鐘麗云+李靜

摘 要 目的：探索Xpert MTB/RIF試驗(yàn)在縣（區(qū)）基層結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷疑似肺結(jié)核中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取2015年3—6月在惠州市博羅縣慢性病防治站就診的疑似肺結(jié)核患者的痰樣本110份，分別進(jìn)行涂片抗酸染色法、固體培養(yǎng)法和比例法藥敏、Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測痰樣本中結(jié)核分枝桿菌的敏感度及特異性；以比例法藥敏試驗(yàn)檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥的敏感度和特異性。結(jié)果：在110份痰樣本中，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的有48份，陽性率為43.64%。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，涂片抗酸染色法檢測的敏感度為83.33%，低于Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的91.67%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.523 8， P>0.05）；特異性為90.32%，稍高于Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的88.70%，但差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.085 9， P>0.05）。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的K值分別為0.752和0.821，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果均具有較好的一致性。以比例法藥敏試驗(yàn)檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥的敏感度和特異性分別為87.50%和94.59%。結(jié)論：Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測操作簡單、快速，可用于檢測結(jié)核分支桿菌及其對(duì)利福平的耐藥性，檢測結(jié)果具有較高的敏感度和特異性，且與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果有較好的一致性，具有在縣（區(qū)）基層結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室推廣應(yīng)用的潛力。

關(guān)鍵詞 Xpert MTB/RIF試驗(yàn) 結(jié)核分枝桿菌 對(duì)利福平耐藥

中圖分類號(hào)：R521； R446.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2017）05-0041-03

Applied value of Xpert MTB/RIF test for diagnosis of tuberculosis in the primary laboratory

ZHONG Liyun1*， LI Jing2（1. Clinical Laboratory， Chronic Disease Prevention and Control Station of Boluo Country in Huizhou City， Guangdong 516100， China； 2. Clinical Laboratory， Huizhou Institution for Tuberculosis Prevention and Control， Guangdong 516100， China）

ABSTRACT Objective： To discuss the applied value of Xpert MTB/RIF test for diagnosis of tuberculosis in the primary laboratory. Methods： One hundred and ten cases of sputum samples collected from patients with suspected pulmonary tuberculosis were analyzed by phlegm smear microscopic exam， plate culture， proportional drug sensitivity test and Xpert MTB/ RIF detection， respectively and their sensitivity and specificity to Mycobacterium tuberculosis in sputum samples were evaluated. Results： There were 48 cases of Mycobacterium tuberculosis positive specimens with positive rate of 43.64%. The sensitivity of phlegm smear microscopic exam was lower while the specificity was a little bit higher than those of Xpert MTB/RIF detection（83.33% vs 91.67% and 90.32% vs 88.70%） when taking plate culture as gold standard， however their differences showed no statistical significance （P>0.05）. The kappa value was 0.752 for phlegm smear microscopic exam and 0.821 for Xpert MTB/ RIF detection， indicating that the detective results of both methods showed a good coincidence with plate culture. The sensitivity and specificity of Xpert MTB/RIF detection were 87.50% and 94.59% when taking proportional drug sensitivity test as standard. Conclusion： The Xpert MTB/RIF detection is fast and easy to operate with high sensitivity and specificity and a good coincidence with plate culture and can effectively detect Mycobacterium tuberculosis and its resistance to rifampicin， and is worthy of clinical use in primary laboratory.

KEY WORDS Xpert MTB/RIF test； Mycobacterium tuberculosis； rifampicin resistance

肺結(jié)核是一種由結(jié)核分枝桿菌感染所引起的肺部感染性疾病，具有傳染性、高致死率等特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅著人們生命健康，已引起臨床的普遍關(guān)注。目前，耐多藥肺結(jié)核病例日益增多，給我國結(jié)核病防治工作帶來了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。世界衛(wèi)生組織指出，高效和以人為本的檢測診斷技術(shù)的普及是控制結(jié)核病的基礎(chǔ)，同時(shí)及時(shí)、準(zhǔn)確和可靠的藥敏試驗(yàn)亦有重要意義。近年來，隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的迅速發(fā)展，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)在結(jié)核病的快速診斷及對(duì)利福平耐藥檢測中的應(yīng)用受到國內(nèi)外專家和學(xué)者的廣泛關(guān)注[1-2]。為此，本研究以在惠州市博羅縣慢性病防治站就診的疑似肺結(jié)核患者的110份痰樣本為對(duì)象，分別采用涂片抗酸染色法、固體培養(yǎng)法、比例法藥敏試驗(yàn)和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)進(jìn)行檢測，以探索Xpert MTB/RIF試驗(yàn)在結(jié)核分枝桿菌及其對(duì)利福平耐藥檢測中的應(yīng)用價(jià)值，尤其是用于縣（區(qū)）基層結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室的潛力，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3—6月在惠州市博羅縣慢性病防治站就診的疑似肺結(jié)核患者的痰樣本110份，所有樣本在采集前患者均未接受過抗結(jié)核藥物治療。

1.2 檢測方法

對(duì)110份疑似肺結(jié)核患者的痰樣本分別進(jìn)行涂片抗酸染色法、固體培養(yǎng)法、比例法藥敏試驗(yàn)和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測。Gene Xpert System及其試劑由美國Cepheid公司提供。

1）涂片抗酸染色法檢測參照《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》中的操作要求[3]進(jìn)行。

2）固體培養(yǎng)法檢測參照《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作與網(wǎng)絡(luò)建設(shè)》中的要求[4]進(jìn)行，具體操作如下：先用4%的NaOH溶液處理，然后通過無菌操作方法將樣本接種在培養(yǎng)基（改良的羅氏培養(yǎng)基）斜面上，于37 ℃下分別培養(yǎng)3和7 d，觀察培養(yǎng)基的變化情況，此后每周觀察1次，記錄細(xì)菌的生長情況，直至出現(xiàn)陽性結(jié)果。若60 d后無細(xì)菌生長，則判斷結(jié)果為陰性。菌落的生化實(shí)驗(yàn)菌種鑒定和比例法藥敏試驗(yàn)檢測參照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[5]進(jìn)行。

