任彩瑗， 任 鋒， 李俊峰， 丁 美， 陳 煜， 段鐘平， 張桓虎

(1 山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 消化科， 太原 030001；2 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 肝病研究所， 北京 100069)

片仔癀治療石膽酸灌胃誘導(dǎo)膽囊炎豚鼠模型的效果觀察

任彩瑗1， 任 鋒2， 李俊峰2， 丁 美2， 陳 煜2， 段鐘平2， 張桓虎1

(1 山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 消化科， 太原 030001；2 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 肝病研究所， 北京 100069)

目的 探討傳統(tǒng)中藥片仔癀對膽囊炎動物模型的治療效果。方法 將80只豚鼠(雌雄各半)隨機分為空白對照組(10只，與模型組相同劑量的PBS灌胃)，膽囊炎模型組(20只，石膽酸灌胃)，片仔癀組(30只，在膽囊炎模型基礎(chǔ)上，加用片仔癀灌胃)，熊去氧膽酸(UCDA)組(20只，在膽囊炎模型基礎(chǔ)上，加用UCDA)。觀察各組豚鼠的癥狀、膽囊病理損傷及其肝功能[ALT、AST、TBil、DBil、IBil和總膽汁酸(TBA)]變化。計量資料2組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果 與模型組相比，片仔癀組豚鼠狀態(tài)明顯較好，毛發(fā)較為光亮整齊，精神狀態(tài)較好，飲食較好，15 d后均未出現(xiàn)死亡。B超和動態(tài)血流圖顯示，與模型組相比，片仔癀組膽囊形態(tài)基本恢復(fù)至正常水平，膽囊矢狀徑[(14.92±1.36)mm vs (16.51±0.65)mm]、橫狀徑[(21.25±1.61)mm vs (23.93±0.84)mm]和膽囊厚度[(0.75±0.049)mm vs (0.90±0.03)mm]均減小，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。HE染色表明，片仔癀治療可顯著改善膽囊病理損傷。與模型組比較，片仔癀組ALT[(316.50±264.50)U/L vs (684.71±87.73)U/L]、AST[(88.78±16.69) U/L vs (180.2±84.40)U/L]、TBil[(0.18±0.10) μmol/L vs (1.43±0.90)μmol/L]、DBil[(0.06±0.05)μmol/L vs (0.23±0.07)μmol/L]、IBil[(0.12±0.06)μmol/L vs (1.20±0.55)μmol/L]和TBA[(42.40±40.57)μmol/L vs (271.42±148.94)μmol/L]均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。結(jié)論 片仔癀對膽囊炎豚鼠模型的癥狀、膽囊病理損傷和肝功能均具有顯著的改善作用。

膽囊炎； 片仔癀； 中成藥； 豚鼠； 治療結(jié)果

膽囊炎是細(xì)菌性感染或化學(xué)性刺激(膽汁成分改變)引起的膽囊炎性病變[1]。目前西藥治療膽囊炎方法單一，主要是在發(fā)作期或不適時口服熊去氧膽酸(UDCA)、茴三硫等，或配合止痛劑和抗生素，個別患者行膽囊切除手術(shù)[2]，治療手段和療效十分有限。中醫(yī)的用藥配伍強調(diào)辨證施治的整體觀念，運用多種有效藥物對整體進行調(diào)節(jié)，適用于膽囊炎病變的多癥候和復(fù)雜性。傳統(tǒng)中成藥片仔癀的主要成分為麝香、牛黃、蛇膽、三七，性味苦、微甘、具有清熱解毒、涼血化瘀、消腫止痛的功效[3]。本研究旨在觀察片仔癀對膽囊炎豚鼠動物模型的治療效果，并闡明其關(guān)鍵作用機制，從而為臨床應(yīng)用片仔癀治療膽囊炎提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和藥品 普通級英國短毛種豚鼠雌雄各半，購自首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，并在該中心飼養(yǎng)。豚鼠體質(zhì)量400～500 g，生產(chǎn)單位為北京隆安實驗動物養(yǎng)殖中心，實驗動物許可證號：SYXK(京)2013-0005，動物合格證號：SCXK(京)2014-0003。片仔癀由福建漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司提供；石膽酸購于西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司。

