米同國，黃占欣，趙 達(dá)，孟志敏，米國華

(1.河北工程大學(xué) 生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北 邯鄲056000； 2.石家莊江山動物藥業(yè)有限公司，河北 石家莊050000)

中草藥抗球散超微粉對柔嫩艾美耳球蟲感染雞免疫機(jī)能的影響

米同國1，黃占欣1，趙 達(dá)2，孟志敏1，米國華2

(1.河北工程大學(xué) 生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，河北 邯鄲056000； 2.石家莊江山動物藥業(yè)有限公司，河北 石家莊050000)

為探討中草藥抗球散超微粉防治雞柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)的作用機(jī)制，將150只20日齡供試雞隨機(jī)均分為Ⅰ組(感染給中草藥組)、Ⅱ組(感染不給藥組)和Ⅲ組(不感染不給藥組)。Ⅰ組、Ⅱ組人工感染柔嫩艾美耳球蟲，Ⅰ組于感染前1 d在飼料中添加1%的中草藥抗球散超微粉，分別測定供試雞血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量和外周血T淋巴細(xì)胞百分率，試驗結(jié)束時測定脾臟和法氏囊指數(shù)。結(jié)果顯示：與Ⅱ組相比，Ⅰ組的IgG、IgM、IgA抗體水平整體上呈上升趨勢，IgG抗體水平于感染后13、17、21 d分別顯著提高10.06%、14.78%、10.63%，IgM抗體水平于感染后13 d顯著提高18.18%，IgA抗體水平于感染后17 d顯著提高17.95%；Ⅰ組的外周血T淋巴細(xì)胞百分率于感染后14、21 d分別顯著提高7.20、6.20個百分點；試驗結(jié)束時，Ⅰ組的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)分別極顯著提高46.72%和43.82%。以上結(jié)果表明，中草藥抗球散超微粉能夠促進(jìn)柔嫩艾美耳球蟲感染雞免疫器官發(fā)育、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。

雞； 柔嫩艾美耳球蟲； 中草藥抗球散超微粉； 免疫球蛋白； T淋巴細(xì)胞； 免疫器官

雞球蟲病是危害養(yǎng)雞業(yè)的主要寄生蟲病之一，每年給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，防治雞球蟲病主要以化學(xué)藥物為主，但易產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留，有的抗球蟲藥還可導(dǎo)致動物機(jī)體免疫力下降。盲目使用抗球蟲藥，雖可達(dá)到防治雞球蟲病效果，但會由于雞體免疫力的下降而導(dǎo)致更嚴(yán)重的球蟲病暴發(fā)[1]。我國中草藥資源豐富，其防治疾病具有毒副作用小、無藥殘、不易產(chǎn)生耐藥性等特點。目前認(rèn)為，中草藥抗球蟲的作用，一方面是抑制球蟲的發(fā)育，另一方面是通過調(diào)節(jié)動物機(jī)體的免疫功能，產(chǎn)生非特異性免疫以增強(qiáng)機(jī)體抗病力，達(dá)到消除病原體及減輕其對組織細(xì)胞損傷、恢復(fù)機(jī)體正常生理功能的目的[2]。近年來，已有許多學(xué)者進(jìn)行了中草藥防治雞球蟲病的研究。鄭寅[3]研究發(fā)現(xiàn)，中草藥腸血平顆粒防治雞球蟲病效果良好，能夠顯著提高患球蟲病雞血清中l(wèi)gG、lgA、lgM的含量；郭莉等[4]報道，使用復(fù)方中草藥免疫增強(qiáng)劑后，抗球蟲指數(shù)和T淋巴細(xì)胞的E-玫瑰花環(huán)形成率及脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均顯著高于攻蟲不給藥組；王福傳等[5]報道，含有黃芪多糖的復(fù)方中草藥組能夠顯著提高供試雞的脾臟質(zhì)量、法氏囊質(zhì)量及T、B淋巴細(xì)胞相對數(shù)；黃占欣等[6]研究發(fā)現(xiàn)，中草藥抗球散超微粉防治雞球蟲病效果良好。本研究進(jìn)一步探討了中草藥抗球散超微粉對柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)感染雞免疫機(jī)能的影響，以期為中草藥抗球散超微粉的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試動物 1日齡羅曼褐蛋雞公雛由江山種禽(平山)有限公司提供，在嚴(yán)格消毒無球蟲污染的實驗室內(nèi)飼養(yǎng)，飼喂自配的不含球蟲藥飼料，雞只自由采食和飲水。

1.1.2 球蟲卵囊 雞柔嫩艾美耳球蟲卵囊購自上海獸醫(yī)研究所。試驗開始前經(jīng)雞體繁殖、復(fù)壯，用飽和鹽水漂浮法獲得供感染試驗用的新鮮卵囊，孢子化后計數(shù)，于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 供試藥品和主要試劑 中草藥抗球散超微粉由常山、檳榔、穿心蓮、地榆、黃芪、大青葉等組成，并由石家莊江山動物藥業(yè)有限公司中試生產(chǎn)，采用公司內(nèi)部超微粉技術(shù)制備，各中草藥均購自河北省安國市中草藥材市場。

