張慶昆

摘 要：目的：建立注射用炎琥寧有關(guān)物質(zhì)的檢查方法。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法研究注射用炎琥寧中有關(guān)物質(zhì)的含量；色譜柱條件為ODS HYPERSIL-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以0.05%的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值在2.50±0.05范圍內(nèi)）-甲醇（330∶650）作為流動相；在251nm的波長下進(jìn)行檢測；設(shè)定流速為1.0mL/min。結(jié)果：注射用炎琥寧與各已知雜質(zhì)及其他講解產(chǎn)物可明顯的分離開，且系統(tǒng)適用性良好，表明該法用于注射用炎琥寧有關(guān)物質(zhì)的測定是可行的。結(jié)論：該法在對炎琥寧有關(guān)物質(zhì)的檢查上簡便操作，專屬性強(qiáng)，靈敏度較高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于注射用炎琥寧有關(guān)物質(zhì)含量的檢查。

關(guān)鍵詞：炎琥寧；有關(guān)物質(zhì)；檢查方法

高效液相色譜法1985年被《中國藥典》收錄，是藥物分析中常用的一種檢測分析方法，其以均勻規(guī)則的顆粒（通常直徑在10μm以下）作為固定相，以流動相作為載體通過高壓輸液泵輸送，利用不同組分被流動相攜帶時(shí)對應(yīng)的移動的速度不同，而將各組分進(jìn)行分離和檢測。注射用炎琥寧是將穿心蓮內(nèi)酯從草本植物穿心蓮中提取出來，經(jīng)部分合成后制成穿心蓮內(nèi)酯半酯單鉀鹽，該成分生物活性較高，投加適量的輔料后制成的凍干制劑，該藥為抗病毒藥，可增強(qiáng)機(jī)體的抗菌的能力，清熱解毒、鎮(zhèn)靜消炎作用明顯，臨床上主要用于病毒性肺炎、扁桃體炎、病毒性上呼吸道感染、急性細(xì)菌性痢疾等癥狀的抗病毒治療[1]。雜質(zhì)的存在給藥物的實(shí)際療效和穩(wěn)定性帶來了影響，甚至危害人體健康，造成藥物的不良反應(yīng)。筆者通過高效液相色譜法（HPLC）對該藥品中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢查，對注射用炎琥寧的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行有效的控制?，F(xiàn)做如下報(bào)道：

1.儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260 Infinity液相色譜系統(tǒng)（自動進(jìn)樣器，并具有動態(tài)載樣和清洗功能），安裝了安捷倫實(shí)驗(yàn)室顧問軟件，配套全新光學(xué)設(shè)計(jì)的UV檢測器、ODS HYPERSIL-C18色譜柱；

1.2 試劑與藥品

注射用炎琥寧（哈爾濱珍寶制藥有限公司；樣品批號：20160107、20160108、20160109）及其對照品（批號1503208，純度為99.5%）；試驗(yàn)用水為超純水，甲醇為色譜純，其余所用分析試劑均為分析純。

2.實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件[2]

CAPCELL PAK UG80-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以1.0mL/min的穩(wěn)定速度作為流動相0.05%的磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值在2.50±0.05范圍內(nèi)）-甲醇（330∶650）的流速，甲醇（深圳市科天化玻儀器有限公司，色譜純）；25℃柱溫下，以20μL作為每批進(jìn)樣量，在251nm波長下進(jìn)行檢測。

2.2儲備液的制備

2.2.1制備供試品儲備液

精密稱取100mg注射用炎琥寧放至500mL容量瓶中，用流動相0.05%的磷酸二氫鉀溶液-甲醇（330∶650）將其全部溶解并稀釋至對應(yīng)刻度定容，搖勻后得到1mL溶液中含0.20mg注射用炎琥寧的溶液作為供試品儲備溶液。

2.2.2制備對照品溶液

精密量取供試品溶液5mL，至500mL容量瓶中，加入上述流動相稀釋至對應(yīng)刻度，搖勻后作為對照品溶液。

2.3線性關(guān)系及精密度試驗(yàn)[3]

將對照品減壓干燥12h，獲得脫水的穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯對照品，精密稱定適量該對照品，按2.2.1方法進(jìn)行稀釋，分別制成濃度為20、40、80、100、200、300mg/L的對照品溶液品，將以上不同濃度的對照品溶液在“2.1”條件下分別抽取20μL進(jìn)樣，將濃度與其對應(yīng)的峰面積進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得出方程：A=0.0874X+0.4034（r=0.99999，n=9），20～300μg/mL范圍內(nèi)穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯濃度與對應(yīng)的峰面積線性關(guān)系良好。精密量取在“線性關(guān)系”內(nèi)同一濃度的對照品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，RSD為0.19%，表明精密度良好，詳見表1。

