劉家趙 孛茹婷 楊文君 劉玲玲 姬廣海 鄭 義 李 鵬 蔡 磊 陳志強(qiáng)

(寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院放射科，寧夏 銀川 750004)

ERG和鼠雙微體2蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)及意義

劉家趙1孛茹婷 楊文君2劉玲玲 姬廣海 鄭 義 李 鵬 蔡 磊 陳志強(qiáng)

(寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院放射科，寧夏 銀川 750004)

目的 檢測(cè)ERG蛋白和鼠雙微體(MDM2)蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)情況，并探討其相關(guān)性。方法 收集經(jīng)病理學(xué)確診為前列腺癌標(biāo)本48例，良性前列腺增生10例，采用免疫組織化學(xué)二步法或SP法檢測(cè)組織標(biāo)本的ERG蛋白和MDM2蛋白的表達(dá)情況，采用χ2檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)分析ERG和MDM2表達(dá)與前列腺癌分級(jí)的關(guān)系。結(jié)果 前列腺癌組織中ERG和MDM2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為33.3%和47.9%，在良性前列腺增生組未見(jiàn)表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ERG和MDM2蛋白表達(dá)與前列腺癌Gleason評(píng)分分級(jí)不相關(guān)(P>0.05)；但ERG與MDM2蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.831，P=0.001)。結(jié)論 ERG和MDM2蛋白在前列腺癌組織中的高表達(dá)，與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。前列腺癌中ERG蛋白表達(dá)與MDM2蛋白的異常表達(dá)密切相關(guān)說(shuō)明這兩個(gè)蛋白可能存在協(xié)同作用。

前列腺腫瘤；ERG；鼠雙微體2

前列腺癌在歐美國(guó)家其發(fā)病率和死亡率分別居第二位和第六位〔1〕，在我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)〔2〕，其病因機(jī)制的探究依然是相關(guān)研究人員關(guān)注的焦點(diǎn)。ERG為癌基因，是E26轉(zhuǎn)錄因子(ETS)的同源基因，ERG蛋白在血管的發(fā)生中起著重要作用，已有報(bào)道顯示ERG蛋白在前列腺癌中高表達(dá)〔3〕，近年其與腫瘤的關(guān)系越來(lái)越受到關(guān)注。鼠雙微體(MDM)2基因亦是一種原癌基因，是p53信號(hào)通路中的關(guān)鍵成員，在調(diào)控p53基因中發(fā)揮重要作用。MDM2在前列腺癌等多種腫瘤組織中都高表達(dá)〔4〕。那么，ERG與MDM2是否在信號(hào)通路中存在某種聯(lián)系，明確二者在前列腺癌組織中的表達(dá)及其相互關(guān)系，將有助于揭示二者生物學(xué)功能機(jī)制和前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸機(jī)制。本研究采用免疫組化方法檢測(cè)前列腺癌及良性前列腺增生標(biāo)本的ERG和MDM2蛋白表達(dá)情況，探討二者在前列腺癌中的表達(dá)情況及其相互關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 58例標(biāo)本均來(lái)自我院病理科，2011年11月1日至2013年5月31日行超聲引導(dǎo)下前列腺穿刺術(shù)或前列腺切除術(shù)后的前列腺組織蠟塊。其中前列腺癌48例為病例組，平均年齡(72.17±6.82)歲；良性前列腺增生10例為對(duì)照組，平均年齡(65.20±7.77)歲。所有病例組中有吸煙史14例，飲酒史7例；所有對(duì)照組中有吸煙史4例，飲酒史2例。按2004年修訂的Gleason評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行病理分級(jí)：高分化組Gleason評(píng)分<7分14例，中分化組Gleason評(píng)分=7分23例，低分化組Gleason評(píng)分>7分11例。所有入選病例臨床資料完整，術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療及內(nèi)分泌治療等，所有病例均排除泌尿系統(tǒng)其他疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、冠心病和其他惡性腫瘤等。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑 兔抗人ERG、鼠抗人MDM2單克隆抗體及PV-6001二步法免疫組化檢測(cè)試劑均為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，SP系列試劑盒為ZYMED公司產(chǎn)品，HRP-DAB底物顯色試劑盒為北京天根生化科技公司產(chǎn)品。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 免疫組化方法分別用二步法(ERG抗體即用型)和SP法(MDM2抗體即用型)檢測(cè)上述標(biāo)本。石蠟標(biāo)本常規(guī)切片(4 μm)；常規(guī)脫蠟至水，根據(jù)抗體要求，對(duì)抗原進(jìn)行相應(yīng)高壓熱修復(fù)；3%H2O2去離子水孵育10 min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，PBS沖洗；根據(jù)抗體要求，ERG抗體直接滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS沖洗；滴加檢測(cè)試劑(山羊抗兔IgG抗體-HRP多聚體)，37℃孵育30 min，PBS沖洗；DAB顯色，自來(lái)水沖洗，蘇木精復(fù)染、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片；MDM2抗體滴加試劑A，室溫孵育20 min，棄去；滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS沖洗；滴加試劑B，37℃孵育15 min，PBS沖洗；滴加試劑C，37℃孵育15 min，PBS沖洗；DAB顯色，自來(lái)水沖洗，蘇木精復(fù)染、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。用已知陽(yáng)性標(biāo)本切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS取代一抗作空白對(duì)照。