免疫球蛋白lgG、IgM、lgA檢測試劑盒及2%的α-醋酸萘酯購自上海朗頓生物科技有限公司。

1.2 供試動物分組與處理

參照葛凱等[7]的方法，試驗前，連續(xù)2 d對供試雞進(jìn)行糞便檢查，確認(rèn)無球蟲感染后，參照索勛等[1]的方法，將150只20日齡試驗雞隨機(jī)均分成3組，分別為Ⅰ組(感染給中草藥組)、Ⅱ組(感染不給藥組)、Ⅲ組(不感染不給藥組)。早晨逐只空腹稱質(zhì)量、編號，對體質(zhì)量差別較大的組別進(jìn)行局部調(diào)整，使各組體質(zhì)量均勻一致。感染給中草藥組按1%的比例在飼料中添加中草藥抗球散超微粉。于給藥第2天，Ⅰ組和Ⅱ組每只供試雞口服接種1×105個柔嫩艾美耳球蟲孢子化卵囊。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 血清免疫球蛋白 參照葛凱等[7]的方法，分別于感染前(0 d)和感染后5、9、13、17、21 d，每組隨機(jī)抽取5只雞，每只雞心臟采血2～3 mL，將采集的血液不加抗凝劑，室溫靜置1 h，2 000 r/min離心10 min，分離血清。將分離的血清置于-20 ℃保存?zhèn)溆?，測定血清免疫球蛋白。

1.3.2 外周血T淋巴細(xì)胞百分率 參照吳長德等[8]的方法，分別于感染前(0 d)和感染后7、14、21 d，每組隨機(jī)抽取5只雞，每只雞心臟采血2～3 mL，將采集的血液加EDTA抗凝，采用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)測定法測定外周血T淋巴細(xì)胞百分率(每張涂片在油鏡下查200個淋巴細(xì)胞,計算T淋巴細(xì)胞 ANAE陽性百分率)。

1.3.3 免疫器官指數(shù) 供試雞感染后21 d(試驗結(jié)束時)，稱質(zhì)量后宰殺各組所有供試雞，摘取脾臟和法氏囊，剔盡脂肪及其他組織，用吸水紙吸干表面液體后稱鮮質(zhì)量，計算免疫器官指數(shù)。

脾臟指數(shù)=脾臟鮮質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)；

法氏囊指數(shù)=法氏囊鮮質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥抗球散超微粉對球蟲感染雞血清免疫球蛋白的影響

由表1可知，與Ⅲ組相比，感染5 d后，Ⅰ組和Ⅱ組的血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量整體上呈現(xiàn)不同程度的升高。與Ⅱ組相比，Ⅰ組IgG抗體水平于感染后13、17、21 d分別顯著提高10.06%、14.78%、10.63%，IgM抗體水平于感染后13 d顯著提高18.18%，IgA抗體水平于感染后17 d顯著提高17.95%。

表1 中草藥抗球散超微粉對球蟲感染雞血清免疫球蛋白的影響 g/L

注：同列數(shù)據(jù)所標(biāo)小寫字母不同，表示差異顯著(P<0.05)，下同。

2.2 中草藥抗球散超微粉對球蟲感染雞外周血T淋巴細(xì)胞百分率的影響

與Ⅱ組相比，感染后14、21 d，Ⅰ組的外周血T淋巴細(xì)胞百分率分別顯著提高了7.20、6.20個百分點(表2)，說明中草藥抗球散超微粉能夠提高雞外周血中T淋巴細(xì)胞數(shù)。

表2 中草藥抗球散超微粉對球蟲感染雞外周血T淋巴細(xì)胞百分率的影響 %

2.3 中草藥抗球散超微粉對球蟲感染雞免疫器官指數(shù)的影響

試驗結(jié)束時，與Ⅱ組相比，Ⅰ組的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)分別極顯著提高46.72%和43.82%(表3)，說明中草藥抗球散超微粉能夠促進(jìn)球蟲感染雛雞免疫器官的發(fā)育。

