遲昨非，何秋穎，楊威，傅煜，符爽，莊倩

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院1.小兒血液內(nèi)科；2.第二血液內(nèi)科；3.血液研究室，沈陽(yáng) 110022）

c?FLIPL在白血病中的表達(dá)及臨床意義

遲昨非1，何秋穎1，楊威2，傅煜3，符爽3，莊倩1

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院1.小兒血液內(nèi)科；2.第二血液內(nèi)科；3.血液研究室，沈陽(yáng) 110022）

目的 探討c?FLIPL在不同類(lèi)型白血病中的表達(dá)水平及其臨床意義。方法 應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)103例不同類(lèi)型白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞c?FLIPLmRNA表達(dá)，包括急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）54例（其中初診37例、復(fù)發(fā)5例、完全緩解12例）、急性髓細(xì)胞白血病（AML）38例（其中初診24例、復(fù)發(fā)6例、完全緩解8例）、初診急性未分化白血?。ˋUL）2例、初診慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）6例、初診慢性粒單核細(xì)胞白血?。–MML）3例。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)所選病例進(jìn)行免疫表型檢測(cè)。結(jié)果 在初診和復(fù)發(fā)的白血病中c?FLIPLmRNA呈異常高表達(dá)趨勢(shì)，二者間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。初診AUL及初診CML的c?FLIPLmRNA表達(dá)高于其他初診組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。初診ALL、AML、AUL、CML、CMML與對(duì)照組、完全緩解組比較，c?FLIPLmRNA的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。c?FLIPLmRNA表達(dá)與患者危險(xiǎn)度分級(jí)、初診白細(xì)胞數(shù)、血乳酸脫氫酶（LDH）、血羥丁酸脫氫酶（HBDH）、CD45、融合基因TEL?AML1相關(guān)，與患者年齡、性別、血纖維蛋白原及染色體異常無(wú)關(guān)。結(jié)論 白血病患者c?FLIPLmRNA表達(dá)異常增高，并與危險(xiǎn)度分級(jí)、初診白細(xì)胞數(shù)、血LDH、血HBDH及預(yù)后密切相關(guān)。

c?FLIPL；白血??；實(shí)時(shí)PCR

白血病是一種造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，增殖異常、凋亡受阻、分化障礙導(dǎo)致患者體內(nèi)白血病細(xì)胞大量增生浸潤(rùn)，臨床表現(xiàn)為感染、貧血、出血、肝脾淋巴結(jié)腫大及骨骼疼痛等。細(xì)胞凋亡障礙、增殖異常是白血病發(fā)病及復(fù)發(fā)的重要機(jī)制。細(xì)胞型Fas相關(guān)死亡區(qū)域蛋白樣白介素1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白（cellular Fas?associated death domain?like interleukin?1β converting enzyme inhibitory protein，c?FLIP）是一種重要的凋亡抑制蛋白，亦稱(chēng)CASH、CASP8AP1、CLARP、Casper、FLAME、FLAME?1、FLAME1、FLIP、I?FLICE、MRIT，在結(jié)直腸癌［1］、惡性黑色素瘤［2］、肝癌［3］、卵巢癌［4］、惡性淋巴瘤［5］及慢性淋巴細(xì)胞白血病［6］等腫瘤性疾病中高表達(dá)。c?FLIP的編碼基因定位于人染色體2q33，表達(dá)3種蛋白產(chǎn)物，分別為55 000的c?FLIPL（長(zhǎng)型）、26000的c?FLIPS（短型）及24000的c?FLIPR（短型）。c?FLIPL被證實(shí)是影響細(xì)胞凋亡敏感性的重要因素［7］，對(duì)凋亡具有明顯的抑制作用，且近期研究發(fā)現(xiàn)c?FLIPL在白血病中高表達(dá)［8］。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)PCR方法檢測(cè)不同類(lèi)型白血病初診及復(fù)發(fā)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞c?FLIPLmRNA表達(dá)情況，并分析c?FLIPL與白血病類(lèi)型、危險(xiǎn)度分級(jí)、分子生物學(xué)改變、染色體異常以及治療效果的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2014年10月至2015年12月我院血液病治療中心門(mén)診及病房收治的103例不同類(lèi)型和治療階段白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞樣本，其中男59例，女44例，年齡1個(gè)月～83歲（平均23歲）?；颊呔邮躆ICC分型，急性淋巴細(xì)胞白血病（acute lym?phoblastic leukemia，ALL）54例（初診37例、復(fù)發(fā)5例、完全緩解12例），其中FAB分型為L(zhǎng)1型2例、L2型39例、L3型13例，免疫分型為B系表達(dá)36例、T系表達(dá)18例。急性髓細(xì)胞白血病（acute myelocytic leukemia，AML）38例（初診24例、復(fù)發(fā)6例、完全緩解8例），初診AML的FAB分型為M1型2例、M2型5例、M3型6例、M4型1例、M5型10例。2例急性未分化白血?。╝cute undifferentiated leukemia，AUL）、6例慢性粒細(xì)胞白血?。╟hronic myelogenous leuke?mia，CML）、3例慢性粒單核細(xì)胞白血?。╟hronic my?elomonocytic leukaemia，CMML）均為初診。正常對(duì)照組15例，均為同期間白細(xì)胞數(shù)異常、單純貧血、淋巴結(jié)腫大或骨痛的門(mén)診患者，骨髓檢查未見(jiàn)異常。白血病的診斷及完全緩解標(biāo)準(zhǔn)參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［9］。所有初診患者均常規(guī)進(jìn)行融合基因及染色體檢測(cè)。

