張麗娜
[摘 要]比較了多種阿奇霉素的薄層色譜條件,確定了分離效果較好的展開(kāi)系統(tǒng)和靈敏度較高的顯色劑。設(shè)計(jì)了系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)方法和三個(gè)濃度的對(duì)照品,從而確定了較理想的阿奇霉素及有關(guān)物質(zhì)薄層色譜檢測(cè)法。市售硅膠預(yù)制版,展開(kāi)劑為乙酸乙酯一正乙烷一二乙胺,顯色劑為苯酚3g,硫酸5m1、無(wú)水乙醇95 m1混勻,均勻噴至板上后80 C加熱數(shù)分鐘。該法靈敏度高、分離效果好,特別是系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)和多濃度點(diǎn)對(duì)照液的設(shè)計(jì),彌補(bǔ)了薄層色譜法測(cè)定阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)時(shí)結(jié)果的準(zhǔn)確性易受薄層色譜條件影響、且量化功能較差的弱點(diǎn),具有一定的特色。
[關(guān)鍵詞]阿奇霉素;薄層色譜法;降解物質(zhì);溶劑系統(tǒng);顯色劑
中圖分類(lèi)號(hào):R443 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1009-914X(2016)10-0339-01
阿奇霉素在當(dāng)前我國(guó)臨床醫(yī)學(xué)中得到較為廣泛的應(yīng)用,屬于新一代的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素,在廣譜抗菌方面具有重要作用。國(guó)際上對(duì)阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定主要有TLC法和HPLC法。在我國(guó)對(duì)阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定時(shí),應(yīng)當(dāng)結(jié)合我國(guó)的實(shí)際情況進(jìn)行系統(tǒng)化分析,就我國(guó)當(dāng)前檢測(cè)儀器和試劑的純度條件進(jìn)行分析,我們主要采用薄層色譜法對(duì)阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),選取分離效果較好的展開(kāi)系統(tǒng)以及靈敏度較高的顯色劑,對(duì)阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行可靠地保證。
1 檢測(cè)材料的選取
阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品,批號(hào):960202,北京藥品檢驗(yàn)所標(biāo)定,效價(jià)為975u/mg,有關(guān)物質(zhì)低于1. 5%;紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品,批號(hào): 3079312,中國(guó)藥品生物制品檢定所,效價(jià)為888u/mg;阿奇霉素原料及膠囊,北京太洋藥業(yè)公司提供。
苯酚、磷鉑酸、無(wú)水乙醇、硫酸、乙酸乙酯、正乙烷、二乙胺、三乙胺、三氯甲烷、甲醇、苯、冰乙酸均為市售分析純。
硅膠G預(yù)制板,市售,青島海洋化工廠和北京科聚友醫(yī)藥生物工程研究所生產(chǎn)。
2 檢測(cè)方法與檢測(cè)結(jié)果分析
2.1 對(duì)五種TLC展開(kāi)劑進(jìn)行對(duì)比分析
稱(chēng)取阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品、紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量,并選取經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)高溫條件下進(jìn)行加熱的阿奇霉素樣品適量,三種樣品分別加入污水乙醇進(jìn)行溶解,并加入標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)_保稀釋后的溶液每1毫升中大約含有30毫克的溶液,在此基礎(chǔ)上取適量阿奇霉素和紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行混合。那么通過(guò)觀察分析可知,當(dāng)前共有四種溶液,我們分別對(duì)這四種溶液進(jìn)行選取,滴于同一規(guī)格的硅膠預(yù)制板上,通過(guò)五種TLC展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)并進(jìn)行晾干,在此基礎(chǔ)上噴以相同的顯色劑進(jìn)行顯色,斑點(diǎn)形狀及斑點(diǎn)個(gè)數(shù)見(jiàn)表1.
