崔濤，陳洪忠，張?jiān)凭?/p>

山東省食品藥品監(jiān)督管理局 審評認(rèn)證中心，山東 濟(jì)南 250000

臨床化學(xué)體外診斷試劑分析性能評估要點(diǎn)探討

崔濤，陳洪忠，張?jiān)凭?/p>

山東省食品藥品監(jiān)督管理局 審評認(rèn)證中心，山東 濟(jì)南 250000

根據(jù)國家及地方食品藥品監(jiān)督部門的政策法規(guī)要求和作者從事體外診斷試劑產(chǎn)品審評工作的經(jīng)驗(yàn)，闡述臨床化學(xué)體外診斷試劑分析性能評估研究要點(diǎn)，為此類產(chǎn)品的研發(fā)和申報(bào)提供指導(dǎo)性建議。

臨床化學(xué)；檢測；體外診斷試劑

目前，臨床所應(yīng)用的化學(xué)體外診斷試劑超過50種，按常規(guī)分類可將其大致分為酶類、基質(zhì)類、血脂類、免疫類等，在臨床中廣泛用于測量肝臟功能、腎功能、心肌酶譜、風(fēng)濕性疾病、心血管功能、體液電解質(zhì)、免疫性疾病、血脂、血糖等，不管在健康人群體檢過程中，還是疾病患者的診斷過程中，這些臨床化學(xué)指標(biāo)都是最基本也是最重要的檢測項(xiàng)目，而當(dāng)今疾病的預(yù)防、診斷和治療也越來越多地依靠檢驗(yàn)科室提供的檢測信息，這些信息將直接影響臨床醫(yī)生對疾病的正確診斷和治療。因此，做好體外診斷試劑注冊審評工作，嚴(yán)控試劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)非常重要。在此，希望通過闡述臨床化學(xué)體外診斷試劑分析性能評估研究要點(diǎn)，為此類產(chǎn)品的研發(fā)和申報(bào)提供指導(dǎo)性建議。

1 主體

從審評角度來講，臨床化學(xué)體外診斷試劑所用方法學(xué)各異，種類繁多，不可一概而論，因此在本文中，主要探討的是符合GB/T 26124-2011臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）國家標(biāo)準(zhǔn)，即用于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床化學(xué)項(xiàng)目定量檢驗(yàn)所使用的基于分光光度法原理的體外診斷試劑，并且在管理上屬于二類醫(yī)療器械的產(chǎn)品的分析性能評估要點(diǎn)分析。

在申請人提交的產(chǎn)品注冊資料中，分析性能評估資料是最重要的基礎(chǔ)資料，內(nèi)容主要包括空白吸光度、靈敏度、精密度、批間差、線性范圍、準(zhǔn)確度、干擾實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性、參考區(qū)間等項(xiàng)目，各項(xiàng)目均應(yīng)有具體的試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析以及接受標(biāo)準(zhǔn)等詳細(xì)資料。產(chǎn)品性能評估將直接影響注冊產(chǎn)品的質(zhì)量。

1.1 空白吸光度

空白吸光度是用指定的空白液加入試劑作為樣品測試時(shí)所得到的吸光度值，測試條件一般為37℃、測試主波長、1 cm光徑。在實(shí)際研發(fā)過程中，企業(yè)通常采用的空白液為蒸餾水或生理鹽水，還有很少企業(yè)采用含牛血清白蛋白的緩沖液。在臨床檢測過程中樣本一般為血清、血漿或尿液等，空白液具體選用哪種，須考慮不同試劑的反應(yīng)特性和檢測樣本的基質(zhì)效應(yīng)具體而定。目前市場中產(chǎn)品空白吸光度的表示方法一般為“空白吸光度＞某數(shù)值”或“空白吸光度＜某數(shù)值”，在實(shí)際測量過程中空白吸光度一般在某個(gè)值附近波動，因此可能表示為“某數(shù)值＜空白吸光度＜某數(shù)值”的形式更為合適。

對于采用速率法的臨床化學(xué)體外診斷試劑，則應(yīng)以空白吸光度變化率作為性能指標(biāo)，即采用儀器啟動穩(wěn)定后測定的吸光度和約5 min后的吸光度來計(jì)算試劑的空白吸光度變化率。

1.2 靈敏度

靈敏度為試劑測試n單位被測物時(shí)吸光度差值或吸光度變化率。在靈敏度測定評估過程中，最主要的問題是測試樣本的選擇，樣本的選擇應(yīng)更貼近臨床實(shí)際應(yīng)用，建議選用正常參考值附近樣本或病理高值樣本。

1.3 精密度（重復(fù)性）

在某些企業(yè)提交的申報(bào)資料中，容易把精密度和重復(fù)性相混淆，其實(shí)兩者之間是有區(qū)別的。重復(fù)性一般表示的是在相同測量條件下，對同一樣本進(jìn)行連續(xù)多次測量所得結(jié)果之間的一致性；而精密度則更強(qiáng)調(diào)在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測量結(jié)果間的一致程度，建議選用2個(gè)濃度的樣本，且2個(gè)濃度的樣本具有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)正常參考值附近樣本和病理高值樣本。

