龐學(xué)豐++王思超　蒙宇華　李玉玲　劉歡　吳燕紅　黃海燕　馮玉青　唐麗萍　廖鍵僥　舒建龍　劉莎莎　杜永怡　林菊

【摘 要】目的：觀察止痛祛風(fēng)湯對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-8的影響。方法：將60只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，秋水仙堿組，止痛祛風(fēng)湯高、中、低劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組大鼠不限制飲水，自由進(jìn)食；模型對(duì)照組大鼠給予生理鹽水0.135 mg·kg-1進(jìn)行灌胃；秋水仙堿組大鼠給予秋水仙堿溶液0.135 mg·kg-1進(jìn)行灌胃；止痛祛風(fēng)湯高、中、低劑量組大鼠分別給予止痛祛風(fēng)湯31.25 g·（100 g）-1、15 g·（100 g）-1、7.5 g·（100 g）-1進(jìn)行灌胃。于第7天給藥后30 min，除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠采用注射尿酸鈉方式誘導(dǎo)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，分別檢測各組大鼠血清IL-6、IL-8水平的變化情況。結(jié)果：止痛祛風(fēng)湯高、中劑量組以及秋水仙堿組大鼠血清中的IL-6、IL-8含量均明顯降低，3組分別與模型對(duì)照組進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；止痛祛風(fēng)湯高、中劑量組與秋水仙堿組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。結(jié)論：止痛祛風(fēng)湯能通過降低IL-6、IL-8的水平而達(dá)到治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用。

【關(guān)鍵詞】 急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；止痛祛風(fēng)湯；IL-6；IL-8；大鼠

Effect of Zhitong Qufeng Tang（止痛祛風(fēng)湯）on IL-6 and IL-8 in Serum of Rats with Acute Gouty Arthritis

PANG Xue-feng，WANG Si-chao，MENG Yu-hua，LI Yu-ling，LIU Huan，WU Yan-hong，HUANG Hai-yan，

FENG Yu-qing，TANG Li-ping，LIAO Jian-jiao，SHU Jian-long，LIU Sha-sha，DU Yong-yi，LIN Ju

【ABSTRACT】Objective：To observe the effect of Zhitong Qufeng Tang（止痛祛風(fēng)湯）on IL-6 and IL-8 in serum of rats with acute gouty arthritis.Methods：Sixty healthy male Wistar rats were randomly divided into a blank control group，a model control group，a colchicine group，and high moderate and low dose groups of Zhitong Qufeng Tang（H，M and L groups），10 rats in each group.The rats in the blank control group are allowed to drink and eat freely.The rats in the model control group were given 0.135 mg·kg-1 of normal saline by gavage.The rats in the colchicine group were given intragastric administration of 0.135 mg·kg-1 of colchicine solution.The H，M and L groups were respectively given intragastric administration of 31.25 g·（100 g）-1，15 g·（100 g）-1 and

7.5 g·（100 g）-1 of Zhitong Qufeng Tang.Thirty minutes after administration in the third day，rats in all the groups but the blank control group were induced by injecting sodium urate to establish modes with acute gouty arthritis.The changes of IL-6 and IL-8 levels in rats serum were detected respectively.Results：The levels of IL-6 and IL-8 in rats of the colchicine group and the H and M groups were significantly decreased.The differences between the H，M groups and the model control group were statistically significant（P < 0.05）.The differences between the H，M groups and the colchicine group were not statistically significant（P > 0.05）.Conclusion：Zhitong Qufeng Tang can treat gouty arthritis by reducing the levels of IL-6 and IL-8.