1.2 動物分組和處理 將80只豚鼠隨機分為空白對照組(10只，與模型組相同劑量的PBS灌胃)、膽囊炎模型組(20只，石膽酸300 mg·kg-1·次-1灌胃，連續(xù)15 d)、片仔癀組(30只，在膽囊炎模型基礎(chǔ)上，加用片仔癀360 mg·kg-1·次-1灌胃，1次/d，連續(xù)15 d)和UCDA組(20只，在膽囊炎模型基礎(chǔ)上，加用UDCA 120 mg·kg-1·次-1灌胃，1次/d，連續(xù)15 d)。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察整個試驗過程中豚鼠精神、毛發(fā)以及采食的異常變化，每天進行體質(zhì)量檢測并記錄。造模結(jié)束后第2天，采用TC-302全數(shù)字化超聲診斷系統(tǒng)觀察膽囊是否腫大、膽囊壁是否毛糙、膽囊透聲是否欠佳，以判定膽囊炎豚鼠是否造模成功。檢測不同干預(yù)方式對膽囊炎豚鼠膽囊形態(tài)的影響。造模結(jié)束后第3天，眼球取血，室溫靜置30 min，3000r/min離心10 min，取上清，-20 ℃保存?zhèn)溆?，用于肝功能檢測；在同一時間點處死豚鼠，剖腹，無菌注射器抽取膽汁，-20 ℃保存?zhèn)溆茫蝗∧懩遥兹┕潭ê笫灠?，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察膽囊炎造模情況及各組膽囊的病理損傷情況。采用全自動生物化學(xué)分析儀，檢測豚鼠血清ALT、AST、TBil、DBil、IBil和總膽汁酸(TBA)的水平。

2 結(jié)果

2.1 不同干預(yù)方式對膽囊炎豚鼠體征的影響 造模第2周偶見模型組有毛發(fā)失色、脫毛現(xiàn)象，綣縮姿勢，精神欠佳，食欲不振； 15 d后，模型組有2只豚鼠死亡(可能由于灌胃導(dǎo)致的物理損傷或其他原因)。與模型組相比，片仔癀組和UDCA組的豚鼠狀態(tài)明顯較好，毛發(fā)較為光亮整齊，精神狀態(tài)較好，飲食較好，15 d后均未出現(xiàn)死亡。

2.2 膽囊的形態(tài)學(xué)變化情況 B超顯示，開始造模1周后，模型組膽囊異常膨脹，約為對照組的2～3倍，有時在膽囊中可見米粒大黃白色懸浮物或干泥沙樣結(jié)石(本實驗中較少)；肝臟組織中未見明顯病變。與正常對照組相比，石膽酸灌胃可導(dǎo)致膽囊的矢狀徑、橫狀徑以及膽囊壁厚度的增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.01)(圖1，表1)。

B超和動態(tài)血流圖顯示，與模型組相比，片仔癀組和UDCA組的膽囊形態(tài)基本恢復(fù)到正常水平。與模型組相比，片仔癀組和UDCA組膽囊矢狀徑、橫狀徑和膽囊厚度均減小，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)(圖2，表2)。

圖1 B超檢測豚鼠膽囊矢狀徑、橫狀徑和膽囊厚度

表1 造模1周后空白對照組和模型組膽囊矢狀徑、橫狀徑和膽囊厚度的比較

圖2 各組豚鼠膽囊B超和動態(tài)血流圖

表2 各組豚鼠膽囊矢狀徑、橫狀徑和膽囊厚度的比較

2.3 不同干預(yù)方式對膽囊炎豚鼠肝功能的影響 與空白對照組比較，模型組的ALT、AST、TBil、DBil、IBil和TBA均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。與模型組比較，片仔癀組ALT、AST、TBil、DBil、IBil和TBA均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。與UDCA組比較，片仔癀組DBil顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.04)，ALT、AST、IBil和TBA水平2組間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.05)(表3)。

