王馭風(fēng)，錢(qián)衛(wèi)，夏澍

(鹽城市第三人民醫(yī)院，江蘇鹽城224021)

HBV不同感染狀態(tài)者血清IL-21、IFN-γ水平變化及其臨床意義

王馭風(fēng)，錢(qián)衛(wèi)，夏澍

(鹽城市第三人民醫(yī)院，江蘇鹽城224021)

目的 探討不同HBV感染狀態(tài)者血清IL-21、IFN-γ水平變化及其臨床意義。方法 選擇HBV感染者74例，根據(jù)感染狀態(tài)分為急性乙肝組15例、慢性HBV攜帶組17例、慢性乙肝組23例、非活動(dòng)性HBsAg攜帶組19例，另選體檢健康者20例作為對(duì)照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組血清IL-21、IFN-γ。結(jié)果 急性乙肝組血清IL-21、IFN-γ水平明顯高于對(duì)照組、慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組和非活動(dòng)性HBsAg攜帶組(P均<0.05)；慢性乙肝組血清IL-21水平明顯高于慢性HBV攜帶組(P<0.05)，對(duì)照組、慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組和非活動(dòng)性HBsAg攜帶組血清IFN-γ水平組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)。對(duì)照組、急性乙肝組、慢性HBV攜帶組、非活動(dòng)性HBsAg攜帶組血清IL-21與IFN-γ水平均呈正相關(guān)(r分別為0.896、0.734、0.693、0.701，P均<0.05)，慢性乙肝組血清IL-21與IFN-γ水平無(wú)相關(guān)性(r=0.359，P>0.05)。結(jié)論 血清IL-21和IFN-γ水平可反映HBV感染狀態(tài)，可作為判斷乙肝嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

乙型肝炎病毒感染；白介素21；γ干擾素；發(fā)病機(jī)制

HBV感染是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界人口中約1/3曾感染HBV，每年約有100萬(wàn)人死于HBV感染所致的疾病[1]。HBV感染慢性化是由病毒本身和宿主免疫狀態(tài)共同決定的，其中宿主免疫狀態(tài)是決定HBV感染轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵[2]。在急性自限性HBV感染者體內(nèi)，T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)強(qiáng)烈，可控制和清除病毒，防止宿主再次發(fā)生感染；而慢性HBV感染者體內(nèi)相應(yīng)T細(xì)胞反應(yīng)缺失，T細(xì)胞數(shù)量和功能降低，是導(dǎo)致HBV感染慢性化的重要原因[3]。IL-21是由活化的CD4+T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，可促進(jìn)CD8+T細(xì)胞增殖并強(qiáng)化其細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)，而CD4+T細(xì)胞輔助CD8+T細(xì)胞在控制HBV感染慢性化過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]。2014年1月～2016年1月，我們觀察了HBV感染不同狀態(tài)者外周血IL-21、

IFN-γ水平及CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞在HBV感染慢性化過(guò)程中的變化?，F(xiàn)分析結(jié)果并探討其機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期選擇我院收治的HBV感染者74例，其中急性乙肝患者15例(急性乙肝組)，男9例、女6例，年齡(48.82±9.53)歲；慢性HBV攜帶者17例(慢性HBV攜帶組)，男12例、女5例，年齡(49.13±10.62)歲；慢性乙肝患者23例(慢性乙肝組)，男15例、女8例，年齡(47.91±8.64)歲；非活動(dòng)性HBsAg攜帶者19例(非活動(dòng)性HBsAg攜帶組)，男13例、女6例，年齡(48.78±8.39)歲。所有患者符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：急性乙肝：無(wú)乙肝病史，HBsAg陽(yáng)性，血清HBcAg-IgM陽(yáng)性，血清ALT、 總膽紅素升高或正常；慢性HBV攜帶：血清HBcAb、HBeAg、HBsAg和HBV-DNA陽(yáng)性，肝功能檢測(cè)指標(biāo)正常，肝臟B超未見(jiàn)異常；慢性乙肝：血清HBcAb、HBeAg、HBsAg和HBV-DNA陽(yáng)性，ALT持續(xù)升高，乙肝病程超過(guò)半年；非活動(dòng)性HBsAg攜帶[6，7]：血清HBsAg陽(yáng)性、HBeAg陰性、抗HBe陽(yáng)性或陰性，HBV DNA檢測(cè)不到(PCR法)或低于最低檢測(cè)限，1年內(nèi)連續(xù)隨訪3次以上，ALT均在正常范圍。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并甲肝、丙肝、丁肝、戊肝者；有遺傳性肝病、膽汁淤積性肝病和自身免疫性肝炎者；入組前6個(gè)月接受過(guò)抗HBV和免疫調(diào)節(jié)治療者。選擇同期在我院體檢健康者20例(對(duì)照組)，男13例、女7例，年齡(46.8±9.2)歲。各組性別、年齡具有可比性。各組血清ALT、AST水平及乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1、2。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。