表3 中草藥抗球散超微粉對球蟲感染雞免疫器官指數(shù)的影響 mg/g

注：同行數(shù)據(jù)大寫字母不同，表示差異極顯著(P<0.01)；小寫字母不同，表示差異顯著(P<0.05)。

3 結(jié)論與討論

動物機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫主要通過成熟的B、T淋巴細(xì)胞實現(xiàn),由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體(IgG、IgM、IgA)參與體液免疫，T淋巴細(xì)胞是介導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫的重要細(xì)胞,成熟的B 、T淋巴細(xì)胞主要存在于血液及淋巴結(jié)、脾臟等外周免疫器官中, 因此,動物血液中的抗體水平和T淋巴細(xì)胞數(shù)目分別是衡量機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)[8]。本研究結(jié)果顯示，雛雞感染柔嫩艾美耳球蟲后，給中草藥組雛雞血清IgG、IgM、IgA含量升高，其中IgG抗體水平升高維持的時間比較長，此結(jié)果與葛凱等[7]、劉晶等[9]、鄭寅[3]報道的基本一致。表明中草藥抗球散超微粉能夠增強(qiáng)柔嫩艾美耳球蟲感染雞機(jī)體體液免疫應(yīng)答。本研究發(fā)現(xiàn)，感染給中草藥組外周血T淋巴細(xì)胞百分率顯著提高，此結(jié)果與吳長德等[8]、李群道等[10]報道的基本一致，表明中草藥抗球散超微粉能夠增強(qiáng)柔嫩艾美耳球蟲感染雞機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答。分析其原因，可能是中草藥抗球散超微粉組方中不但含有殺蟲、驅(qū)蟲的檳榔、常山等中草藥，亦添加了黃芪等提高機(jī)體免疫力的中草藥，從而提高機(jī)體的抗病能力。本研究結(jié)果說明，中草藥抗球散超微粉能夠提高柔嫩艾美耳球蟲感染雞機(jī)體免疫功能。

脾臟、法氏囊是禽類最重要的免疫器官，參與全身的體液免疫和細(xì)胞免疫。免疫功能的高低取決于免疫器官的發(fā)育狀態(tài)。免疫器官質(zhì)量的增加是由其自身細(xì)胞生長發(fā)育和分裂增殖所致，質(zhì)量增加表明機(jī)體的免疫機(jī)能提高[10]，而免疫器官指數(shù)(免疫器官相對質(zhì)量)比免疫器官質(zhì)量更能反映免疫器官的發(fā)育狀態(tài)，免疫器官指數(shù)的高低，在一定程度上可反映機(jī)體免疫水平或免疫機(jī)能狀態(tài)[11-12]。本研究結(jié)果顯示，感染給中草藥組能夠極顯著提高脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，此結(jié)果與王福傳等[5]、郭莉等[4]的報道一致?？梢姡胁菟幙骨蛏⒊⒎塾写龠M(jìn)柔嫩艾美耳球蟲感染雞免疫器官發(fā)育的作用。其原因可能是中草藥抗球散超微粉組方中的抗球蟲中草藥抑制了球蟲的發(fā)育繁殖，減少了其對機(jī)體的損害，增加了采食量，促進(jìn)了各器官的生長發(fā)育。

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Effects of Chinese Herb-Kangqiusan Superfine Powder on Immune Functions in Chicks Infected withEimeriatenella

MI Tongguo1,HUANG Zhanxin1,ZHAO Da2,MENG Zhimin1,MI Guohua2

(1.School of Life Science and Food Engineering,Hebei University of Engineering,Handan 056000,China, 2.The Corporation of Shijiazhuang Jiangshan Animal Pharmaceutical,Shijiazhuang 050000,China)

The experiment was designed to investigate the preventive mechanisms of Chinese herb-Kangqiusan superfine powder on chicks infected withEimeriatenella.150 experimental chicks of 20-day-old were randomly divided into groupⅠ(infection group with Chinese herb), groupⅡ(infection group without medicine), group Ⅲ(blank group).The chicks in groupⅠand groupⅡ were infected withEimeriatenella,the chicks in groupⅠ were fed with basal diet with 1% Chinese herb at 1 day before infection.The content of immunoglobulin and the percent of T cells in peripheral blood were detected respectively,and the index of spleen and bursa of fabricius were determined at the end of test.The results showed that,compared with groupⅡ group,the content of IgG,IgM and IgA in chicks of groupⅠincreased as a whole,the content of IgG in chicks of groupⅠincreased by 10.06%,14.78%,10.63% at 13,17,21 days after infection respectively,the content of IgM in chicks of groupⅠincreased by 18.18% at 13 days after infection,the content of IgA in chicks of groupⅠincreased by 17.95% at 17 days after infection;the percent of T cells from peripheral blood in chicks of groupⅠincreased by 7.20 and 6.20 percentage points at 14 and 21 days after infection respectively;the index of spleen and bursa of fabricius in chicks of groupⅠincreased by 46.72% and 43.82% at the end of test respectively.The results indicated that Chinese herb-Kangqiusan superfine powder could promote the development of immune organ and enhance immunity functions in chicks infected withE.tenella.

chicks;E.tenella; Chinese herb-Kangqiusan superfine powder; immunoglobulin; T cells; immune organ

2016-11-15

河北省科技支撐計劃項目(131200132A)

米同國(1963-)，男，河北景縣人，副教授，本科，主要從事基礎(chǔ)、預(yù)防和臨床獸醫(yī)學(xué)的教學(xué)與科研工作。 E-mail:hzx641015@163.com

S859.3

A

1004-3268(2017)05-0144-04