陰性對(duì)照溶液各為5.0μL，將其分別點(diǎn)在同一硅膠G薄層板之上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）作為展開劑，將其放置在氨蒸汽飽和的展開缸之中進(jìn)行展開處理，將其取出，晾干，按照順序噴以稀碘化鉍鉀試劑以及亞硝酸鈉乙醇試劑，將其置于可見光條件下進(jìn)行檢視。結(jié)果顯示：在供試品色譜之中，與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的部位出現(xiàn)的斑點(diǎn)大小于強(qiáng)度均明顯比對(duì)照品的斑點(diǎn)面積要小，或者不存在斑點(diǎn)。將溫度和相對(duì)濕度分別設(shè)置為18℃以及68%，在上述3批供試品色譜之中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的部位上面未發(fā)現(xiàn)有斑點(diǎn)存在，陰性未存在干擾。上述結(jié)果提示本方法的專屬較為理想。

2.3 耐用性測(cè)定

2.3.1 設(shè)定取樣量

取6mL的樣品，將烏頭堿限量設(shè)置為2.0mg，供試品點(diǎn)養(yǎng)量為5μL，與5μL的烏頭堿對(duì)照品溶液相當(dāng)。結(jié)果表明：供試品色譜之中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的部位所產(chǎn)生的斑點(diǎn)強(qiáng)度以及規(guī)格均小于對(duì)照品斑點(diǎn)，或者無(wú)斑點(diǎn)產(chǎn)生。

2.3.2 選取展開劑

對(duì)兩組展開劑進(jìn)行分組考察：（1）展開劑1：環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（三者體積比分別為5：2：1）；（2）展開劑2：甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）。按照2.2節(jié)中的相關(guān)方法進(jìn)行操作處理，結(jié)果顯示：溫度及相對(duì)濕度分別設(shè)置為18℃及68%時(shí)，采用展開劑1，供試品其他成分斑點(diǎn)之間的分離度非常小，接近于烏頭堿的斑點(diǎn)，分離起來(lái)難度較大。采用展開劑2時(shí)，供試品之間較易分離開來(lái)，烏頭堿斑點(diǎn)十分清楚、規(guī)整，且與其他斑點(diǎn)之間很容易分離，重復(fù)效果理想，因此選擇展開劑2，即甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）。其中：A表示環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（三者體積比分別為5：2：1）；B表示甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-氨水（體積比為20：18：3：6：1）。1：對(duì)照品；2、3、4：不同生產(chǎn)批號(hào)的供試品。

3 討論

醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊的主要化學(xué)成分為烏頭堿，它不僅屬于一種烏頭類植物的生理活性物質(zhì)，而且它也極易引起患者中毒。由于其毒性巨大，炮制不徹底、劑量過大以及煎煮方法不當(dāng)?shù)确矫娴囊蛩?，常常?huì)導(dǎo)致患者死亡的產(chǎn)生。醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊含有大量的烏頭堿，為了確保該制劑安全有效，應(yīng)注重對(duì)烏頭堿的含量進(jìn)行準(zhǔn)確地定量檢測(cè)。

根據(jù)《中國(guó)藥典》中的相關(guān)規(guī)定內(nèi)容，姜紅活血止痛酊的常用劑量為1.5-3.0g，含酯型生物堿以烏頭堿作為當(dāng)量進(jìn)行計(jì)算，不能超過0.15%。如果實(shí)驗(yàn)設(shè)定對(duì)照品的限量以止痛酊常用劑量的1.5g來(lái)計(jì)算，那么相對(duì)應(yīng)的烏頭堿對(duì)照品限量則為2.25mg，本研究中烏頭堿的實(shí)際設(shè)計(jì)量為2.0mg。所以，確保制劑安全的一個(gè)重要條件就是：供試品溶液的斑點(diǎn)強(qiáng)度及大小均小于相應(yīng)劑量的烏頭堿對(duì)照品溶液的斑點(diǎn)強(qiáng)度及大小，或者斑點(diǎn)未出現(xiàn)，此時(shí)烏頭堿的含量則在安全范圍之內(nèi)，可以放心用藥。本研究中設(shè)定點(diǎn)樣量大小為5μL，與5μL的烏頭堿對(duì)照品溶液相當(dāng)。本研究中所使用的方法參考了《中國(guó)藥典》（2010年版）中制定的相關(guān)操作守則及方法。實(shí)驗(yàn)中所運(yùn)用的烏頭堿溶液，則采用無(wú)水乙醇溶液對(duì)其進(jìn)行稀釋，應(yīng)注意新配新用，或者溶液配制好之后，將其置于溫度為2-8℃的冰箱中進(jìn)行保存，第一時(shí)間使用。

綜上所述可知，薄層色譜法應(yīng)用于醫(yī)院制劑姜紅活血止痛酊中烏頭堿含量的測(cè)定之中，操作便捷，重復(fù)性佳，應(yīng)加以推廣及應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]賀云杰，趙晨，李妍，等.參附強(qiáng)心丸中人參、大黃、桑白皮的薄層色譜鑒別及烏頭堿限度檢查[J].世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009，11（3）：468.

[2]黃可婧，王麗娟.附子理中片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].天津藥學(xué)，2014，26（5）：16-20.

[3]武琳，楊光，黃菲.連翹敗毒丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2014，21（5）：95-97.

[4]肖霞，曹俊凱.牡丹皮中丹皮酚的薄層層析鑒別[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2014，9（26）：256-257.