1.2 試劑與儀器

淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)于美國(guó)TBD公司，紅細(xì)胞裂解液購(gòu)于北京Solarbio公司，PBS購(gòu)于美國(guó)HyClone公司，Trizol購(gòu)于美國(guó)Invitrogen公司，引物由大連寶生物工程公司合成，反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)PCR試劑盒購(gòu)于日本TaKaRa公司，三氯甲烷、異丙醇、乙醇、瓊脂糖、EB為實(shí)驗(yàn)室常備試劑。PCR儀（GeneAmp PCR System 9700）、實(shí)時(shí)PCR儀（7500）購(gòu)自美國(guó)Ap?plied Biosystems公司，流式細(xì)胞儀（FACSCalibur）購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.3 骨髓標(biāo)本采集和單個(gè)核細(xì)胞分離

所有患者取髂后上棘或胸骨抗凝骨髓2～4 mL，加1～2 mL PBS稀釋后緩慢加入等量淋巴細(xì)胞分離液中，吸出中間單個(gè)核細(xì)胞層，PBS洗滌2次，光學(xué)顯微鏡下調(diào)整細(xì)胞濃度至3×106/mL，加1 mL Trizol吹打混勻后凍存于-80℃冰箱備用。

1.4 總RNA提取

將樣本于室溫解凍，敲打混勻，Trizol試劑常規(guī)方法提取總RNA，加DEPC水30～80 μL。

1.5 合成cDNA

反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)兩步法進(jìn)行，37℃15 min，85℃5 s，4℃終止反應(yīng)。

1.6 實(shí)時(shí)PCR

反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行，每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔，20 μL反應(yīng)體系中含SYBR Premix Ex TaqⅡ（2×）10 μL、PCR Forward Primer（10 μmol/L）0.8 μL、PCR Reverse Primer（10 μmol/L）0.8 μL、ROX Refer?ence Dye or DyeⅡ（50×）0.4 μL、cDNA溶液6 μL、dH2O 6 μL。c?FLIPL上游序列：5’?GCGAAGCCACC TGTTGATG?3’，下游序列：5’?CTGCTCCGCAAAAC CAGAA?3’，片段長(zhǎng)度為86 bp。β?actin上游序列：5’?TGGCACCCAGCACAATGAA?3’，下游序列：5’?CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA?3’，片段長(zhǎng)度為186 bp。擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性30 s，95℃5 s、60℃34 s，共40個(gè)循環(huán)。

1.7 PCR產(chǎn)物的定量校正和判定分析

β?actin作為內(nèi)參，各樣本c?FLIPL的Ct值與同一樣本的β?actin的Ct值相減，即為該樣本的c?FLIPL△Ct值，按目的基因相對(duì)表達(dá)量=2-△△Ct公式計(jì)算。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 Ct值的判讀

Ct值越低，實(shí)際拷貝數(shù)越高。結(jié)果顯示，所有樣本的c?FLIPLcDNA呈指數(shù)增長(zhǎng)，達(dá)到平臺(tái)期，擴(kuò)增曲線為一組典型的倒S型曲線（圖1），擴(kuò)增效率高。