3 討論

片仔癀是源于明朝宮廷秘方，具有500年歷史的傳統(tǒng)名貴中成藥。傳統(tǒng)片仔癀為棕黃色或灰褐色，有密細(xì)紋，可見霉斑，氣微香，味苦、微甘，主要成分為麝香、牛黃、蛇膽、三七。方中牛黃、蛇膽清熱解毒，為君藥；麝香活血通經(jīng)、消腫止痛，為臣藥；三七又稱田七，散瘀消腫止痛，為佐藥。諸藥合用，共奏清熱解毒、涼血化瘀、消腫止痛之功。其配方配料搭配合理，組方嚴(yán)謹(jǐn)[4]，是一種可以用于多種炎癥的藥品，且治療效果較好[5]，并與慢性肝病合并膽囊炎的干預(yù)需求和機理非常吻合。有文獻[6]報道，片仔癀可抑制促炎因子引起的炎性損害而控制感染，從而對膽囊炎起到較好的干預(yù)作用。本實驗也發(fā)現(xiàn)，片仔癀可顯著減輕豚鼠模型膽囊炎的癥狀。

血清ALT、AST水平可反映肝細(xì)胞的損傷程度[7]，本研究顯示，石膽酸誘導(dǎo)的膽囊炎模型組的ALT、AST、TBil、DBil、IBil和TBA較空白對照組顯著升高，即石膽酸在誘導(dǎo)膽囊炎模型的同時也會造成肝細(xì)胞不同程度的損傷。在中醫(yī)看來，本病病位在膽腑，與肝失疏泄、脾失健運、胃失和降密切相關(guān)，治療大法為疏肝利膽。因此“肝膽兼治”是膽囊炎的治療大法[8-10]。既住文獻[11-14]報道，片仔癀具有較好的保肝護肝作用，對膽囊炎也有較好的干預(yù)作用。本研究顯示，片仔癀治療組豚鼠的ALT、AST、TBil、DBil、IBil和TBA水平均顯著低于模型組(P值均<0.05)，且片仔癀組DBil水平顯著低于UDCA組，表明片仔癀可顯著改善肝細(xì)胞的損傷程度。

表3 不同干預(yù)方式對膽囊炎豚鼠ALT、AST、TBil、DBil、IBil和TBA的影響

膽囊炎的基本病機是膽失通降，不通則痛，治療上遵循“急則治標(biāo)，緩則治本”的原則[8]。疼痛是膽囊炎患者就診時的主要臨床癥狀，對此應(yīng)先治其標(biāo)，待疼痛癥狀稍微緩解后再行施治。有文獻[15]報道，片仔癀具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，可幫助患者減輕疼痛癥狀。綜上，片仔癀對膽囊炎的干預(yù)作用與其抗炎[16]、保肝[12]、鎮(zhèn)痛等[15]的綜合作用有關(guān)。

本研究結(jié)果表明片仔癀對豚鼠膽囊炎具有較好的治療作用，今后將對片仔癀的利膽、消炎、鎮(zhèn)痛等作用進一步深入研究，為膽囊炎的臨床治療提供更為豐富的實驗依據(jù)。

[1] Editorial Board of Chinese Journal of Digestion. Chinese consensus on the medical diagnosis and treatment of chronic cholecystitis and gallstones(2014)[J]. J Clin Hepatol, 2015, 31(1): 7-11．(in Chinese) 中華消化雜志編輯委員會. 中國慢性膽囊炎、膽囊結(jié)石內(nèi)科診療共識意見(2014年)[J]. 臨床肝膽病雜志, 2015, 31(1): 7-11．

[2] YU LM, HE S, GAO YH. Acute cholecystitis: WSES position statement[J]. J Clin Hepatol, 2015, 31(2): 157-159. (in Chinese) 于黎明, 何松, 高沿航. 急性膽囊炎:世界急診外科學(xué)會立場聲明[J]. 臨床肝膽病雜志, 2015, 31(2): 157-159.

[3] LIU CS. A summary of clinical application of Pien Tze Huang[J]. Beijing Chin Med, 2001, 20(5): 63. (in Chinese) 劉叢盛. 片仔癀臨床應(yīng)用綜述[J]. 北京中醫(yī), 2001, 20(5): 63．

[4] ZHANG LH, CI H, GUAN T. Research on the rational application of Pien Tze Huang[J]. Cap Food Med, 2016, 23(18): 84-85.(in Chinese) 張立海, 慈慧, 管濤. 片仔癀的合理應(yīng)用研究[J]. 首都食品與醫(yī)藥, 2016, 23(18): 84-85．

[5] WANG XY, WANG YS. A summary of clinical application of Xin Pien Tze Huang[J]. China Pharmacist, 2005， 8(3)：249-250．(in Chinese) 王曉燕, 王允生. 新癀片的臨床應(yīng)用綜述[J]. 中國藥師, 2005, 8(3): 249-250．