通過(guò)苯-三氯甲烷-三乙胺(4:5:1)展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)時(shí),能夠?qū)⑵婷顾嘏c紅霉素進(jìn)行合理的分離,但拖尾現(xiàn)象較為明顯,在一定程度上影響了加熱破壞后樣品的雜質(zhì)檢出,導(dǎo)致雜質(zhì)檢出的實(shí)際效果缺乏準(zhǔn)確性。通過(guò)乙酸乙酯-正乙烷-二乙胺(5:5:1)展開(kāi)劑對(duì)溶液進(jìn)行展開(kāi)時(shí),可以看出阿奇霉素和紅霉素得到了有效的分離,無(wú)明顯拖尾現(xiàn)象,具有良好的雜質(zhì)檢出效果。通過(guò)三氯甲烷-笨-甲醇-濃氨(10:30:10:0.5)進(jìn)行展開(kāi),可以觀察到阿奇霉素和紅霉素勉強(qiáng)得到分離,盡管不存在拖尾現(xiàn)象,但是雜質(zhì)檢出的效果并不理想,僅能夠檢測(cè)出阿奇霉素、紅霉素以及三個(gè)其他雜質(zhì)斑點(diǎn)。使用笨-三氯甲烷-三乙胺(5:4:1)展開(kāi)劑能夠使阿奇霉素和紅霉素得到有效的分析,拖尾現(xiàn)象相對(duì)比較嚴(yán)重,并且在很大程度上影響了雜質(zhì)的檢出效果,無(wú)法可靠地檢測(cè)出其他雜質(zhì)斑點(diǎn)。使用甲醇-冰乙酸-水(8:2:1)進(jìn)行展開(kāi)時(shí),阿奇霉素和紅霉素勉強(qiáng)得到分離,但加熱破壞后樣品雜質(zhì)不能夠得到有效的檢出。從整體情況來(lái)看,乙酸乙酯-正乙烷-二乙胺(5:5:1)展開(kāi)劑的實(shí)際應(yīng)用占優(yōu)勢(shì),具有良好的檢測(cè)效果。
2.2 三種顯色劑的對(duì)比分析
將上述阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量用無(wú)水乙醇稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液,分別吸取適量點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上(同時(shí)點(diǎn)3塊板),用上述B展開(kāi)劑展開(kāi),取出晾十后分別噴以A,B,C 3種顯色劑顯色,由表2可看出,顯色劑B在檢測(cè)靈敏度、斑點(diǎn)與背景顏色反差力一面均較A,C顯色劑優(yōu)越。綜上所述,硅膠G為固定相,乙酸乙酯一正乙烷一二乙胺(5:5:1)為展開(kāi)劑,顯色劑為苯酚3g、硫酸5m1、無(wú)水乙醇95m1混勻,噴勻后在80度加熱數(shù)分鐘,此薄層色譜系統(tǒng)可作為阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)較理想的檢測(cè)方法。
2.3 阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)的檢查
取本品適量,精密稱(chēng)定,用無(wú)水乙醇溶解并制成每1ml中含30mg的溶液,作為供試品溶液;精密量取該溶液2.0ml,并取紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品30mg,置同一100m1容量瓶中,加無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照溶液(1);另精密量取供試品溶液1. 0和0. 5m1,分別置100m1量瓶中,加同溶稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照溶液(C2)和(C3)。按薄層色譜法實(shí)驗(yàn),吸取上述4種溶液適量,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯一正乙烷一二乙胺(5:5:1)為展開(kāi)劑,展開(kāi)后,晾干,噴以顯色液(取苯酚3g、硫酸5m1、無(wú)水乙醇95m1混勻),置80 C加熱數(shù)分鐘,至班點(diǎn)顯現(xiàn)。對(duì)照溶液(1)中阿奇霉素與紅霉素斑點(diǎn)應(yīng)分離完全;供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn),與對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)比較,最大雜質(zhì)斑點(diǎn)的顏色不得深于對(duì)照溶液(1)的主斑點(diǎn)(2%);雜質(zhì)總量不得超過(guò)3%。
2.4 供試品溶液的穩(wěn)定性考察
取上述阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液于配制2,4,24h后分別點(diǎn)樣,結(jié)果供試品溶液在4h內(nèi)可基本穩(wěn)定,在24h后阿奇霉素有大部分變?yōu)榧t霉素。
3 討論
3.1TLC法測(cè)定阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)的實(shí)際分離效果若存在一定差異性,那么會(huì)對(duì)測(cè)定的精準(zhǔn)程度產(chǎn)生一定影響,這就需要通過(guò)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)來(lái)對(duì)系統(tǒng)的有效性進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測(cè),從而明確阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)實(shí)際含量。通過(guò)測(cè)定試驗(yàn)可知,紅霉素是阿奇霉素的主要降解物質(zhì),易于得到,且斑點(diǎn)物質(zhì)與阿奇霉素相鄰,因而選取紅霉素作為薄層色譜的適用性實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),對(duì)于保證色譜系統(tǒng)有效性方面具有重要意義。
3.2TCL法在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中對(duì)阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定時(shí),也不免存在一些弱點(diǎn),尤其是在遇到多個(gè)雜質(zhì)斑點(diǎn)出現(xiàn)時(shí),對(duì)于斑點(diǎn)雜質(zhì)總量的加和上存在一定難度。這就要求在進(jìn)行阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定時(shí),可以通過(guò)多種濃度對(duì)照液的科學(xué)化配制,通過(guò)合理的比較估算,一定程度上保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
3.3薄層色譜法在對(duì)阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定的過(guò)程中,采用來(lái)自?xún)蓚€(gè)生產(chǎn)廠家的硅膠預(yù)制板進(jìn)行測(cè)定實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)效果呈現(xiàn)一致性。
3.4通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究可知,薄層色譜法檢測(cè)阿奇霉素及其有關(guān)物質(zhì)的具體實(shí)驗(yàn)方式在阿奇霉素片以及膠囊的測(cè)定試驗(yàn)中也同樣適用,也適用于羅紅霉素、克拉霉素及有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)。
3.5在薄層色譜法測(cè)定實(shí)驗(yàn)中,為有效的保證測(cè)定的準(zhǔn)確性,應(yīng)當(dāng)充分衡量降解物質(zhì)的可能性影響因素,保證在兩個(gè)小時(shí)內(nèi)將供試品溶液使用完畢。
參考文獻(xiàn)
[1] 鄧晶晶,唐克慧.大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法研究進(jìn)展[期刊淪文]中國(guó)藥業(yè)2012(18).
[2] 蔣嘩,劉紅菊,薛娜,郝曉花.阿奇霍素片的茜素紅荷移分光光度法測(cè)定[期刊淪文]中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜質(zhì)2005(08).