圖1 c?FLIPL擴(kuò)增曲線Fig.1 Amplification ofc?FLIPL

2.2 產(chǎn)物特異性

由于不同序列和長(zhǎng)度的實(shí)時(shí)PCR產(chǎn)物在不同的溫度下熔解，因此可觀察到不同峰值。結(jié)果顯示，熔解溫度均一，產(chǎn)物熔解曲線峰型單一（圖2），說(shuō)明產(chǎn)物特異性好。

圖2 c?FLIPL實(shí)時(shí)PCR產(chǎn)物熔解曲線Fig.2 The melting curve ofc?FLIPLby real?time PCR

2.3c?FLIPLmRNA在不同類(lèi)型白血病中的定量分析結(jié)果

白血病患者c?FLIPLmRNA的表達(dá)異常增高，初診ALL（2.19±0.24，n=37）、復(fù)發(fā)ALL（3.40±0.40，n=5）、初診AML（2.68±0.93，n=24）、復(fù)發(fā)AML（2.71±0.38，n=6）、初診AUL（3.82±0.20，n=2）、初診CML（3.50±0.55，n=6）、初診CMML（2.81±0.26，n=3）分別與對(duì)照組（0.02±0.01，n=15）及完全緩解（complete remission，CR）組（0.05±0.02，n=20）比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），初診AUL及初診CML的c?FLIPLmRNA表達(dá)均高于其他初診組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），初診ALL與初診AML比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.100），CR組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.126）。初診T?ALL（3.06±0.37，n=11）的c?FLIPLmRNA表達(dá)量明顯高于初診B?ALL（1.82±0.39，n=26），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004）。初診AML的FAB亞型表達(dá)比較，M1型（3.28±0.22，n=2）、M2型（2.36±0.90，n=5）、M3型（2.56±0.10，n=6）、M4型（2.83±0，n=1）、M5型（2.78±0.79，n=10）中M1型的表達(dá)量最高，但各亞型之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有初診白血病（2.53±0.22，n=72）與所有復(fù)發(fā)白血病（3.02± 0.36，n=11）比較，c?FLIPLmRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.224）。

2.4c?FLIPLmRNA與初診白血病患者臨床特征的關(guān)系

結(jié)果顯示，不同年齡、性別、血纖維蛋白原值、染色體異常的c?FLIPLmRNA表達(dá)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。c?FLIPLmRNA的表達(dá)與患者危險(xiǎn)度分級(jí)、初診時(shí)白細(xì)胞數(shù)、血乳酸脫氫酶（lac?tate dehydrogenase，LDH）、血羥丁酸脫氫酶（hydroxy?butyrate dehydrogenase，HBDH）、CD45、融合基因TEL?AML1密切相關(guān)。61例初診ALL及AML患者出現(xiàn)CR，部分緩解（partial remission，PR）和未緩解（non?remission，NR）共2例，2例半年內(nèi)死亡患者c?FLIPLmRNA的表達(dá)量明顯增高，分別為4.20和2.36。見(jiàn)表2。

3 討論

c?FLIP是在病毒、真核生物及哺乳動(dòng)物等物種中廣泛存在的一種凋亡抑制蛋白，由IRMLER等［10］于1997年首次在惡性黑色素瘤內(nèi)發(fā)現(xiàn)，并可以從激活的人外周血白細(xì)胞中克隆出來(lái)，與pro?caspase?8結(jié)構(gòu)相似，在N端存在2個(gè)死亡效應(yīng)結(jié)構(gòu)域，從C端延伸包含1個(gè)caspase樣的結(jié)構(gòu)域。能與帶有死亡結(jié)構(gòu)域的Fas相關(guān)蛋白結(jié)合，亦能與caspase?8競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合物，從而導(dǎo)致caspase?8不能被充分活化，強(qiáng)效抑制Fas、TRAIL?R、TNFR1等死亡受體及其配體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。c?FLIPL被證實(shí)是影響細(xì)胞凋亡敏感性的重要因素，c?FLIPL基因在白血病中的研究較少。近期有研究發(fā)現(xiàn)其在一些實(shí)體瘤、骨髓增生異常綜合征、淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病中表達(dá)明顯增高，且與疾病進(jìn)程具有相關(guān)性［11?12］。隨著病情緩解，其表達(dá)呈下降趨勢(shì)，而當(dāng)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)凋亡耐受或耐藥時(shí)可見(jiàn)持續(xù)的c?FLIPL高表達(dá)［13］。應(yīng)用c?FLIPL抑制劑可使其表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。因此，在某些腫瘤性疾病中監(jiān)測(cè)其表達(dá)水平有可能具有診斷和判斷預(yù)后的意義。