1.4 批間差

批間差主要用于評估不同批次產(chǎn)品之間性能的差異，通常做法為測試3個(gè)不同批次的試劑，每個(gè)批次測試10次，分別計(jì)算每批10次測定的均值，計(jì)算相對偏差。根據(jù)不同產(chǎn)品之間的差異，批間差指標(biāo)一般為變異系數(shù)不大于10%，同樣應(yīng)選用正常參考值附近樣本或病理高值樣本。

1.5 線性范圍

產(chǎn)品線性范圍的大小須根據(jù)生化試劑的反應(yīng)特性和所檢測指標(biāo)的臨床意義范圍來確定，如在整個(gè)臨床意義范圍之內(nèi)試劑均具有良好的線性關(guān)系，r值一般須大于0.99，可考慮將線性范圍設(shè)定稍大于臨床意義范圍即可滿足臨床需要，若所申報(bào)臨床生化試劑具有良好線性關(guān)系的范圍比所測指標(biāo)臨床意義范圍要小，則在臨床檢測時(shí)須考慮臨床樣本的稀釋問題，充分考慮樣本稀釋后基質(zhì)效應(yīng)的影響，須做相關(guān)研究，明確所選用的稀釋液類型及樣本最大可稀釋率。若某些檢測指標(biāo)的臨床意義包含零點(diǎn)附近，可考慮將零點(diǎn)附近的偏差設(shè)為絕對偏差。同時(shí)建立試劑線性范圍所用的樣本盡可能選擇臨床樣本，必要時(shí)可選擇在高值臨床樣本中添加適量檢測物。

對于有推薦性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的臨床生化體外診斷試劑盒，線性范圍不能低于其規(guī)定。

1.6 準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度是評價(jià)注冊產(chǎn)品質(zhì)量高低的最重要指標(biāo)，目前企業(yè)主要采用3種方法進(jìn)行準(zhǔn)確度的評價(jià)。

1.6.1 相對偏差 相對偏差是首選方法，此方法著重強(qiáng)調(diào)用于評價(jià)的作為檢測樣本的物質(zhì)質(zhì)量要高，一般為參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)對試劑（盒）產(chǎn)品進(jìn)行測試，計(jì)算相對偏差，相對偏差一般不超過10%。若有國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品，則優(yōu)先采用國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品進(jìn)行檢測評價(jià)。在實(shí)際研發(fā)過程中，由于對參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)的含義有分歧，因此，除有國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品的產(chǎn)品外，建議考慮采用其他方法。

1.6.2 比對試驗(yàn) 此方法即為采用臨床已上市的、普遍認(rèn)為質(zhì)量較好、具有相同方法學(xué)的同類產(chǎn)品作為比對試劑，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測一批臨床樣本，對檢測結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以此考察擬申報(bào)試劑與比對試劑之間的差異。如2種試劑之間偏倚很小或在企業(yè)允許的誤差范圍內(nèi)，說明2個(gè)檢測系統(tǒng)對樣本的檢測結(jié)果基本相符，可證明擬申報(bào)試劑能夠滿足臨床檢測需要、符合申報(bào)產(chǎn)品質(zhì)量要求。

需要注意的是，采用比對試驗(yàn)方法在具體研發(fā)過程中應(yīng)參照EP9-A2的方法進(jìn)行。在EP9-A2方法中明確規(guī)定了所用樣本必須為臨床樣本，同時(shí)在其內(nèi)容還包含了《方法學(xué)比較試驗(yàn)中數(shù)據(jù)分布建議表》，表中列出了多種常見臨床生化試劑應(yīng)滿足的試驗(yàn)條件，即所測樣本的數(shù)據(jù)應(yīng)能涵蓋整個(gè)臨床意義的范圍，并且能盡量均勻分布。如申報(bào)尿素檢測試劑盒，其樣本分布應(yīng)為小于2.50 mmol/L的樣本10%、2.50～4.16 mmol/L之間的樣本40%、4.33～8.33mmol/L之間的樣本 20%、8.50～16.65 mmol/L之間的樣本20%、16.65 mmol/L以上樣本10%，總的樣本例數(shù)不能少于40例，同時(shí)對檢測結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.6.3 回收試驗(yàn) 即在人源樣本中加入一定體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液或純品，進(jìn)行檢測并計(jì)算回收率。如果臨床已上市產(chǎn)品數(shù)量較少，或者產(chǎn)品申報(bào)企業(yè)認(rèn)為已上市產(chǎn)品質(zhì)量不高，則可采用回收試驗(yàn)。回收試驗(yàn)需要注意的關(guān)鍵點(diǎn)為加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液體積和臨床樣本的體積比，應(yīng)保證加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液不會產(chǎn)生明顯的基質(zhì)效應(yīng)，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。對于部分臨床生化試劑而言，加入的生理鹽水或緩沖液不會影響基質(zhì)變化，從目前申報(bào)產(chǎn)品的研究資料來看，加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液體和臨床樣本的體積比不超過1∶20對大部分產(chǎn)品來講不會有明顯的基質(zhì)效應(yīng)?；厥諏?shí)驗(yàn)所評估標(biāo)準(zhǔn)一般為90%～110%。