2.4樣品有關(guān)含量測定及限度[4]

在3批供試品儲備液中各選取3支共9個(gè)樣品，稀釋為80mg/L的供試品溶液，同樣在“2.1”的指定條件下進(jìn)樣20μL，根據(jù)對應(yīng)的峰面積，帶入線性回歸方程得出分析結(jié)果，詳見表2。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取單批次（批號20160108）注射用炎琥寧供試品儲儲備液，按以上方法，單獨(dú)測定6份，每份注射用炎琥寧含量（%）分別為98.07、98.18、97.04、98.15、97.26、97.23，平均97.66mg/g，RSD為0.58%，有良好的重復(fù)性。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]

取線性關(guān)系下的注射用炎琥寧供試品溶液，用流動相稀釋成高、中、低（100，10，1.0mg/L）3個(gè)濃度，陰涼條件下保存，在0～8h內(nèi)，每隔2h液相色譜儀進(jìn)樣分析，以峰面積變化考察樣品穩(wěn)定性，RSD為0.45%。說明本品在8h內(nèi)穩(wěn)定較好。

3.討論

有關(guān)文獻(xiàn)提供線索指出以醋酸鹽-乙腈系統(tǒng)、乙腈-0.01mol/L磷酸鹽系統(tǒng)為流動相時(shí)，檢測所得峰會受到其他雜峰干擾，分離效果不盡如人意，根據(jù)不斷的實(shí)驗(yàn)調(diào)整，選取0.05%的磷酸二氫鉀溶液（pH 2.50±0.05）-甲醇（330∶650）為流動相，峰形有良好的對稱性且與其他峰形明顯分開[6-8]。

本次檢測結(jié)果顯示，高效液相色譜法在測定注射用炎琥寧含量的領(lǐng)域很有可行性，通過多次比較試驗(yàn)，優(yōu)化了部分檢測方法，提高其質(zhì)量檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度，通過對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析，該方法在控制藥品質(zhì)量方面很有幫助，且對樣品檢測條件無特殊要求要求，儀器及操作條件很容易滿足，操作方便，且有良好的重現(xiàn)性和專屬性[9-10]。本實(shí)驗(yàn)方法研究可作為注射用炎琥寧含量的檢驗(yàn)的參考，并期待隨著技力量平和科技水平的不斷發(fā)展，該方法能有進(jìn)一步的突破，為人類創(chuàng)造更好的經(jīng)濟(jì)、社會效益。

參考文獻(xiàn)

[1] 王愛紅. HPLC法測定注射用炎琥寧的含量[J]. 海峽藥學(xué)， 2015（8）：48-50.

[2] 申穎， 申和平. 注射用炎琥寧有關(guān)物質(zhì)檢查方法探討[J]. 臨床合理用藥雜志， 2010， 03（22）：58-58.

[3] 徐晨， 張根元， 王德才，等. HPLC測定片劑中的鹽酸普拉克索[J]. 華西藥學(xué)雜志， 2014， 29（4）：428-430.

[4] 梁建成， 黃義昆， 張三平，等. 高效液相色譜法測定炎琥寧注射劑的含量及有關(guān)物質(zhì)[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志， 2007， 27（9）：1329-1330.

[5] 申安， 樊青義， 趙雨晴，等. 鹽酸氨溴索注射液有關(guān)物質(zhì)檢查方法研究[J]. 河南醫(yī)學(xué)研究， 2015（10）：30-34.

[6] 韋日偉， 王昆， 吳先富，等. 藥物中有關(guān)物質(zhì)檢測方法的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J]. 中國藥師， 2015（5）：851-855.

[7] 錢永健， 陳永壯. 高效液相色譜法測定注射用炎琥寧含量[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2015， 11（4）：43-44.

[8] 景恒翠， 王國生， 于陽. 高效液相法測定注射用炎琥寧的含量[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2010， 6（2）：24-25.

[9] 趙敏. 反相高效液相色譜法測定注射用炎琥寧與注射用更昔洛韋的配伍使用[J]. 中外健康文摘， 2012， 09（22）：135-136.

[10] 韋曦， 歐陽小琳， 許盈，等. 炎琥寧的含量測定及其與常用輸液和藥物的配伍變化[J]. 兒科藥學(xué)雜志， 2012， 18（8）：28-31.