本研究應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR方法檢測(cè)103例不同類(lèi)型白血病初診及復(fù)發(fā)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中c?FLIPLmRNA表達(dá)情況。結(jié)果顯示，15例正常對(duì)照者中，c?FLIPLmRNA呈低表達(dá)，有4例未檢測(cè)出c?FLIPLmRNA表達(dá)。20例CR者中，3例未檢測(cè)出c?FLIPLmRNA表達(dá)，余均為低表達(dá)。而c?FLIPLmRNA在初診及復(fù)發(fā)白血病患者中的表達(dá)明顯增高，對(duì)照組和CR組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同類(lèi)型初診白血病的c?FLIPLmRNA表達(dá)量差異不明顯，其中初診AUL及初診CML的c?FLIPLmRNA表達(dá)均高于其他初診組。AUL一般被認(rèn)為預(yù)后不良、治療效果差，與其c?FLIPLmRNA高表達(dá)相符合。CML是一種骨髓增殖性疾病，粒系異常增生而凋亡受阻，其凋亡抑制蛋白c?FLIPL也異常增高，符合CML的發(fā)病機(jī)制，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。也未發(fā)現(xiàn)AML的c?FLIPLmRNA表達(dá)與其FAB分型有聯(lián)系，或許與病例數(shù)較少有關(guān)。值得注意的是，初診T?ALL的c?FLIPLmRNA表達(dá)量明顯高于初診B?ALL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004），這與臨床上長(zhǎng)期以來(lái)T?ALL的誘導(dǎo)治療效果比B?ALL差很多和復(fù)發(fā)危險(xiǎn)性高相一致。2例半年內(nèi)死亡的患者分別為初診T?ALL（對(duì)化療不敏感，死于中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤(rùn)）和M3型（死于顱內(nèi)出血），均表現(xiàn)為高白細(xì)胞血癥，c?FLIPLmRNA的表達(dá)量明顯增高，分別為4.20和2.36。且本研究發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)患者的c?FLIPLmRNA的表達(dá)量高于初診白血病患者（無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異），這是否提示c?FLIPL的高表達(dá)與白血病耐藥相關(guān)，需要增加樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究。

表2 c?FLIPLmRNA與初診白血病患者臨床特征的關(guān)系Tab.2 Association between the expression level ofc?FLIPLmRNA and the clinical characteristics in newly diag?nosed leukemia patients

對(duì)c?FLIPLmRNA表達(dá)量與初診白血病患者臨床特征的關(guān)系進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同年齡、性別、血FIB值的c?FLIPLmRNA表達(dá)量的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而與患者危險(xiǎn)度分級(jí)、初診時(shí)白細(xì)胞數(shù)、血LDH、血HBDH密切相關(guān)。高危、中危和低危患者的c?FLIPLmRNA表達(dá)量的差異顯著。高白細(xì)胞血癥（白細(xì)胞數(shù)＞100×109/L）被認(rèn)為是白血病危險(xiǎn)度分級(jí)的重要因素之一和白血病復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，有研究［14］報(bào)道初診白細(xì)胞數(shù)＞200×109/L者復(fù)發(fā)可能性高、預(yù)后差，本研究結(jié)果顯示白細(xì)胞數(shù)＞100× 109/L的患者c?FLIPLmRNA明顯高于白細(xì)胞數(shù)＜100×109/L者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），提示c?FLIPL亦可作為白血病的一個(gè)持續(xù)的預(yù)測(cè)指標(biāo)。組織細(xì)胞一旦發(fā)生損傷，血清LDH就會(huì)增高，DIER?KSEN等［15］報(bào)道惡性血液病包括白血病患者的LDH水平顯著高于健康人，且LDH越高提示預(yù)后不良。HBDH可以間接反映LDH的活力，其水平變化常與LDH相平行。本研究經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)LDH＞1 000 U/L和HBDH＞1 000 U/L的初診白血病患者其c?FLIPLmRNA的表達(dá)量高于LDH＜1 000 U/L和HBDH＜1 000 U/L者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這提示高c?FLIPL表達(dá)也可以作為白血病預(yù)后不良的指標(biāo)。