[6] LIU LX, ZOU YH, ZHU LQ, et al. Effect of Pien Tze Huang on the amount of TNF-α, ICAM-1 and VCAM-1 of focal cerebral infarction rats[J]. Hebei J TCM, 2014, 36(9): 1382-1384．(in Chinese) 劉麗星, 鄒憶懷, 朱陵群, 等. 片仔癀對局灶性腦梗死大鼠腫瘤壞死因子-α、細(xì)胞間黏附分子-1及血管細(xì)胞黏附分子-1含量的影響[J]. 河北中醫(yī), 2014, 36(9): 1382-1384．

[7] LIN WH, CHEN HY. The diagnostic value of ALT, AST, GGT, CHE in liver disease[J]. J Modern Clin Med Bioengineering, 2005, 11(3):232-233．(in Chinese) 林偉華, 陳華英. ALT、AST、GGT、CHE在肝病中的診斷價值[J]. 現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志, 2005, 11(3): 232-233．

[8] WANG YY. Internal medicine of chinese journal[M]. Shanghai： Shanghai Scientific and Technical Publishers, 2000: 215-225．(in Chinese) 王永炎. 中醫(yī)內(nèi)科學(xué)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社, 2000: 215-225．

[9] LI ZQ, PANG YQ. Chinese medicine hepatobiliary syndrome[M]. Beijing：Beijing People′s Health Publishing House, 2003: 439-444．(in Chinese) 李正全, 龐佑清. 中醫(yī)肝膽病證學(xué)[M]. 北京： 北京人民衛(wèi)生出版社, 2003: 439-444．

[10] HUANG JM, ZHAO JY, WAN Y, et al. Study on protective action of complex prescription Pien Tze Huang ganbao on acute liver injury[J]. World J Integr Tradit Western Med, 2015, 10(9): 1216-1218．(in Chinese) 黃進明, 趙錦燕, 萬蕓, 等. 復(fù)方片仔癀肝寶對急性肝損傷的保護作用研究[J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2015, 10(9): 1216-1218．

[11] HONG F. Protective effect of Pien Tze Huang on the liver damage induced by CCL4[J]. Strait Pharm J, 2004, 16(2): 40-42．(in Chinese) 洪緋. 片仔癀對CCL4肝損害的保護作用研究[J]. 海峽藥學(xué), 2004, 16(2): 40-42．

[12] LEE KK, KWONG WH, CHAU FT, et al. Pien Tze Huang protects the liver against carbon tetrachloride-induced damage[J]. Pharmacol Toxicol, 2002, 91(4): 185-192．

[13] HUANG ZS. Clinical observation on the effect of Xiaochaihu decoction combined with Pien Tze Huang capsule on the treatment of acute cerebral hepatitis A[J]. West China Med J, 2015, 25(12): 1095．(in Chinese) 黃周師. 小柴胡湯加味合片仔癀膠囊輔助治療急慢性乙型肝炎甲胎蛋白增高的臨床觀察[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2015, 25(12): 1095．

[14] ZHONG R, CHEN Y. Clinical study on treatment of chronic hepatitis B with cholecystitis by Pien Tze Huang[J]. For All Health, 2016, 10(9): 296-297．(in Chinese) 鐘蕊, 陳煜. 片仔癀治療慢性乙型肝炎合并膽囊炎的臨床研究[J]. 大家健康, 2016, 10(9): 296-297．

[15] SUN Z, HUANG XZ, CHEN PJ, et al. Preliminary study on pharmacological action of Pien Tze Huang[J]. Chin Tradit Patent Med, 1989, 11(11): 25-28．(in Chinese) 孫政, 黃學(xué)中, 陳佩嬌， 等. 片仔癀藥理作用初探[J]. 中成藥, 1989, 11(11): 25-28．

[16] HUANG JM. Antipyretic and anti-inflammatory effects of Pien Tze Huang on dry yeast induced febrile response in rabbits[J]. Strait Pharm J, 2015, 27(10): 11-13.(in Chinese) 黃進明. 片仔癀對干酵母致新西蘭兔發(fā)熱模型的解熱抗炎作用[J]. 海峽藥學(xué), 2015, 27(10): 11-13.