3）Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的操作方法為：將1 ml痰樣本置于前處理管中，加入2倍痰樣本體積的痰樣本處理液，旋渦振蕩器上振蕩15 ～ 30 s，靜置15 min并使痰樣本充分液化，然后取2 ml緩慢轉(zhuǎn)移至反應(yīng)盒中，將反應(yīng)盒置于檢測系統(tǒng)中進(jìn)行全自動(dòng)檢測，最后直接在檢測系統(tǒng)窗口讀取結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用百分比的形式表示，計(jì)數(shù)資料間的比較采用卡方檢驗(yàn)，P>0.05表示差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性比較采用Kappa檢驗(yàn)，K≥0.75表示一致性良好。

2 結(jié)果

2.1 涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分枝桿菌的結(jié)果

在110份痰樣本中，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的有48份，陽性率為43.64%。以固體培養(yǎng)法檢查結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，涂片抗酸染色法檢測結(jié)核分枝桿菌（表1）的敏感度、特異性、陽性預(yù)測率、陰性預(yù)測率和準(zhǔn)確性分別為83.33%、90.32%、86.96%、87.54%和87.27%，而Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分枝桿菌（表2）的敏感度、特異性、陽性預(yù)測率、陰性預(yù)測率和準(zhǔn)確性分別為91.67%、88.70%、86.27%、93.22%和90.00%。涂片抗酸染色法檢測的敏感度為83.33%，低于Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的91.67%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.523 8， P>0.05）；特異性為90.32%，略高于Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的88.70%，但差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.085 9， P>0.05）。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的K值分別為0.752和0.821，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果均具有較好的一致性。

2.2 Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥的結(jié)果

經(jīng)菌種鑒定，在48份陽性樣本中，有3份為非結(jié)核分枝桿菌，其余45份為結(jié)核分枝桿菌。Xpert MTB/RIF試驗(yàn)的耐藥檢出率為20.00%，稍高于比例法藥敏試驗(yàn)的17.78%（表3），但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.072 5， P>0.05）。以比例法藥敏試驗(yàn)檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥的敏感度和特異性分別為87.50%和94.59%。

3 討論

結(jié)核分支桿菌的固體培養(yǎng)法、涂片抗酸染色法等檢測方法是臨床上診斷結(jié)核病的經(jīng)典方法，其中固體培養(yǎng)法是檢測結(jié)核分枝桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)方法，具有較高的敏感度和特異性，但需時(shí)過長。涂片抗酸染色法檢測結(jié)核分枝桿菌雖然快捷、簡便，但對(duì)樣本的含菌量有要求，如是含菌量較低的肺外樣本，則易出現(xiàn)漏診。此外，涂片抗酸染色法檢測亦不能區(qū)分結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌。比例法藥敏試驗(yàn)是目前臨床上用來檢測結(jié)核分枝桿菌是否對(duì)利福平耐藥的金標(biāo)準(zhǔn)方法，但其檢測需時(shí)非常長，可能對(duì)患者治療產(chǎn)生一定的負(fù)面影響。Xpert MTB/RIF試驗(yàn)是一種集樣品準(zhǔn)備、定量聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增和熒光檢測于一身的體外檢測方法，其采用一次性試劑盒，自動(dòng)完成檢測，操作簡便且僅需時(shí)2 h左右，同時(shí)檢測過程中不易受到干擾，可用作臨床上檢測結(jié)核分枝桿菌及其對(duì)利福平耐藥情況的首選方法[6]。世界衛(wèi)生組織已推薦Xpert MTB/RIF試驗(yàn)為中低收入國家結(jié)核病和耐多藥結(jié)核病檢測的主要方法[7]。

本研究結(jié)果顯示，在110份痰樣本中，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的有48份，陽性率為43.64%。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，涂片抗酸染色法檢測的敏感度為83.33%，低于Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的91.67%；特異性為90.32%，稍高于Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的88.70%。這說明，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分支桿菌的敏感度和特異性均較好，與涂片抗酸染色法檢測結(jié)果相當(dāng)（差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。以固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的K值分別為0.752和0.821，涂片抗酸染色法和Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)果與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性也均較好。以比例法藥敏試驗(yàn)檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測結(jié)核分枝桿菌對(duì)利福平耐藥的敏感度和特異性分別為87.50%和94.59%，與國內(nèi)其他研究結(jié)果相似。81 bp核心突變區(qū)是耐利福平結(jié)核分枝桿菌耐藥基因的主要集中區(qū)域，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)正是通過檢查rpoB基因的該核心突變區(qū)而檢測耐利福平結(jié)核分枝桿菌的。Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測平均需時(shí)約2 h，而涂片抗酸染色法檢測平均需時(shí)1 d，固體培養(yǎng)法檢測需時(shí)1個(gè)月以上，比例法藥敏試驗(yàn)檢測則需時(shí)2個(gè)多月才能得到結(jié)果。顯然，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測的時(shí)間成本更低、效率更高。本研究結(jié)果說明，Xpert MTB/RIF試驗(yàn)檢測操作簡單、快速，可有效檢測結(jié)核分支桿菌及其對(duì)利福平的耐藥情況，具有較高的敏感度和特異性，且與固體培養(yǎng)法檢測結(jié)果有較好的一致性，適合在縣（區(qū)）基層結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用，有助于結(jié)核病的早期篩查、早期診斷和早期治療。

參考文獻(xiàn)

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