CD45已被廣泛用于白血病的免疫分型，其高表達(dá)常與較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，缺乏CD45表達(dá)的ALL預(yù)后較好，且有學(xué)者建議將CD45列為ALL分層治療方案的影響因素之一［16］，亦有人將其用于白血病微小殘留病灶的檢測(cè)［17］。因此，本研究首選CD45作為免疫分型的研究對(duì)象。結(jié)果顯示，CD45表達(dá)陽(yáng)性組與陰性組比較，c?FLIPLmRNA表達(dá)量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002）。干/祖細(xì)胞抗原CD34在B?ALL患者中的表達(dá)高于其在T?ALL患者中的表達(dá)，但CD34+的T?ALL預(yù)后差［18］。本研究中CD34+的B?ALL患者c?FLIPLmRNA的表達(dá)量（1.44±0.08，n= 17）低于CD34-的B?ALL患者（2.43±0.29，n=9），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.016）。而有趣的是，CD34+的T?ALL患者c?FLIPLmRNA的表達(dá)量（3.34±0.29，n= 4）卻高于CD34-的T?ALL患者（2.91±0.49，n=7），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可能與T?ALL病例數(shù)少有關(guān)，這與CD34在B?ALL（預(yù)后良好）和T?ALL（預(yù)后不良）中對(duì)預(yù)后的意義相似［19］。但本研究統(tǒng)計(jì)分析全部入組患者中CD34+者的c?FLIPLmRNA表達(dá)量與CD34-者的c?FLIPLmRNA表達(dá)量，差異卻無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是入組患者分型復(fù)雜所致。HLA?DR為干/祖細(xì)胞相關(guān)抗原，陽(yáng)性提示細(xì)胞處于早期分化階段，最常見(jiàn)于分化程度較低的亞型，導(dǎo)致患者對(duì)化療藥物敏感性較差，常被認(rèn)為是預(yù)后不良因素［20］，與低CR率或短CR期顯著相關(guān)。結(jié)果顯示HLA?DR陽(yáng)性患者的c?FLIPLmRNA表達(dá)量略高于陰性組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.681），可能與入組患者白血病分型較多，細(xì)胞分化程度參差不齊有關(guān)。以上結(jié)果均提示c?FLIPL高表達(dá)可以作為白血病預(yù)后不良的指標(biāo)。

融合基因的檢測(cè)對(duì)白血病患者預(yù)后的評(píng)估具有重要意義，因此本研究對(duì)c?FLIPL的表達(dá)量與某些常見(jiàn)的白血病融合基因的相關(guān)性進(jìn)行分析。TEL?AML1融合基因在兒童ALL中較為常見(jiàn)，未發(fā)生TEL?AML1基因融合情況的患者化療有效率不理想，TEL?AML1常被作為預(yù)后良好的指標(biāo)［21］。本研究結(jié)果顯示TEL?AML1陽(yáng)性組的c?FLIPLmRNA表達(dá)量明顯低于融合基因陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.011），這更加提示c?FLIPL可以作為評(píng)估白血病預(yù)后的良好指標(biāo)。BCR?ABL融合基因陽(yáng)性是判斷某些白血病預(yù)后的負(fù)相關(guān)指標(biāo)，對(duì)于疾病化療方案的選擇及預(yù)后的評(píng)估均具有重要的臨床意義。本研究中BCR?ABL陽(yáng)性患者10例，其c?FLIPLmRNA表達(dá)量高于42例未檢測(cè)出融合基因的患者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.438），可能是融合基因陰性組患者的白血病分型復(fù)雜導(dǎo)致差異不顯著。PML?RARα融合基因的持續(xù)陽(yáng)性強(qiáng)烈預(yù)示著M3型的復(fù)發(fā)，本研究中M3型患者6例，PML?RARα陽(yáng)性者5例，其c?FLIPLmRNA表達(dá)量高于融合基因陰性組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.698），與1例PML?RARα陰性的M3型患者比較差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與病例數(shù)少有關(guān)。

大部分白血病患者存在克隆性染色體異常，不同類(lèi)型的染色體異常對(duì)化療的反應(yīng)差異較大，對(duì)預(yù)后有重要意義。本研究選取常見(jiàn)的且提示預(yù)后不良的3種染色體異常t（9；22）、t（15；17）及復(fù)雜核型（≥3種染色體異常）來(lái)分析c?FLIPL與白血病預(yù)后的關(guān)系，檢測(cè)出t（9；22）與t（15；17）異?；颊叩腸?FLIPLmRNA表達(dá)量高于39例未檢測(cè)出染色體異常的白血病患者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。美國(guó)國(guó)家癌癥綜合網(wǎng)按染色體異常提出不同預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)，復(fù)雜核型被歸為預(yù)后差組。本研究中檢測(cè)出復(fù)雜核型的13例白血病患者的c?FLIPLmRNA表達(dá)量明顯增高，均高于t（9；22）陽(yáng)性者、t（15；17）陽(yáng)性者及未檢測(cè)出染色體異常者，提示c?FLIPL高表達(dá)的患者預(yù)后差。但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），可能與病例數(shù)少或白血病分型復(fù)雜有關(guān)。