表1 各組血清ALT、AST水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與急性乙肝組比較，#P<0.05；與慢性HBV攜帶組比較，△P<0.05；與慢性乙肝組比較，▲P<0.05。

表2 各組乙肝五項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果(例)

1.2 血清IL-21、IFN-γ檢測(cè) 各組均采集晨起空腹靜脈血5 mL，3 500 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃冰箱保存。采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)IL-21、IFN-γ。ELISA試劑盒購(gòu)于上海恒遠(yuǎn)生物有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作[6]。分析不同HBV感染狀態(tài)者血清IL-21與IFN-γ的關(guān)系。

2 結(jié)果

急性乙肝組血清IL-21、IFN-γ水平顯著高于慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組和非活動(dòng)性HBV攜帶組(P均<0.05)；慢性HBV攜帶組和慢性乙肝組血清IL-2、IFN-γ水平顯著低于急性乙肝組；見(jiàn)表3。Pearson直線(xiàn)相關(guān)分析顯示，對(duì)照組、急性乙肝組、慢性HBV攜帶組、非活動(dòng)性HBsAg攜帶組血清IL-21與IFN-γ水平均呈正相關(guān)(r分別為0.896、0.734、0.693、0.701，P均<0.05)；而慢性乙肝組血清IL-21與IFN-γ水平無(wú)相關(guān)性(r=0.359，P>0.05)。

表3 各組血清IL-21、IFN-γ水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與急性乙肝組比較，#P<0.05；與慢性HBV攜帶組比較，△P<0.05。

3 討論

HBV感染的臨床表現(xiàn)呈多樣性。HBV感染是乙型肝炎疾病進(jìn)展的始發(fā)因素，HBV感染后患者的免疫因素在病毒清除、持續(xù)感染及肝細(xì)胞損傷過(guò)程中有重要作用，但其免疫作用機(jī)制仍不十分明確。一般認(rèn)為HBV感染機(jī)體后的免疫應(yīng)答反應(yīng)(主要是CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞參與的免疫機(jī)制引起肝細(xì)胞的損傷)可影響疾病的演進(jìn)及轉(zhuǎn)歸過(guò)程[7，8]。

CD8+T細(xì)胞是HBV感染模型中清除病毒最主要的效應(yīng)T細(xì)胞，感染早期由HBV刺激產(chǎn)生的特異性CD8+T細(xì)胞具有一定的抗病毒作用，且CD8+T細(xì)胞的生成需要活化的HBV相關(guān)CD4+T細(xì)胞輔助，而慢性HBV感染患者體內(nèi)往往出現(xiàn)CD4+T細(xì)胞功能耗竭[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，HBV合并HCV感染者CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞相互作用共同起到清除病毒作用，故提高慢性HBV感染患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞數(shù)量、恢復(fù)其功能以達(dá)到清除HBV是乙肝治療的理想終點(diǎn)[12]。

