馮雷,羅亞楠,賀月華,王林杰,朱璐,雷水生

(1廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣州510700；2廣州醫(yī)科大學(xué))

CD31、CD34和CD133蛋白在嬰幼兒血管瘤組織中的表達(dá)及意義

馮雷1,羅亞楠1,賀月華1,王林杰2,朱璐1,雷水生1

(1廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院，廣州510700；2廣州醫(yī)科大學(xué))

目的 觀察CD31、CD34和CD133蛋白在嬰幼兒血管瘤(IH)組織中的表達(dá)，并探討其臨床意義。方法 收集IH患兒存檔蠟塊50例(增生期25例，消退期25例)、瘤旁正常皮膚組織5例，采用免疫組化SP法檢測(cè)組織中內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)標(biāo)志物CD31、CD34和CD133蛋白，采用HPIAS-1000圖文報(bào)告管理系統(tǒng)對(duì)CD31、CD34和CD133蛋白的表達(dá)進(jìn)行定量分析。結(jié)果 增生期血管瘤組織CD31、CD34和CD133蛋白的陽性面積率分別是23%±3%、19%±4%、37%±2%，積分光密度(IOD)分別是0.26±0.06、0.23±0.03、0.52±0.02，均高于消退期血管瘤組織和瘤旁正常皮膚組織(P均<0.05)，而消退期血管瘤組織和瘤旁正常皮膚組織中CD31、CD34和CD133蛋白的IOD和陽性面積率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。結(jié)論 EPCs標(biāo)志物CD31、CD34和CD133蛋白在增生期血管瘤組織中高表達(dá)，其在血管瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。

血管瘤；內(nèi)皮祖細(xì)胞；CD31蛋白；CD34蛋白；CD133蛋白；嬰幼兒

嬰幼兒血管瘤(IH)是一種良性血管性腫瘤，以血管內(nèi)皮細(xì)胞異常増殖為病理持征，好發(fā)于嬰幼兒出生時(shí)或出生后3～6個(gè)月，發(fā)病率為1%～2%，在白種人群中可以髙達(dá)12%[1]，但其發(fā)病機(jī)制尚不明確。內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)是一類能夠參與循環(huán)增殖并能分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的干細(xì)胞，目前認(rèn)為CD34、CD133共同標(biāo)記的即為EPCs[2]。同樣的，也有研究表明，EPCs同樣表達(dá)CD31。EPCs在血管瘤中含量極微，卻獨(dú)具自我更新、無限增殖、多向分化的能力。2015年12月～2016年4月，我們觀察了IH組織中CD31、CD34和CD133蛋白的表達(dá)情況?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院病理科2010～2015年IH存檔蠟塊50例，患兒中男22例，女28例；年齡1月～2歲，平均1.3歲；依據(jù)Mulliken分類增生期血管瘤25例、消退期血管瘤25例；術(shù)前均未行任何輔助性治療。另取瘤旁正常皮膚組織5例作為對(duì)照。

1.2 CD31、CD34和CD133蛋白檢測(cè)方法 兔抗人CD31、CD34單克隆抗體(美國GeneTex公司)，兔抗人CD133多克隆抗體(美國Proteintech公司)，山羊抗兔二抗(美國Bioword公司)，DAB顯色試劑盒(北京中杉生物技術(shù)有限公司)，超敏即用型SP通用型免疫組化試劑盒(福州邁新公司)。蠟塊常規(guī)脫水，透明及HE染色。采用免疫組化SP法檢測(cè)CD31、CD34與CD133蛋白，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以購買的陽性片作為陽性對(duì)照。CD31、CD34和CD133以細(xì)胞核或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)進(jìn)行蛋白定量分析。光鏡下每張切片隨機(jī)選取5個(gè)完整且不重疊的高倍鏡視野(×200)，測(cè)定每個(gè)視野下陽性反應(yīng)的積分光密度(IOD)、陽性反應(yīng)面積和所有細(xì)胞總面積，計(jì)算陽性面積率。陽性面積率(%)=單位面積中陽性反應(yīng)的總面積/單位面積中細(xì)胞的總面積×100%。

2 結(jié)果

增生期血管瘤組織CD31、CD34和CD133蛋白的IOD和陽性面積率均高于消退期血管瘤組織和瘤旁正常皮膚組織(P均<0.05)，而消退期血管瘤組織和瘤旁正常皮膚組織比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表1。