1.7 干擾實(shí)驗(yàn)

干擾實(shí)驗(yàn)主要是考慮非檢測物對檢測結(jié)果的影響，通過對樣本中添加不同種類、不同濃度的干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測，以判斷在產(chǎn)品性能指標(biāo)范圍內(nèi)可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。血液樣本一般須考慮膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等常見干擾物質(zhì)及溶血等因素；檢測樣本為血漿的試劑，還應(yīng)充分考慮不同抗凝劑對檢測結(jié)果的影響。尿液樣本則一般考慮pH值、血尿、蛋白尿等的影響。

1.8 樣本保存

在臨床實(shí)驗(yàn)室中，檢測樣本的保存條件一般為2～8℃或-20℃，通過分別對不同保存條件下、不同時(shí)間段的樣本進(jìn)行檢測，可確定樣本的保存期，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。對于穩(wěn)定性較差、易降解的臨床樣本，建議采樣后及時(shí)檢測。

1.9 穩(wěn)定性

穩(wěn)定性研究主要包括效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（凍干粉）、運(yùn)輸穩(wěn)定性等。效期穩(wěn)定性研究一般又包括加速穩(wěn)定性研究和實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，對臨床生化試劑而言，不建議企業(yè)進(jìn)行加速穩(wěn)定性研究。而在實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究過程中，需要注意應(yīng)將運(yùn)輸穩(wěn)定性研究穿插于其中，即將實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究的產(chǎn)品按照企業(yè)運(yùn)輸管理規(guī)程模擬日常運(yùn)輸環(huán)境，并充分考慮各種極端情況，進(jìn)行運(yùn)輸穩(wěn)定性研究之后，檢測不同保存時(shí)間的產(chǎn)品是否符合性能指標(biāo)要求來制定最終的產(chǎn)品有效期。注意須提供至少3批產(chǎn)品的相應(yīng)研究資料。

1.10 參考區(qū)間

參考區(qū)間即正常人群的檢測值范圍，在研究過程中，企業(yè)應(yīng)詳細(xì)說明所采用樣本來源及試驗(yàn)方法，并明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)文獻(xiàn)資料等判斷檢測結(jié)果在不同性別、年齡、樣本類型之間是否有顯著性差異，如有須分別進(jìn)行研究，同時(shí)所研究樣本例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，建議采用至少120例以上樣本進(jìn)行研究（可滿足90%置信限），198例樣本則可滿足99%的置信限，在檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析過程中，結(jié)合不同產(chǎn)品的臨床意義確定最終的參考區(qū)間，在研究過程中由于所選樣本受地區(qū)或人種限制，因此在臨床應(yīng)用時(shí)建議各臨床實(shí)驗(yàn)室建立參考區(qū)間。

1.11 其他應(yīng)注意的問題

申報(bào)產(chǎn)品中如包含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，則校準(zhǔn)品、質(zhì)控品也應(yīng)有相應(yīng)性能指標(biāo)，一般包括外觀、裝量、準(zhǔn)確性、均一性、穩(wěn)定性等。校準(zhǔn)品須根據(jù)GB/T 21415體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)的要求，提供相應(yīng)的溯源信息，定值質(zhì)控品須提供相應(yīng)的定值資料，根據(jù)國內(nèi)法規(guī)規(guī)定，非定值質(zhì)控品不作為醫(yī)療器械管理。同時(shí)在評估過程中，試劑和校準(zhǔn)品、質(zhì)控品以及適用機(jī)型應(yīng)作為一個(gè)系統(tǒng)整體進(jìn)行評估。且在研發(fā)過程中應(yīng)充分考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2 結(jié)語

伴隨著科技的不斷進(jìn)步，體外診斷試劑領(lǐng)域的發(fā)展日新月異，對企業(yè)和相關(guān)監(jiān)督管理部門都提出了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。希望通過本文對臨床生化體外診斷試劑研發(fā)過程中的要點(diǎn)分析，為企業(yè)提供一定的指導(dǎo)性建議，有益于為醫(yī)療市場提供高質(zhì)量的診斷試劑產(chǎn)品。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號.體外診斷試劑注冊管理辦法[Z].2014-07-30．

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第43號.關(guān)于公布醫(yī)療器械注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告[Z].2014-09-05．

[3]國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號.關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告[Z]. 2014-09-11．

Overview of the Evaluation Points for In Vitro Diagnostic Reagents of Clinical Chemistry

CUI Tao*,CHEN Hong-Zhong,ZHANG Yun-Juan

Shandong Food and Drug Administration for Evaluation and Certification,Jinan 250000,China

*Corresponding author,E-mail:cuitao19842006@163.com

According to the policies and regulations of the state food and drug supervision and administration department and my experience ofin vitrodiagnostic products technical review,the evaluation points of clinical chemistry kits were discussed，to provide recommendations for products development and research and registration declaration of such reagents．

clinical chemistry;detection;in vitrodiagnostic reagents

R197

A

1009-0002（2017）03-0356-04

10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.023

2016-11-29

崔濤（1984-），男，碩士

崔濤，（E-mail）cuitao19842006@163.com