黨貴玲 董蕙 杜洪亮 張文世 張景平 張曉雪

130062吉林省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所(長(zhǎng)春)1

130051長(zhǎng)春市中心醫(yī)院2

HPLC法測(cè)定肝達(dá)康膠囊中芍藥苷的含量

黨貴玲1董蕙1杜洪亮1張文世1張景平1張曉雪2

130062吉林省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所(長(zhǎng)春)1

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目的：建立肝達(dá)康膠囊中芍藥苷含量的高效液相檢測(cè)方法。方法：Agilent HC-C18柱；乙腈-水(15：85)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；柱溫30℃；流速0.8 mL/min。結(jié)果：芍藥苷進(jìn)樣量在0.072 7～0.654 μg范圍內(nèi)峰面積積分值與進(jìn)樣量呈良好線(xiàn)性關(guān)系，平均加樣回收率99.4%。結(jié)論：該方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可用于肝達(dá)康膠囊質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；肝達(dá)康膠囊；芍藥苷

肝達(dá)康膠囊系具有疏肝健脾、化瘀通絡(luò)功能的復(fù)方制劑，用于肝郁脾虛血瘀所致的脅痛腹脹、脅下痞塊、疲乏納差、大便溏稀及慢性乙型肝炎見(jiàn)上述癥狀者。收載于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]，原標(biāo)準(zhǔn)中白芍的含量測(cè)定，供試品前處理步驟十分繁瑣。本研究對(duì)供試品制備方法進(jìn)行修改，未經(jīng)正己烷脫脂和中性氧化鋁柱凈化的樣品仍可以得到較好的色譜分離，且含量測(cè)定準(zhǔn)確度較原方法高，為肝達(dá)康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)積累了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

儀器與試藥

島津UV2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；Agilent 1100 series高效液相色譜儀；試劑：乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純；芍藥苷對(duì)照品，批號(hào)111736-201035，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。樣品為肝達(dá)康膠囊3批(批號(hào)：1003001、1005001、1007001)。

含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱：Agilent HC-C18 (250×4.6 mm，5 μ)；流動(dòng)相為乙腈-水(15:85)；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；柱溫30℃，流速0.8 mL/min。理論塔板數(shù)以芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不得低于3 500。

溶液的制備：①對(duì)照品溶液制備：取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每l mL中含35 μg的溶液。②供試品溶液制備：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取0.6 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理30 min(功率250 W，頻率50 Hz)，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

測(cè)定方法：吸取對(duì)照品及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。

空白試驗(yàn)：采用相同的工藝制成無(wú)芍藥苷的陰性對(duì)照品，采用相同的方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果顯示，在芍藥苷色譜峰相應(yīng)保留時(shí)間處，未檢測(cè)出干擾峰，見(jiàn)圖1。

線(xiàn)性關(guān)系考察：取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.075 3 mg的溶液(純度96.5%)。精密吸取上述溶液1 μL、3 μL、5 μL、7 μL、9 μL，分別注入液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)得回歸方程Y=1 466.85X+24.88(r= 0.999 4)；說(shuō)明芍藥苷進(jìn)樣量在0.072 7～0.654 μg范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

圖1 HPLC色譜圖

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液10 μL (批號(hào)：1003001)，分別在0 h、12 h、15 h、63 h，依法測(cè)定，按芍藥苷面積計(jì)算RSD為0.64%，結(jié)果未發(fā)生明顯變化，表明供試品溶液穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：取同一供試品溶液(批號(hào)：1003001)，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積積分值RSD為0.69%，結(jié)果表明，本方法所用儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一供試品(批號(hào)：1003001)6份，依法獨(dú)立測(cè)定，結(jié)果芍藥苷平均含量3.432 mg/g，RSD 0.60%，說(shuō)明可重復(fù)性良好。

回收率試驗(yàn)：取經(jīng)同法測(cè)定的已知含量的樣品(批號(hào)：1003001，含量3.432 mg/g)6份，每份0.3 g，精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液(每1 mL含芍藥苷0.016 7 mg) 50 mL，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

樣品含量測(cè)定：依法測(cè)定樣品3批，批號(hào)為1003001、1005001、1007001，含量分別為1.03 mg/粒、1.12 mg/粒、1.06 mg/粒。

討論

選擇色譜柱：該項(xiàng)試驗(yàn)性研究考察了3根色譜柱：Luna C18(4.6×250 mm，5 μm)柱；Venusil C18(4.6×250 mm，5 μ m)柱；Agilent Extend C18(4.6×250 mm，5 μm)柱。在上述色譜條件下，所得色譜峰皆為正態(tài)峰，柱效分別為13 384、4 473、3 535，3根色譜中測(cè)得含量結(jié)果分別為1.034 mg/g、1.030 mg/g、1.039 mg/g，RSD 0.44%，利用以上3根色譜柱都能夠?qū)⑸炙庈辗蛛x，并且3根色譜柱測(cè)定出的含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明該色譜系統(tǒng)下測(cè)定芍藥苷并無(wú)色譜柱選擇性。

理論塔板數(shù)選擇：中國(guó)藥典白芍項(xiàng)下規(guī)定理論塔板數(shù)規(guī)定為2 000[2]，考慮到本品為中成藥，成分較藥材復(fù)雜，根據(jù)選用3根色譜柱測(cè)試結(jié)果，理論板數(shù)為3 535時(shí)，芍藥苷能與相鄰峰完全分離，故參照藥典和實(shí)驗(yàn)實(shí)際情況，規(guī)定理論塔板數(shù)以芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不得低于3 500。

本研究分別用原標(biāo)準(zhǔn)和修改后的標(biāo)準(zhǔn)考察了3批肝達(dá)康膠囊，結(jié)果原標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定為0.82 mg/粒、0.88 mg/粒、0.83 mg/粒，新方法測(cè)定結(jié)果高于原方法，且較原方法簡(jiǎn)便易行，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，可用肝達(dá)康膠囊的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].第61冊(cè),2008:61-68.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

Determination of paeoniflorin in liver Dakang capsules by HPLC

Dang Guiling1,Dong Hui1,Du Hongliang1,Zhang Wenshi1,Zhang Jingping1,Zhang Xiaoxue2
Medical Equipment Inspection Institute of Jilin Province(Changchun City)1300621
The Central Hospital of Changchun City 1300512

Objective:To establish a high performance liquid chromatography method for detection of paeoniflorin content in liver Kang capsule.Methods:Agilent HC-C18 column and acetonitrile water(15:85)as mobile phase,the detection wavelength was 230 nm and the column temperature was about 30℃;the flow rate was 0.8 mL/min.Results:There was a good linear relationship between the peak area integral value and the amount of sample in the range of 0.072 7 to 0.654 μg.The average recovery rate was about 99.4%.Conclusion:This method is easy to operate,accurate,with good reproducible,and it can be used for the quality control of liver Kang capsule.

High performance liquid chromatography;Liver Kang capsule;Herbaceous peony

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.6.3