表1 IH及瘤旁正常皮膚組織CD31、CD34和CD133蛋白表達(dá)比較

注：與瘤旁正常皮膚組織比較，*P﹤0.05；與消退期IH組織比較，#P﹤0.05。

3 討論

目前認(rèn)為，內(nèi)皮細(xì)胞過度增殖、血管快速生長是IH病理組織學(xué)的最大特點(diǎn)。IH的自然病程大致分3個(gè)階段：①增殖期。大多出現(xiàn)在出生后的第1年，此階段以大量毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞快速增殖且不規(guī)則分布為主要特征，少見典型血管樣結(jié)構(gòu)。②消退期。大多在1歲左右開始，持續(xù)3～5年；其間血管瘤增殖減慢或停止，血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，血管樣結(jié)構(gòu)增多，細(xì)胞外基質(zhì)纖維和脂肪組織增生。③消退完成期。大多在5～8歲，血管瘤增生組織被纖維脂肪殘余及毛細(xì)血管替代，病灶處常伴有皮膚松弛、色素沉著以及瘢痕殘余。然而，其他脈管性腫瘤和血管畸形自然病程中增殖可在兒童和成人的任何階段發(fā)生，不會(huì)出現(xiàn)自行消退現(xiàn)象。

自1997年Asahara等用免疫磁珠法第一次從外周血分選出CD34+細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)這種細(xì)胞可以參與損傷后血管的新生，比新生微血管內(nèi)皮在形態(tài)學(xué)和蛋白質(zhì)的表達(dá)模式上表現(xiàn)出更多胚胎性，稱其為EPCs[3]。EPCs能夠循環(huán)增殖并分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞參與生理性血管形成，而且在病理狀態(tài)下能被動(dòng)員而增強(qiáng)代償性血管重建能力并參與腫瘤血管生成。CD133是新近發(fā)現(xiàn)的干細(xì)胞標(biāo)記，不表達(dá)于成熟內(nèi)皮細(xì)胞，被認(rèn)為是目前區(qū)分EPCs與內(nèi)皮細(xì)胞最主要的標(biāo)記[4]。研究表明，純化的CD133+細(xì)胞在體外能分化為內(nèi)皮細(xì)胞。在分化過程中，EPCs明顯失去CD133，并開始表達(dá)成熟內(nèi)皮細(xì)胞特有的表面標(biāo)志，如血管性血友病因子(vWF)。EPCs作為內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，功能上接近于干細(xì)胞[5]，不僅參與胚胎時(shí)期的血管生成，而且參與出生后的生理性和病理性血管新生。Yu等[6]發(fā)現(xiàn)，CD133主要存在于增殖期血管瘤，并在其標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)同時(shí)表達(dá)CD133和血管內(nèi)皮生長因子受體(KDR)的EPCs，因此推測(cè)EPCs可能與血管瘤早期的快速增殖有關(guān)。Zou等[7]發(fā)現(xiàn)，EPCs表達(dá)CD105、CD31、CD34、KDR、VWF、CD146等，但是并沒有CD14、CD45、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)，并且很多細(xì)胞能表達(dá)CD133，這與先前的研究相符的[8,9]。同樣，Kleinman等[10]研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞集落形成細(xì)胞(ECFCs)能表達(dá)CD31，而ECFCs是EPCs的一種亞型。從這些研究中不難發(fā)現(xiàn)CD31、CD34、CD133都是EPCs的標(biāo)記物。本研究結(jié)果顯示，CD31、 CD34和CD133蛋白質(zhì)在增生期血管瘤組織中高表達(dá)，從而證實(shí)增生期血管瘤中存在EPCs。有研究[10]顯示，IH患兒血循環(huán)中EPCs數(shù)量超出正常者15倍。EPCs在血管瘤中含量極微，卻獨(dú)具自我更新、無限增殖、多向分化的能力。因此，我們推測(cè)其可能是IH發(fā)生的根源，始動(dòng)IH的發(fā)生發(fā)展，血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞可能由滯留在胚胎血管發(fā)育早期的EPCs演化而來，但具體的分子機(jī)制還有待于進(jìn)一步闡明。

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廣東省企業(yè)技術(shù)研發(fā)與升級(jí)改造專項(xiàng)基金項(xiàng)目計(jì)劃(2013B021800191)。

雷水生(E-mail： leishuisheng@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.18.034

R739.5

B

1002-266X(2017)18-0092-03

2016-10-26)