綜上，c?FLIPLmRNA的表達(dá)情況與白血病的惡性程度相關(guān)，對(duì)評(píng)估預(yù)后有重要意義。既然c?FLIPL高表達(dá)提示預(yù)后不良，那么對(duì)能夠特異性改變c?FLIPL表達(dá)水平的靶向基因藥物的研究無(wú)疑具有重要的臨床意義。ESMAILZADEH等［22］報(bào)道橋接整合因子1腫瘤抑制劑能夠通過(guò)下調(diào)c?FLIP的表達(dá)水平引起Fas/FasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，提示c?FLIP可以作為皮膚T細(xì)胞淋巴瘤潛在的藥物作用靶點(diǎn)。BRDEHOLT等［23］發(fā)現(xiàn)喜樹(shù)堿可以通過(guò)下調(diào)c?FLIPL的表達(dá)水平，引起急性髓性白血病細(xì)胞株死亡。近期相繼有研究報(bào)道，新型抗腫瘤藥物選擇性組蛋白去乙酰化酶抑制劑如Trichostatin A［24］、伏立諾他及恩替諾特［25］能夠調(diào)節(jié)c?FLIPL的表達(dá)水平，通過(guò)下調(diào)c?FLIPL的轉(zhuǎn)錄、翻譯水平或促進(jìn)其降解來(lái)修復(fù)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。因此，c?FLIPL將成為白血病治療的新靶點(diǎn)。

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（編輯 陳 姜）

Expression of c?FLIPLin Leukemia and Its Clinical Significance

CHI Zuofei1，HE Qiuying1，YANG Wei2，F(xiàn)U Yu3，F(xiàn)U Shuang3，ZHUANG Qian1
（1.Department of Pediatric Hematology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110022，China；2.The Second Department of Hematology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110022，China；3.Department of Hematology Lab，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110022，China）

Objective To investigate the expression ofc?FLIPLin leukemia and explore its clinical significance.Methods The expression level ofc?FLIPLmRNA in bone marrow mononuclear cells was determined by real?time polymerase chain reaction（PCR）in 103 leukemia patients with different types of leukemia，including 54 cases of acute lymphocytic leukemia（ALL）with 37 newly diagnosed，5 relapsed，and 12 complete remis?sion，38 cases of acute myeloid leukemia（AML）with 24 newly diagnosed，6 relapsed，and 8 complete remission，newly diagnosed 2 cases of acute undifferentiated leukemia（AUL），6 cases of chronic myelocytic leukemia（CML），and 3 cases of chronic myelomonocytic leukemia（CM?ML）.The immunophenotype of patients were detected by flow cytometry.Results Expression level ofc?FLIPLmRNA was higher in newly diag?nosed and relapsed leukemia patients.There was no significant difference between newly diagnosed and relapsed leukemia patients（P＞0.05）.Ex?pression level ofc?FLIPLmRNA of AUL and CML was higher than that in other patients，but there was no significant difference（P＞0.05）.Ex?pression level ofc?FLIPLmRNA of all newly diagnosed and relapsed leukemia patients was significantly higher than that in control group and com?plete remission group（P＜0.05）.The expression level ofc?FLIPLmRNA was correlated with risk stratification，white blood cell（WBC），lactate dehydrogenase（LDH），hydroxybutyrate dehydrogenase（HBDH），CD45 andTEL?AML1，but was not associated with age，sex，fibrinogen and chromosome abnormality.Conclusionc?FLIPLmRNA is highly expressed in leukemia patients，and is closely related with risk stratification，WBC，LDH，HBDH and prognosis.

c?FLIPL；leukemia；real?time polymerase chain reaction

R552

A

0258-4646（2017）02-0120-06

10.12007/j.issn.0258?4646.2017.02.006

沈陽(yáng)市科技計(jì)劃（F13?316?1?08）

遲昨非（1982-），女，主治醫(yī)師，碩士.

楊威，E-mail：yangw@sj?hospital.org

2016-08-25

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