IL-21是2000年發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞因子，由活化的CD4+T細(xì)胞分泌，在自身免疫性疾病、腫瘤性疾病及控制病毒感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用。有研究證實(shí)，IL-21能夠促進(jìn)CD3抗體活化的胸腺細(xì)胞，成熟外周血T細(xì)胞的增殖，可通過(guò)增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的活化、增殖促進(jìn)功能耗竭的CD8+T細(xì)胞對(duì)病毒的控制，顯著提升CD8+T細(xì)胞功能，促進(jìn)B細(xì)胞分泌抗體，繼而有效清除病毒[13～15]，IL-21水平與HBc18～27特異性的產(chǎn)IFN-γ的CD8+T細(xì)胞相關(guān)，IL-21可維持CD8+T細(xì)胞的抗病毒作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，在一定程度上病情嚴(yán)重程度與Th17細(xì)胞是否處于功能活躍狀態(tài)呈正相關(guān)，Th17細(xì)胞是重要的IL-21分泌細(xì)胞，可通過(guò)IL-21產(chǎn)生相應(yīng)的免疫效應(yīng)，在HBV感染炎癥損傷嚴(yán)重的重度慢性乙肝的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，在慢加急性肝功能衰竭中較高水平的IL-21可以活化T細(xì)胞或B細(xì)胞清除病毒感染或通過(guò)釋放炎性因子損傷肝細(xì)胞，也可通過(guò)活化肝星狀細(xì)胞影響HBV感染相關(guān)的肝損傷，因此中和IL-21可能是治療HBV感染相關(guān)肝損傷的有效措施。本研究急性乙肝組血清IL-21水平顯著高于慢性HBV攜帶組、慢性乙肝組、非活動(dòng)性HBsAg攜帶組和對(duì)照組，表明IL-21在急性HBV感染患者體內(nèi)發(fā)揮了促進(jìn)機(jī)體抗病毒免疫反應(yīng)的作用。本研究HBV攜帶組(即免疫耐受期患者)血清IL-21水平顯著降低，提示IL-21表達(dá)降低在HBV感染慢性化中發(fā)揮重要作用，慢性乙肝患者體內(nèi)存在CD4+T細(xì)胞功能降低、數(shù)量減少，無(wú)法發(fā)揮其免疫增強(qiáng)功能，抗病毒能力受到抑制[16]。IFN-γ是重要的抗病毒免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，其除可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)來(lái)抑制HBV的合成外，還可通過(guò)非溶細(xì)胞機(jī)制直接抑制HBV復(fù)制。在轉(zhuǎn)基因小鼠的試驗(yàn)中，CD8+T細(xì)胞、Th細(xì)胞和NK細(xì)胞在識(shí)別HBV的病毒抗原后會(huì)通過(guò)分泌IFN-γ抑制肝臟中的HBV復(fù)制。Suri等[17]研究發(fā)現(xiàn)，IFN-γ除能通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)抑制HBV的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制外，還能通過(guò)非細(xì)胞溶解/損傷機(jī)制直接抑制肝細(xì)胞內(nèi)HBV的復(fù)制[18]。本研究急性乙肝組血清IFN-γ水平明顯高于HBV攜帶組和非活動(dòng)性HBsAg攜帶組，IFN-γ水平變化呈現(xiàn)急性乙肝組>慢性乙肝組>HBV攜帶組的趨勢(shì)，與以往研究報(bào)道相似。

本研究還發(fā)現(xiàn)，IL-21和IFN-γ在不同HBV感染者體內(nèi)具有良好的相關(guān)性，其原因可能為IL-21主要由CD4+T細(xì)胞分泌，能促進(jìn)CD8+T細(xì)胞增殖并且強(qiáng)化CD8+T細(xì)胞抗病毒功能，而IFN-γ是CD8+T細(xì)胞功能活化的指標(biāo)，可以反映CD8+T細(xì)胞功能，CD4+T細(xì)胞活化產(chǎn)生大量IL-21，從而促進(jìn)了CD8+T細(xì)胞的抗病毒能力。

綜上所述，血清IL-21和IFN-γ水平可反映HBV感染狀態(tài)，可作為判斷乙肝病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

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