引證本文：REN CY, REN F, LI JF, et al. Clinical effect of Pien Tze Huang in treatment of guinea pigs with cholecystitis induced by lithocholic acid given by gavage[J]. J Clin Hepatol, 2017, 33(5): 905-908. (in Chinese) 任彩瑗， 任鋒， 李俊峰， 等. 片仔癀治療石膽酸灌胃誘導(dǎo)膽囊炎豚鼠模型的效果觀察[J]. 臨床肝膽病雜志, 2017, 33(5): 905-908.

(本文編輯：朱 晶)

Clinical effect of Pien Tze Huang in treatment of guinea pigs with cholecystitis induced by lithocholic acid given by gavage

RENCaiyuan,RENFeng,LIJunfeng,etal.

(DepartmentofGastroenterology,TheSecondClinicalMedicalSchoolofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China)

Objective To investigate the clinical effect of traditional Chinese medicine Pien Tze Huang in the treatment of guinea pigs with cholecystitis. Methods A total of 80 guinea pigs (40 males and 40 females) were randomly divided into blank control group (10 guinea pigs treated with PBS at the same dose as that in model group), cholecystitis model group (20 guinea pigs treated with lithocholic acid given by gavage), Pien Tze Huang group (30 guinea pigs treated with Pien Tze Huang by gavage in addition to the treatment in the cholecystitis model group), and ursodeoxycholic acid group (20 guinea pigs treated with ursodeoxycholic acid in addition to the treatment in the cholecystitis model group). All groups were observed in terms of symptoms, pathological damage of the gallbladder, and liver function [the levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), total bilirubin (TBil), direct bilirubin (DBil), indirect bilirubin (IBil), and total bile acid (TBA)]. The two-independent-samplesttest was used for comparison of continuous data between groups; a one-way analysis of variance was used for comparison between multiple groups and the least significant differencet-test was used for comparison between any two groups.P<0.05 was considered statistically significant. Results Compared with the model group, the Pien Tze Huang group had significantly better conditions with smooth hair, a good mental state, and good food consumption, and no guinea pigs died after 15 days. As was shown by ultrasound and rheography, compared with the model group, the Pien Tze Huang group had basically normal morphology of the gallbladder and significant reductions in sagittal diameter of the gallbladder (14.92±1.36 mm vs 16.51±0.65 mm,P<0.05), transverse diameter of the gallbladder (21.25±1.61 mm vs 23.93±0.84 mm,P<0.05), and gallbladder wall thickness (0.75±0.049 mm vs 0.90±0.03 mm,P<0.05). HE staining showed that Pien Tze Huang significantly improved the pathological damage of the gallbladder. Compared with the model group, the Pien Tze Huang group had significant reductions in ALT (316.50±264.50 U/L vs 684.71±87.73 U/L,P<0.05), AST (88.78±16.69 U/L vs 180.2±84.40 U/L,P<0.05), TBil (0.18±0.10) μmol/L vs 1.43±0.90 μmol/L,P<0.05), DBil (0.06±0.05 μmol/L vs 0.23±0.07 μmol/L,P<0.05), IBil (0.12±0.06 μmol/L vs 1.20±0.55 μmol/L,P<0.05), and TBA (42.40±40.57 μmol/L vs 271.42±148.94 μmol/L,P<0.05). Conclusion Pien Tze Huang can significantly improve the symptoms, pathological damage of the gallbladder, and liver function in guinea pigs with cholecystitis.

cholecystitis； Pien Tze Huang; Chinese patent drugs； guinea pigs； treatment outcome

10.3969/j.issn.1001-5256.2017.05.023

2017-02-09；

2017-03-06。

國家自然科學(xué)基金項目(81270532)；北京市自然科學(xué)基金項目(7162085)；首都特色臨床應(yīng)用研究(Z121107001012167)；北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才培養(yǎng)計劃(2013-3-075)；北京市醫(yī)院管理局 “登峰”人才培養(yǎng)計劃(DFL20151601)；北京市屬醫(yī)學(xué)科研院所公益發(fā)展改革試點項目(京醫(yī)研2016-2)

任彩瑗 (1991-)，女，主要從事肝病的中醫(yī)治療研究。

張桓虎，電子信箱: zhhh31@163.com。

R657.41

A

1001-5256(2017)05-0905-04