1.4 免疫組化結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn) 由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師按照獨(dú)立、雙盲的原則閱片。ERG和MDM2以細(xì)胞核著黃色、棕黃色或棕褐色為表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞。采用二次計(jì)分法對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行半定量判斷。在400倍視野范圍內(nèi)隨機(jī)選擇3個(gè)不重復(fù)的視野，每個(gè)視野下計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，將各視野的平均陽(yáng)性率作為該切片的陽(yáng)性率。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%計(jì)0分，11%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%計(jì)3分。染色強(qiáng)度陰性為0分細(xì)胞核無(wú)著色，弱陽(yáng)性計(jì)1分為細(xì)胞核著黃色，中度陽(yáng)性計(jì)2分為細(xì)胞核著棕黃色，強(qiáng)陽(yáng)性計(jì)3分為細(xì)胞核著棕褐色。兩者計(jì)分相乘：0分為陰性(-)，1～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～6分為陽(yáng)性()，≥7分為強(qiáng)陽(yáng)性()。定義陰性表達(dá)為(-)，陽(yáng)性表達(dá)為(+～)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 ERG蛋白在前列腺組織中的表達(dá) 前列腺癌組織中，ERG蛋白的陽(yáng)性染色部位均位于細(xì)胞核，為黃色、棕黃色或棕褐色顆粒；ERG蛋白在病例組中的陽(yáng)性表達(dá)率為33.3%(16/48)，且多為中度陽(yáng)性或者強(qiáng)陽(yáng)性。見(jiàn)圖1。在對(duì)照組中未見(jiàn)表達(dá)，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。按Gleason評(píng)分分級(jí)，ERG蛋白在高分化組、中分化組和低分化組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為21.4%，34.8%和45.5%，三組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 MDM2蛋白在前列腺組織中的表達(dá) 前列腺癌組織中，MDM2蛋白陽(yáng)性部位定位于細(xì)胞核，為黃色、棕黃色或棕褐色顆粒，見(jiàn)圖1，其在病例組的陽(yáng)性表達(dá)率為47.9%(23/48)，在對(duì)照組未見(jiàn)表達(dá)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MDM2蛋白在高、中和低分化組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為50.0%、47.8%和45.5%，三組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖1 ERG及MDM2在前列腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)(DAB，×400)

2.3 ERG蛋白與MDM2蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)的相互關(guān)系 前列腺癌組織中16例ERG蛋白陽(yáng)性表達(dá)者中8例MDM2蛋白表達(dá)陽(yáng)性，32例ERG陰性表達(dá)者中15例MDM2蛋白表達(dá)陽(yáng)性。Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)表明：ERG蛋白與MDM2蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.831，P=0.001)。

3 討 論

ERG〔5〕在參與細(xì)胞的增殖、分化、血管生成以及細(xì)胞間的相互作用過(guò)程中發(fā)揮重要作用。ERG蛋白不僅在正常的血管上皮細(xì)胞表達(dá)〔4〕，而且還在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)〔6，7〕，如急性髓性白血病，尤文氏瘤、前列腺癌等。本研究檢測(cè)出有33.3%(16/48)的前列腺癌病例ERG蛋白高表達(dá)與前列腺癌不同病理分級(jí)無(wú)關(guān)，這與相關(guān)研究〔3，8〕結(jié)果一致。前列腺癌為實(shí)體腫瘤，其生長(zhǎng)依賴腫瘤的血管生成，內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡貫穿新生血管的發(fā)生和重塑〔9〕，而ERG蛋白參與調(diào)控內(nèi)皮特異性基因在血管形成、退化過(guò)程中的表達(dá)，對(duì)新生血管具有重要影響，此外ERG基因還可能影響細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)狀態(tài)〔10〕，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生。

許多腫瘤中都有MDM2蛋白的表達(dá)，如肺癌、乳腺癌、消化道惡性腫瘤和前列腺癌等〔11～13〕。本研究中MDM2蛋白在前列腺癌中高表達(dá)，但在不同病理分級(jí)中，MDM2蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異。MDM2蛋白主要功能是與p53蛋白結(jié)合，通過(guò)特異性泛素蛋白連接酶(E3)促使p53蛋白降解，進(jìn)而抑制p53對(duì)細(xì)胞周期的阻滯和凋亡。MDM2在諸多人類腫瘤中高表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)〔12〕。一般來(lái)說(shuō)，腫瘤的惡性程度高與MDM2高表達(dá)提示腫瘤更容易轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良。本研究結(jié)果提示ERG和MDM2在前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展中可能具有某些相互作用，在其信號(hào)通路上也可能存在某些聯(lián)系，但具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

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〔2015-11-23修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

寧夏自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(NZ13280；NZ1234)

陳志強(qiáng)(1971-),男,碩士,主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事泌尿系統(tǒng)腫瘤的臨床、影像、基礎(chǔ)研究。 楊文君(1973-)，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事腫瘤遺傳研究。

劉家趙(1985-),男,在讀碩士,主要從事前列腺腫瘤與病理研究。

R737.25

A

1005-9202(2017)05-1061-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.05.009

1 天津市海河醫(yī)院超聲科

2 寧夏醫(yī)科大學(xué)生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室