【Keywords】 acute gouty arthritis；

Zhitong Qufeng Tang（止痛祛風(fēng)湯）；IL-6；

IL-8；rats

痛風(fēng)是遺傳性和（或）獲得性引起的嘌呤代謝障礙和（或）尿酸排泄減少所導(dǎo)致的一組疾病，是臨床常見疾病之一，目前發(fā)病日益增多，本病最常見的表現(xiàn)形式為痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性發(fā)作。研究資料表明，白細(xì)胞介素（IL）-6、IL-8在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起到了重要的作用。本研究擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究探討止痛祛風(fēng)湯對(duì)大鼠血清IL-6、IL-8水平的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠60只，體質(zhì)量（200±20）g，購于廣西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：桂醫(yī)動(dòng)字第11005號(hào)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 IL-6、IL-8檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；實(shí)驗(yàn)用尿酸鈉晶體（北京化學(xué)試劑公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 本實(shí)驗(yàn)選擇秋水仙堿片（云南昊邦制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H53021798）作為對(duì)照藥物；止痛祛風(fēng)湯則由本院新藥研發(fā)中心按藥物劑量和比例進(jìn)行制備提供；實(shí)驗(yàn)時(shí)將2500 mg尿酸鈉晶體加入到100 mL生理鹽水中，不斷進(jìn)行加溫?cái)嚢瑁詈笾瞥少|(zhì)量分?jǐn)?shù)為25 mg·mL-1的尿酸鈉溶液，供實(shí)驗(yàn)中造模時(shí)使用。

2 方 法

2.1 動(dòng)物造模及分組給藥 60只大鼠均進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周（置入鼠籠中），觀察大鼠無異常后，再隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，秋水仙堿組，止痛祛風(fēng)湯高、中、低劑量組，每組10只?？瞻讓?duì)照組大鼠不限制飲水，自由進(jìn)食；模型對(duì)照組大鼠給予生理鹽水0.135 mg·kg-1進(jìn)行灌胃；秋水仙堿組大鼠給予秋水仙堿溶液0.135 mg·kg-1進(jìn)行灌胃；止痛祛風(fēng)湯高、中、低劑量組大鼠分別給予止痛祛風(fēng)湯31.25 g·（100 g）-1、15 g·（100 g）-1、7.5 g·（100 g）-1進(jìn)行灌胃。每日1次，連續(xù)7 d。于第7天給藥后30 min，將空白對(duì)照組之外的其余各組大鼠按照國外Coderre方法[1]進(jìn)行造模：在大鼠右后足踝關(guān)節(jié)背側(cè)，采用6號(hào)注射針頭向右踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入0.2 mL的尿酸鈉溶液，制備急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的大鼠模型（實(shí)驗(yàn)過程中所有大鼠造模均成功，無大鼠死亡）。

2.2 IL-6、IL-8的檢測 除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠繼續(xù)給藥，3 d后采用腹腔注射水合氯醛對(duì)全部大鼠進(jìn)行麻醉，然后用5 mL注射器從腹主動(dòng)脈處取血，采用EDTA抗凝，置于4 ℃ 2000 r·min-1

離心機(jī)離心10 min，取上清液置于-20 ℃冰箱保存待測。最后采用雙抗體夾心ABC-ELISA法對(duì)各組大鼠血清IL-6、IL-8的含量進(jìn)行檢測，具體步驟和方法則按照檢測試劑盒說明書進(jìn)行。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，采用方差分析及t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

模型對(duì)照組大鼠血清IL-6、IL-8含量均顯著高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。止痛祛風(fēng)湯高、中劑量組以及秋水仙堿組大鼠血清IL-6、IL-8含量均明顯降低，3組分別與模型對(duì)照組進(jìn)行比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；止痛祛風(fēng)湯高、中劑量組與秋水仙堿組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表1。

4 討 論

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的急性發(fā)作主要是由于體內(nèi)的尿酸鹽沉積于關(guān)節(jié)部位而引起，常常突然發(fā)作。研究發(fā)現(xiàn)，由于關(guān)節(jié)局部溫度突然降低、血尿酸水平突然升高以及原有的尿酸結(jié)晶脫落等原因，導(dǎo)致大量尿酸鹽結(jié)晶進(jìn)入關(guān)節(jié)腔，被白細(xì)胞吞噬后，促使趨化因子、激肽等很多物質(zhì)不斷被釋放出來，進(jìn)而引起局部的各種炎癥反應(yīng)，釋放出多種不同的細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素（IL-1、IL-6、IL-8）和腫瘤壞死因子（TNF）等，促使炎癥范圍不斷擴(kuò)大，溶解并侵蝕其組織，從而出現(xiàn)紅腫熱痛等典型的臨床癥狀[2]。

既往研究發(fā)現(xiàn)，在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中，由于尿酸鈉晶體刺激產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯紅腫、劇烈疼痛以及功能障礙[3]。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)，痛風(fēng)的病理過程中存在趨化因子IL-8和其他單核因子及淋巴因子不同程度的參與[3-4]。Liu等[5]研究亦表明，采用尿酸鹽晶體注射誘導(dǎo)小鼠痛風(fēng)模型后，發(fā)現(xiàn)分離于新鮮血的單核細(xì)胞在尿酸鹽晶體的刺激下，IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β等炎性細(xì)胞因子的分泌均有明顯增加。這些研究結(jié)果均提示IL-6和IL-8在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起到了非常重要的促進(jìn)作用。

目前，痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性期主要使用抗炎鎮(zhèn)痛類藥物進(jìn)行止痛對(duì)癥治療，以及運(yùn)用藥物抑制尿酸生成或促進(jìn)尿酸排泄；但長期服用此類藥物可產(chǎn)生肝腎系統(tǒng)以及胃腸道損害，患者難以堅(jiān)持服用，至今尚無特效的根治藥物。中醫(yī)學(xué)將痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎歸屬于“痹病”“歷節(jié)風(fēng)”等范疇，認(rèn)為是因飲食失調(diào)，恣食膏粱厚膩，釀生濕熱，痹阻于關(guān)節(jié)肌肉導(dǎo)致，因此清熱利濕止痛是急性期的首選療法。目前國內(nèi)對(duì)中藥治療本病的研究不少，也取得了一定的效果，但對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中IL-6、IL-8影響的研究報(bào)道尚不多。王曉璐等[6]研究發(fā)現(xiàn)，五藤痛風(fēng)飲能明顯下調(diào)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)液中IL-8、TNF-α的水平而起到抗炎作用，是其治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制之一。謝人明等[7]研究發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)筋健骨膠囊治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎急性發(fā)作期的機(jī)制是通過顯著降低血清中IL-6、TNF-α、IL-1β及基質(zhì)金屬蛋白酶-3的水平而實(shí)現(xiàn)的。

止痛祛風(fēng)湯是課題負(fù)責(zé)人多年研究痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎診治而總結(jié)出的有效方藥，由白虎加桂枝湯合芍藥甘草湯化裁而成，具有祛風(fēng)除濕、清熱通絡(luò)止痛之功效。白虎加桂枝湯最早見于《金匱要略》，此方具有清熱通絡(luò)、調(diào)和營衛(wèi)的作用，是療效確切的治療痹病的經(jīng)典方；而芍藥甘草湯則具有緩急止痛的作用。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，止痛祛風(fēng)湯中的白芍具有抗炎、鎮(zhèn)痛、解痙、解熱作用，并且與桂枝配伍具有協(xié)同作用；忍冬藤、葛根、萆薢可以降低血脂；桂枝具有解熱、鎮(zhèn)痛的功效；甘草具有抗炎、鎮(zhèn)痛等作用；山慈菇則因含有秋水仙堿等成分而發(fā)揮止痛、降血尿酸作用[8]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，止痛祛風(fēng)湯能較快緩解患者的關(guān)節(jié)腫脹、疼痛等臨床癥狀，較好降低患者的血尿酸、C-反應(yīng)蛋白水平，表明其具有消腫止痛好、副作用小等優(yōu)點(diǎn)[9]。筆者前期已經(jīng)完成的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其能明顯抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度，能顯著降低血清中TNF-α、IL-1β水平[10]。

本研究結(jié)果提示，止痛祛風(fēng)湯治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是通過降低急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-6、IL-8水平實(shí)現(xiàn)的。

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收稿日期：2016-12-22；修回日期：2017-02-23